三磷酸腺苷熒光微生物檢驗(yàn)技術(shù)在醫(yī)務(wù)人員手表面微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果

馮昕暉, 谷建俐, 丁 婕

(1. 陜西省西安市雁塔區(qū)疾病預(yù)防控制中心 檢驗(yàn)科, 陜西 西安, 710000;2. 陜西省西安市第三醫(yī)院 藥劑科, 陜西 西安, 710054;3. 陜西省西安市中心醫(yī)院 藥劑科, 陜西 西安, 710000)

醫(yī)務(wù)人員直接與患者接觸，其手表面微生物污染現(xiàn)象的發(fā)生極易對(duì)給患者病情及治療效果造成不利影響，甚至引發(fā)嚴(yán)重的院內(nèi)感染、多重耐藥菌傳播等嚴(yán)重后果[1-2]。以往醫(yī)院多采用細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行檢測，其可對(duì)醫(yī)務(wù)人員手部衛(wèi)生情況進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估，但同時(shí)也具有耗時(shí)長、操作復(fù)雜等不足[3]。隨著研究的深入，臨床上逐漸將三磷酸腺苷(ATP)生物熒光法應(yīng)用于醫(yī)務(wù)人員手表面微生物的檢驗(yàn)中，并取得了一定的效果。本研究探討ATP熒光微生物檢驗(yàn)技術(shù)在醫(yī)務(wù)人員手表面微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月—2016年7月本院醫(yī)務(wù)人員56名，其中男21名，女35名; 其中護(hù)士28名，醫(yī)生15名，醫(yī)技人員13名; 年齡21～51歲，平均(35.9±3.6)歲。

1.2 方法

所選取的56名醫(yī)務(wù)人員均行ATP熒光微生物檢驗(yàn)技術(shù)及微生物培養(yǎng)法檢測。試劑與材料主要為瑞典BioThema公司提供的BiotechTMBT-112D 型生物熒光快速檢測、BioThema 266-112型ATP生物應(yīng)該檢測試劑盒; 北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司提供的ATP提取劑、熒光素酶、裂解液、ATP標(biāo)準(zhǔn)品等。

以金黃色葡萄均菌進(jìn)行菌懸液制備，取單個(gè)金黃色葡萄球菌菌落，在普通陰陽瓊脂培養(yǎng)基斜面進(jìn)行接種，并在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為24 h, 再以生理鹽水洗滌新鮮斜面培養(yǎng)物制成細(xì)菌懸液，以行微生物培養(yǎng)法檢測。

ATP生物熒光法檢測: 利用UltansnapTMATP采樣器在醫(yī)務(wù)人員手指屈側(cè)進(jìn)行往返涂擦方式采樣，然后將采樣棉拭子插回取樣器，折斷取樣器上方的塑料閥門，并震蕩反應(yīng)液，待其充分反應(yīng)后置入ATP生物熒光檢測儀內(nèi)，等待15 s, 然后對(duì)反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行記錄，數(shù)據(jù)記錄為相對(duì)光單位值(RLU)。

微生物培養(yǎng)法檢測: 以《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的方式進(jìn)行操作，以采樣棉拭沾取采樣液，并從指根向指尖往返涂抹，然后于無菌條件下將棉拭子剪斷，并置入10 mL采樣液中，進(jìn)行充分震蕩后，將適量洗脫液置入無菌平皿中進(jìn)行培育，于37 ℃的恒溫環(huán)境中培養(yǎng)48 h, 然后對(duì)反應(yīng)計(jì)數(shù)進(jìn)行記錄。

結(jié)果換算: 取不同濃度的金黃色葡萄球菌懸液各50 μL, 并將其分別置于無菌離心管內(nèi); 然后分別加入50 μL裂解液，混勻，然后在室溫下靜置10 min; 之后分別加入400 μL熒光素，迅速混勻，然后利用BiotechTM生物熒光快速檢測儀進(jìn)行第1次RLU值測定(M1); 然后再加入10 μL ATP標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行第2次RLU值測定(M2)。以5 M1/(M2-M1)×105為ATP含量。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩種檢測方法的檢測結(jié)果，以醫(yī)務(wù)人員手部細(xì)菌總數(shù)不超過10 cfu/cm2為合格; ATP生物熒光檢測法規(guī)定以檢測結(jié)果并超過1 RLU/cm2為合格[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 金黃色葡萄菌群含量與ATP含量的對(duì)應(yīng)關(guān)系分析

