混合染色法在對(duì)患者進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果

馮艷鈴

（成都市雙流區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，四川 成都 610200）

進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)是診斷血液病的主要檢驗(yàn)方法。在進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)時(shí)，不僅要求檢驗(yàn)人員熟練掌握各種異常細(xì)胞的形態(tài)，還需要保證涂片有良好的染色效果，否則極易發(fā)生誤診、漏診[1]。臨床上進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)時(shí)，對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色的常用方法有多種。使用不同染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色所獲得的染色效果存在一定的差異。本次研究主要探討使用瑞氏染色法、姬氏染液法和混合染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色處理的效果。

1 資料及方法

1.1 一般資料

本次研究的對(duì)象為2017年9月至2018年2月期間在四川大學(xué)華西醫(yī)院進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)的80例患者的骨髓涂片。在這80例患者中，有男性51例，女性29例；其平均年齡為（47.49±3.64）歲。

1.2 研究方法

采集這80例患者的新鮮脊髓液制作成涂片，分別用瑞氏染色法、姬氏染液法和混合染色法對(duì)涂片進(jìn)行染色。對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色的方法是：1）對(duì)患者進(jìn)行常規(guī)的骨髓穿刺，抽取其新鮮的脊髓液作為檢驗(yàn)標(biāo)本。2）由專業(yè)人員將檢驗(yàn)標(biāo)本制作成涂片后，使用甲醇溶液對(duì)涂片進(jìn)行固定。3）本次研究使用姬氏染色液屬于原液。瑞士染色液在配置好后存放一段時(shí)間（存放的時(shí)間不低于3個(gè)月）。4）分別使用瑞氏染色法、姬氏染液法和混合染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色。對(duì)涂片進(jìn)行混合染色的方法是：在涂片上滴上5滴瑞氏染色液，需確保染色液覆蓋整個(gè)標(biāo)本，對(duì)涂片進(jìn)行1 min左右的固定。按照1:2的比例將姬氏染色液滴加到涂片上，待其混勻充分后再靜置一段時(shí)間即可。5）在染色完成后的 5 min、10 min、20 min、30 min、1 h、1.5 h和 2 h，在顯微鏡下對(duì)涂片進(jìn)行觀察。6）使用模糊數(shù)字法判定骨髓涂片染色效果的評(píng)分。將染色效果較差，無(wú)法對(duì)細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行有效辨別且細(xì)胞輪廓較模糊的涂片判定為0分；將染色效果佳，有清晰的細(xì)胞結(jié)構(gòu)且細(xì)胞漿與細(xì)胞核差別明顯的涂片判定為10分。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察使用這三種染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色的效果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將本次研究中的數(shù)據(jù)錄入到SPSS22.0軟件中進(jìn)行處理，計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與使用姬氏染色法和瑞氏染色法相比，用混合染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色效果的評(píng)分更高，P＜0.05。使用姬氏染色法和瑞氏染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色效果的評(píng)分相比，P＞0.05。詳見(jiàn)表1。

表1 用這三種染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色效果評(píng)分的比較（分，±s）

表1 用這三種染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色效果評(píng)分的比較（分，±s）

注：*與瑞氏染色法和姬氏染色法相比， P＜0.05。

染色方法 5 min 10 min 20 min 30 min 1 h 1.5 h 2 h瑞氏染色法 1.71±0.19 2.52±0.20 3.82±0.31 5.48±1.62 7.32±0.51 5.06±0.82 3.14±0.34姬氏染色法 1.61±0.29 2.95±0.30 3.60±0.53 5.32±1.55 6.91±0.30 4.28±0.69 3.28±0.49混合染色法 3.92±0.31* 5.36±0.40* 7.01±0.49* 8.95±0.34* 9.32±0.21* 8.83±0.22* 8.35±0.23*

3 討論

相關(guān)的研究結(jié)果顯示，髓液涂片的染色效果會(huì)直接影響到檢驗(yàn)人員對(duì)其中血細(xì)胞形態(tài)的觀察結(jié)果。這是因?yàn)?，骨髓涂片的染色效果若未達(dá)理想狀態(tài)，就無(wú)法準(zhǔn)確地辨別其中細(xì)胞的異常形態(tài)及特殊結(jié)構(gòu)，進(jìn)而導(dǎo)致相關(guān)疾病的漏診、誤診[2]。張紅祥等[3]的研究表明，影響髓液涂片染色效果的因素較多，如涂片的厚度與薄度、染色液的成熟度、染色時(shí)間的長(zhǎng)短、染色液的溫度等。有研究表明，只要達(dá)到“長(zhǎng)時(shí)間及低濃度”的染色要求，就可確保涂片的染色效果具有明顯的層次感，達(dá)到理想的染色效果。瑞氏染色法對(duì)細(xì)胞核具有良好的染色反應(yīng)，但對(duì)細(xì)胞質(zhì)的染色效果卻相對(duì)較差；姬氏染色法的染色效果與瑞氏染色法的染色效果相反。因此，可采取混合染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色，以充分融合瑞氏染色法和姬氏染液法的優(yōu)點(diǎn)，使涂片獲取最佳的染色效果。在對(duì)骨髓涂片混合染色時(shí)，需先用姬氏染液對(duì)其進(jìn)行染色處理，再用瑞氏染色液對(duì)其進(jìn)行染色處理，以便獲得良好的染色效果。這是因?yàn)?，姬氏染液的溶解度可在甲醇溶液中達(dá)到理想的狀態(tài)，瑞氏染色液可在甘油中達(dá)到理想的溶解度。本次研究的結(jié)果顯示，與使用姬氏染色法和瑞氏染色法相比，用混合染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色效果的評(píng)分更高，P＜0.05。使用姬氏染色法和瑞氏染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色效果的評(píng)分相比，P＞0.05。這說(shuō)明，在進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中使用混合染色法對(duì)骨髓涂片進(jìn)行染色，可獲得理想的染色效果。筆者對(duì)本次研究總結(jié)如下：1）對(duì)骨髓涂片進(jìn)行混合染色后，在5 min時(shí)其染色的效果不太理想，在20 min～1 h時(shí)其染色效果理想，在2 h后其染色效果呈下降的趨勢(shì)（即隨著染色時(shí)間的增加，染色效果越來(lái)越差）。2）進(jìn)行混合染色可使骨髓細(xì)胞具有較強(qiáng)的染色對(duì)比效果，使骨髓細(xì)胞漿能夠表現(xiàn)出藍(lán)色狀態(tài)，并使骨髓細(xì)胞核表現(xiàn)出紫紅色狀態(tài)（這兩者之間有明顯的區(qū)別），而且涂片的整體染色效果具有明顯的層次感，便于檢驗(yàn)人員深入地觀察細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，仔細(xì)地鑒別骨髓中的幼稚細(xì)胞。