不同色譜柱對克拉霉素膠囊含量測定結(jié)果比較

吳征（通訊作者）

（貴州省黔南州食品藥品檢驗所 貴州 都勻 558000）

克拉霉素（Clarithromycin）為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，在體內(nèi)對部分細(xì)菌如金黃色葡萄球菌、鏈球菌、流感嗜血桿菌等的抗菌活性比紅霉素強，在臨床上得到日益廣泛的應(yīng)用[3]。2015版《中國藥典》收載的克拉霉素及其制劑含量檢測采用高效液相色譜法（HPLC）測定，系統(tǒng)適用性條件增加了拖尾因子的要求，理論板數(shù)無明確規(guī)定。在檢驗工作中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用不同品牌及型號的色譜柱時，所得結(jié)果差異較大。為此，筆者使用5款不同品牌材質(zhì)的C18柱對克拉霉素膠囊進行了含量檢測，篩選出適合克拉霉素膠囊含量測定的色譜柱。

1.儀器與試藥

所使用的儀器型號為Agilent 1260型高效液相色譜儀，配置紫外檢測器，使用試藥為中國食品藥品檢定研究院生產(chǎn)的克拉霉素對照品（含量：97.2%，批號：130558-201303），分別用A、B、C、D為4個廠家生產(chǎn)的克拉霉素膠囊編號，乙腈為色譜純，其他余試劑為分析純。

2.實驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱1：Agilent Zorbax SB-C18柱，150mm×4.6mm，5μm；色譜柱2：COSMOSIL 5C18-PAQ柱，150mm×4.6mm，5μm；色譜柱3：Thermo ODS-2Hypersil柱，250mm×4.6mm，5μm；色譜柱4：大連依利特Hypersil BDS C18，250mm×4.6mm，5μm；色譜柱5：大連依利特SinoChrom ODS-BP C18，250mm×4.6mm，5μm。

流動相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀9.11g，加水溶解并稀釋至1000ml，加三乙胺2ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.5）-乙腈(600∶400)。檢測波長為210nm；流速為1.0mL.min-1；柱溫：45℃[1]。

2.2 溶液的制備

對照品溶液的制備：精密稱取克拉霉素對照品約17.5mg，置50mL容量瓶中，加流動相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：取供試品內(nèi)容物適量（相當(dāng)于克拉霉素35mg），精密稱定，置100ml量瓶中，臨用前加流動相適量，超聲處理提取10分鐘，放置至室溫，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得[1]。

3.實驗結(jié)果

嚴(yán)格遵照擬定色譜條件，得到結(jié)果1，具體見表1、表2和表3，對照品圖譜見圖1。色譜柱1、3、4、5的拖尾因子均大于2.0，依據(jù)中國藥典2015年版四部規(guī)定[2]，將流動相比例更改為：磷酸鹽緩沖液-乙腈(550∶450)，其余色譜條件不變，再次測定得到結(jié)果2，所有色譜柱拖尾因子均不大于2.0符合藥典規(guī)定，具體見表4、表5和表6。

圖1

表1 第一次實驗含量測定結(jié)果(%)

表2 第一次實驗拖尾因子測定結(jié)果

表3 第一次實驗柱效測定結(jié)果

表4 第二次實驗含量測定結(jié)果(%)

表5 第二次實驗拖尾因子測定結(jié)果

表6 第二次實驗柱效測定結(jié)果

4.討論

第一次實驗中色譜柱2、3、4含量測定結(jié)果相差不大，色譜柱1、2峰形較好，色譜柱4柱效不高，峰形亦較差，拖尾因子偏大；第二次實驗中所有數(shù)據(jù)拖尾因子均符合系統(tǒng)適用性要求，從表4可見：要想得到良好的峰形，即拖尾因子符合系統(tǒng)適用性要求，短柱柱效都達到5000以上，長柱柱效更是達10000左右，因此對色譜柱性能要求較高。但色譜柱1、2、5部分樣品含量測定結(jié)果超出實驗誤差范圍，與第一次相比差異較大，通過對比圖譜分析發(fā)現(xiàn)，其中克拉霉素峰變大同時雜質(zhì)峰變小，原因是因為流動相中有機相增加使極性變小，雜質(zhì)不能有效分離從而造成差異。本次實驗可以看出色譜柱2對克拉霉素能有穩(wěn)定檢測結(jié)果且峰形較好，值得充分重視，適用于克拉霉素的質(zhì)量控制。