金黃色葡萄球菌懸液含量在5.8×102～6.2×106時(shí), ATP含量可隨著菌數(shù)增加而升高，見表1。

表1 金黃色葡萄菌群含量與ATP含量的對(duì)應(yīng)關(guān)系分析

2.2 兩種檢測方式對(duì)醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生情況評(píng)估結(jié)果對(duì)比

經(jīng)兩種檢測方式檢查，醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生合格率對(duì)比無顯著差異(P>0.05), 見表2。

表2 兩種檢測方式對(duì)醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生情況評(píng)估結(jié)果對(duì)比

2.3 ATP熒光生物檢測法對(duì)醫(yī)務(wù)人員洗手前后衛(wèi)生情況測定結(jié)果分析

經(jīng)ATP 熒光微生物檢驗(yàn)法，醫(yī)務(wù)人員洗手后ATP含量明顯低于洗手前，且手表面微生物合格率明顯高于洗手前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 ATP熒光生物檢測法對(duì)醫(yī)務(wù)人員洗手前后衛(wèi)生情況測定結(jié)果分析

與洗手前比較, *P<0.05。

3 討 論

醫(yī)務(wù)人員手部微生物污染極易引發(fā)嚴(yán)重的安全風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致交叉感染、院內(nèi)感染等嚴(yán)重后果。因此，加強(qiáng)對(duì)醫(yī)務(wù)人員手部微生物污染情況評(píng)估的重視就尤為重要[5]。微生物培養(yǎng)法是臨床上檢測醫(yī)務(wù)人員手部微生物情況的常用方式，但其因自身所具備的多種不足之處而限制了其應(yīng)用。隨著研究的深入，臨床上逐漸將ATP生物熒光法檢測應(yīng)用于物體表面、醫(yī)療器械表面及醫(yī)務(wù)人員手部微生物情況的檢測中。

ATP熒光微生物檢測技術(shù)主要是以所有生物機(jī)體體內(nèi)均可見程度不一的ATP，而經(jīng)熒光素酶的催化作用，則可促使其與ATP發(fā)生反應(yīng)，從而形成具有熒光的熒光素氧化產(chǎn)物; 同時(shí)其熒光強(qiáng)度會(huì)對(duì)著體內(nèi)ATP含量的升高而加強(qiáng)，故而可作為反映人體微生物含量的有效指標(biāo)[6]。有研究[7]顯示，與傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法對(duì)比, ATP熒光微生物檢測在醫(yī)療器械清洗效果方面可取得相同的檢測結(jié)果，提示ATP熒光微生物檢測具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。本研究結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌懸液含量在一定范圍內(nèi)時(shí), ATP含量可隨著菌數(shù)增加而升高。經(jīng)兩種檢測方式檢查，醫(yī)務(wù)人員手術(shù)衛(wèi)生情況無顯著差異(P>0.05), 提示ATP熒光微生物檢測技術(shù)在醫(yī)務(wù)人員手表面微生物評(píng)估中具有較高的可靠性。該檢測技術(shù)還具有快速取樣、測定與反應(yīng)速度快、靈敏度高等特點(diǎn)，可顯著縮短檢測時(shí)間; 同時(shí)，其還可減少24 h培養(yǎng)而造成的滯后性，可更好地指導(dǎo)臨床工作[8-9]。本研究結(jié)果顯示, ATP熒光微生物檢驗(yàn)法顯示醫(yī)務(wù)人員洗手后ATP含量明顯低于洗手前，且手表面微生物合格率明顯高于洗手前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 提示醫(yī)務(wù)人員可通過嚴(yán)格洗手的方式來減少手表面微生物含量。