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    高效液相色譜法測定磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量

    2018-12-07 05:14:40楊成陸華龍通訊作者陜西合成藥業(yè)股份有限公司陜西西安715100
    醫(yī)藥前沿 2018年35期
    關鍵詞:硝唑磷酸供試

    楊成 陸華龍(通訊作者)(陜西合成藥業(yè)股份有限公司 陜西 西安 715100)

    磷酸左奧硝唑酯二鈉為化學藥物1.1類新藥。該新藥為奧硝唑的左旋異構體磷酸酯衍生物的鈉鹽,作為左旋奧硝唑的前體藥物,磷酸左奧硝唑酯二鈉在體內(nèi)可以迅速分解為有效成分左旋奧硝唑而起到抗厭氧菌的作用。主要用于:用于治療由脆弱擬桿菌、狄氏擬桿菌、多形擬桿菌、普通擬桿菌、梭狀芽胞桿菌、真桿菌、消化球菌和消化鏈球菌、幽門螺桿菌、黑色素擬桿菌、梭桿菌、牙齦類桿菌等敏感厭氧菌所引起的多種感染性疾病。迄今為止,尚未見磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量方法的相關報道,鑒于此,我們研究開發(fā)了磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量測定方法采用高效液相色譜法測定,旨在尋找一種更加科學合理的檢測方法。

    1.儀器與試藥

    儀器:美國 Thermo U3000高效液相色譜儀,包括 U3000四元泵,U3000可變檢測波長, U3000柱溫箱,U3000自動進樣器。

    試藥:磷酸左奧硝唑酯二鈉由陜西合成藥業(yè)股份有限公司提供。

    對照品:磷酸左奧硝唑酯二鈉由陜西合成藥業(yè)股份有限公司提供。

    甲醇為色譜純,其他試劑均為分析純。

    2.方法與結果

    2.1 色譜條件

    色譜柱:Welch,XtimateTM-C18,(4.6×250mm Column 5-Micron)檢測波長:321nm;柱溫:30℃;流速:1.0ml/min;流動相:以含0.01%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(用三乙胺調(diào)pH至6.5)-甲醇(85:15)。理論板數(shù)按磷酸左奧硝唑酯二鈉峰計算應不低于2500。

    2.2 對照品溶液的制備

    取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量,精密稱定,加流動相溶解并稀釋制成每 1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.04mg的溶液,即得。

    2.3 供試品溶液的制備

    取磷酸左奧硝唑酯二鈉適量,精密稱定,加流動相溶解并稀釋制成每 1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.04mg的溶液, 即得。

    2.4 專屬性試驗

    取流動相溶液按上述色譜條件測試。結果在磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品出峰位置未見其它雜質(zhì)的干擾峰(見圖1~3),說明按本文的試驗條件測定, 空白溶劑無干擾。

    圖1 空白溶劑圖譜

    圖2 供試品溶液圖譜

    圖3 對照品溶液圖譜

    2.5 線性關系考察

    精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量,用流動相溶解并稀釋成每1ml含磷酸左奧硝唑酯二鈉91.8、81.6、71.4、61.2、51.0、40.8、30.6、20.4ug的溶液,精密量取各溶液20μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以峰面積Y為縱坐標,以濃度X為橫坐標,繪制標準曲線,見表1。

    表1 含量測定標準曲線

    結論:線性回歸方程Y=0.5341X+0.7177 R2=0.9994 n=8磷酸左奧硝唑酯二鈉在91.8~20.4μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關系較好。

    2.6 重復性試驗

    精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉供試品適量,共六份,分別用流動相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液,作為供試品溶液,精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量,用流動相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液,作為對照品溶液。取供試品和對照品溶液各20μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標法以峰面積計算含量,試驗結果見表2。

    表2 磷酸左奧硝唑酯二鈉含量測定重復性結果

    2.7 溶液穩(wěn)定性試驗

    精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量,用流動相溶解并稀釋制成含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug/ml的溶液,室溫下放置0、2、4、6、8、10、12小時后測定,結果見表3。

    表3 含量測定溶液放置穩(wěn)定性

    2.8 回收率試驗

    供試品溶液的制備:精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉32mg、40mg、48mg各三份,分別置9個10ml量瓶中,分別用流動相溶解,搖勻,精密量取1ml,置100ml量瓶中,用上述溶劑稀釋制成每1ml中約含磷酸左奧硝唑酯二鈉32ug、40ug、48ug的溶液,即得80%、100%、120%的樣品溶液各三份;另精密稱取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量,同法制成每1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉40ug的溶液,作為對照品溶液,照上述色譜條件測定,計算出本品含量測定的回收率,結果見表4。

    表4 含量測定回收率試驗結果

    2.9 含量測定

    取磷酸左奧硝唑酯二鈉適量,精密稱定,加流動相溶解并稀釋制成每1ml約含磷酸左奧硝唑酯二鈉0.5mg的溶液,作為供試品溶液,精密量取20μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取磷酸左奧硝唑酯二鈉對照品適量,精密稱定,同上操作,作為對照品溶液,同法測定。按外標法以峰面積計算,結果見表5。

    表5 含量測定結果

    3.討論

    我們選用高效液相色譜法測定磷酸左奧硝唑酯二鈉的含量,使其和制劑測定方法相統(tǒng)一,減少各方法間的誤差,準確的控制制劑生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的含量,避免因原料含量中磷酸左奧硝唑酯二鈉測定過高,導致投料量小,給中間體和成品帶來含量過低重新加料的麻煩。

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