軟棗獼猴桃組培繁殖中不定芽誘導技術研究

顧福明 沈晴 建德鋒

【摘 要】 本試驗以軟棗獼猴桃的腋芽作為外植體，采用不同配方進行愈傷組織誘導培養(yǎng)，通過比較得出MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L為最佳愈傷組織誘導配方；然后將愈傷組織切塊進行不定芽誘導，得出配方MS+6-BA 0.4mg/L分化率最高，所以該配方為最佳配方。

【關鍵詞】 不定芽；軟棗獼猴桃；組培

[Abstract] In this study， axillary buds of actinidia chinensis of soft date were used as explants for callus induction culture using different formulas. By comparison， MS+ 6-ba 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L were obtained as the optimal callus induction formula. Then， adventitious bud induction was performed on the cut of callus， and the formula MS+ 6-ba 0.4mg/L had the highest differentiation rate， so this formula was the best one.

[Keywords] adventitious buds； Chinese gooseberry； seed

軟棗獼猴桃，獼猴桃科獼猴桃屬，又稱軟棗子，學名Actinidia arguta （Sieb. & Zucc） Planch. ex Miq.。該植物為一高大藤本，長達30cm，葉寬卵形或橢圓形，長5-15cm，寬3-10cm，頂端突尖，基部圓形或微心形，葉緣銳鋸齒，葉背面綠色；花白色，3-6朵腋生，花徑2cm，花藥暗紫色；果球形至橢圓形，徑約2.5cm；花期6-7月，果期9-10月。軟棗獼猴桃的果實可生食，具有強壯、解熱、收斂之效，也可釀酒或制成果醬、果脯食用，此外，該植物也可應用于園林綠化中，作為棚架及立體綠化材料。目前苗圃中軟棗獼猴桃常用的繁殖方法為扦插繁殖，但扦插繁殖會受到季節(jié)的限制，另外生根率并不高。因此本實驗嘗試采用組培繁殖技術進行繁殖，但在組培繁殖中，中間繁殖體的獲得極為關鍵，該試驗試以軟棗獼猴桃的腋芽作為外植體，誘導其形成愈傷組織，再進一步誘導愈傷組織形成不定芽，然后以這些不定芽為中間繁殖體進行擴繁。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

該試驗2018年5月～2018年9月于吉林農業(yè)科技學院花卉組培實驗室進行。試驗前選取生長良好、無病蟲害的軟棗獼猴桃植株1棵（吉林農業(yè)科技學院校園內），作為外植體采集來源母樹，進行重點看護，在開始接種前，到母樹上采取帶腋芽莖段若干備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)及配方 愈傷組織誘導培養(yǎng)基采用4個配比，基本培養(yǎng)基均采用MS，其中添加不同配比的6-BA和NAA，分別記作：A1：MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1mg/L；A2：MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L；A3：MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.1mg/L；A4：MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.2 mg/L。不定芽誘導培養(yǎng)基設置5個配方，采用在MS基本培養(yǎng)基中添加不同配比的6-BA，分別記作：J1：MS+6-BA 0.2 mg/L；J2：MS+6-BA 0.4 mg/L；J3：MS+6-BA 0.6 mg/L；J4：MS+6-BA 0.8 mg/L；J5：MS+6-BA 1.0mg/L。

1.2.2培養(yǎng)過程 將采集回來的帶腋芽莖段截成2～3cm長的小段，先用流水沖洗20min，然后先后用75%的酒精浸泡10min、0.1%的升汞溶液浸泡3s，最后用無菌水沖洗3～5次后備用。超凈臺內接種時將腋芽剝離后切割為0.5cm大小，接種到4個愈傷組織誘導培養(yǎng)基配方上，待形成愈傷組織并等其生長結構致密后，切成0.5cm小塊，接種到4種不定芽誘導培養(yǎng)基配方中，每瓶接3塊，每配方接20瓶。整個培養(yǎng)期間注意觀察和記錄各種實驗數據，培養(yǎng)過程中控制溫度25℃-28℃，光照2000～3000 Lx，光照時間8～12h，濕度80%～85%。

2 結果與分析

2.1 愈傷組織誘導情況 見表1。

由表1可見，4種愈傷組織誘導培養(yǎng)基中均誘導出了愈傷組織，說明選用6-BA和NAA兩種激素是正確的。4種培養(yǎng)基中，A1愈傷組織出現(xiàn)時間最晚，并且愈傷組織誘導率最低，A4出現(xiàn)愈傷組織的時間最早，但是愈傷組織誘導率不是很大。從第25d誘導率統(tǒng)計結果來看，隨著NAA添加量的增加，A3誘導率達到最大，A4誘導率出現(xiàn)下降，說明6-BA添加量少，有利于生成愈傷組織，但并不是越少就越好。A3配方的瓶中，雖然第12d形成愈傷組織，但這些愈傷組織長勢非常旺盛，并且質量最好?？梢?，在4個配方中，愈傷組織誘導的最佳配方為A3：MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.1mg/L。

2.2 不定芽誘導分化情況

2.2.1 不同培養(yǎng)基上分化系數 愈傷組織轉接到不定芽分化培養(yǎng)基上，均分化形成了不定芽，到轉瓶第30d統(tǒng)計每個配方的分化率，見圖1。

由圖1可知，在5個不定芽分化培養(yǎng)基中，均分化出了不定芽。但5個配方中的分化情況存在一定的差異，J2培養(yǎng)基中分化率最高，達到75%，其次為J3、J4、J1、J5。綜合比較得出J2分化效果最好。

2.2.2 已分化培養(yǎng)基上分化情況 見表2。

由表2可知，J2、J4形成不定芽的時間比較早，從平均分化出不定芽的個數來看，J2配方最多，其次為J4配方。結合圖1，可以得出J2、J4配方較優(yōu)，形成不定芽的時間較早、分化不定芽的數量多。綜合得出，在5個不定芽分化培養(yǎng)基中，J2（MS+6-BA0.4mg/L ）、J4（MS+6-BA 0.8mg/L）配方均適合軟棗獼猴桃愈傷組織塊進行不定芽的誘導，但J2不定芽分化率較高，所以J2（MS+6-BA0.4mg/L ）配方最為適合。

3 結論與討論

通過軟棗獼猴桃組培繁殖中不定芽誘導技術研究，得出MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L配方適合誘導愈傷組織，配方MS+6-BA 0.4mg/L適合不定芽的分化。軟棗獼猴桃種子數量多、取種容易，而且發(fā)芽率很高，但是幼苗對水分要求高，所以只要滿足濕度條件就能大量繁殖砧木苗【4】?，F(xiàn)今，軟棗獼猴桃園林應用還沒有被大規(guī)模的使用，果實開發(fā)的力度還不夠，苗圃育苗僅為少量，關于其組培快速繁殖方面的研究也比較少，本試驗利用腋芽進行組織培養(yǎng)，得出了愈傷組織、不定芽兩個階段的最佳培養(yǎng)方式，希望該試驗的結論能為整個軟棗獼猴桃的離體快繁提供依據。

參考文獻：

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