非典型皮損及無皮損的生殖道分泌物單純皰疹病毒DNA檢測(cè)分析

李 娜, 李彥珺, 劉珍青, 許艷靜

(青島大學(xué)附屬中心醫(yī)院, 1. 皮膚科; 2. 消毒中心, 山東 青島, 266042)

生殖器皰疹(GH)是性病門診常見的性傳播疾病(STD), 單純皰疹病毒(HSV)為主要的感染病原體。GH患者可見生殖器膿皰、潰瘍、水泡及結(jié)痂，部分患者也可無典型皮損樣改變。研究[1]顯示，臨床性高危人群中HSV隱匿性感染高達(dá)21.6%。GH遷延難愈，易反復(fù)發(fā)作，在孕婦中還可引起垂直傳播，造成死胎、流產(chǎn)、畸形等不良妊娠結(jié)局[2]。本研究回顧性分析2017年1月—2018年1月本院STD門診300例疑似生殖器HSV感染患者的臨床資料，探討非典型皮損及無皮損HSV疑似感染者生殖道分泌物行核酸DNA檢測(cè)的臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年1月本院STD門診150例疑似HSV感染但無典型癥狀患者設(shè)為觀察組，其中男89例，女61例，年齡18～38歲，平均(28.3±5.9)歲; 臨床癥狀僅表現(xiàn)為尿道紅腫、紅斑、裂隙及宮頸糜爛或無任何臨床表現(xiàn)。選取同期150例疑似HSV感染并有典型皮損支持患者為對(duì)照組，其中男84例，女66例，年齡21～43歲，平均(29.5±6.7)歲; 臨床癥狀表現(xiàn)為水泡、結(jié)痂、膿皰、潰瘍。2組患者均有婚外性史或配偶感染史，受檢前1個(gè)月內(nèi)無抗生素、抗病毒類藥物及激素使用史。2組一般資料比較無顯著差異(P>0.05), 具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理會(huì)批準(zhǔn)通過，患者對(duì)本研究?jī)?nèi)容知情同意。

1.2 標(biāo)本采集

詳細(xì)了解患者的感染病史、性史，對(duì)于水泡、結(jié)痂、膿皰、潰瘍患者，采用生理鹽水擦拭病變處，于病變基底部用無菌棉拭子取滲出液、水泡液及痂皮送檢; 對(duì)于非典型癥狀患者，男性用尿道拭子伸入尿道口2～4 cm, 旋轉(zhuǎn)2周取脫落細(xì)胞，女性取無菌棉拭子于宮頸口旋轉(zhuǎn)2周取脫落細(xì)胞送檢。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢查

HSVⅠ型及HSVⅡ型病毒采用熒光定量PCR檢測(cè)，試劑及質(zhì)控品使用武漢百泰基因有限公司熒光定量試劑盒。HSV-2引物序列: 5′-CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC-3′; HSV-1引物序列: 5′-CCTCGCGTTCGTCCTCGTCCTCC-3′。全自動(dòng)基因擴(kuò)增儀為Slan96P(上海)。① 標(biāo)本預(yù)處理: 1 000 mL蒸餾水洗脫樣本脫落細(xì)胞于Eppendorf管, 13 000 轉(zhuǎn)/min離心去上清，沉淀加50 μL提取液振蕩2 min混勻, 100 ℃煮沸10 min, 4 ℃下13 000 轉(zhuǎn)/min離心5 min待檢。② 擴(kuò)增: 取2 μL上清作為擴(kuò)增模板擴(kuò)增，擴(kuò)增條件: 95 ℃下2 min, 93 ℃下5 s, 55 ℃下45 s, 共40循環(huán)。結(jié)果判讀嚴(yán)格遵循實(shí)際說明書，并設(shè)立陰性、陽性對(duì)照及質(zhì)控品，保證結(jié)果的有效性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析, HSVⅠ型及HSVⅡ型感染率的比較采用卡方檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

觀察組檢出HSV-Ⅱ型29例, HSVⅠ型1例, HSV檢出率20.00%; 對(duì)照組HSV-Ⅱ型91例, HSV Ⅰ型5例, HSV檢出率64.00%。2組檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。疑似HSV感染患者中，男性HSV檢出率34.10%, 女性檢出率52.76%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 非典型皮損與典型皮損疑似HSV感染患者檢查情況比較[n(%)]

3 討 論

近年來，中國GH年增長(zhǎng)率高達(dá)70%, 尤其在部分沿海城市, GH的發(fā)病一直呈現(xiàn)上升趨勢(shì)[3-5]。研究[6-9]顯示，在性傳播疾病中，GH的發(fā)病僅次于非淋性尿道炎及淋病[5]。大部分的生殖器皰疹均由HSV-Ⅱ型病毒感染所致, HSV病毒入侵生殖器皮膚黏膜后，可介導(dǎo)病毒包膜融合受感染細(xì)胞膜并釋放胞漿病毒DNA, 在細(xì)胞核內(nèi)合成子代病毒DNA, 潛伏感染及激活復(fù)發(fā)為HSV感染的重要特征[10-12]。HSV病毒為嗜神經(jīng)性病毒，可侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并在骶神經(jīng)節(jié)、迷走神經(jīng)節(jié)等長(zhǎng)期潛伏，神經(jīng)節(jié)等組織不具活躍的新陳代謝易發(fā)生免疫逃逸[13], 在機(jī)體免疫力低下時(shí)潛伏病毒易造成病情的復(fù)發(fā)。研究[14]顯示, GH在發(fā)作前后1周均有較高的傳染性。

熒光定量PCR是具有較高靈敏性、特異性的分子生物學(xué)檢測(cè)方法，相對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)、血清學(xué)試驗(yàn)、免疫熒光等傳統(tǒng)方法，具有較強(qiáng)的優(yōu)越性[15-17]。本研究結(jié)果顯示, GH疑似患者典型皮損HSV檢出率為64.00%, 非典型皮損為20.00%, 具有顯著差異。HSV感染典型皮損多為集簇性水泡、糜爛，活動(dòng)期病毒含量高、毒性強(qiáng)，非典型皮損部分呈裂隙、單個(gè)潰瘍、紅腫滲液性、硬結(jié)，但觀察組HSV的檢出率并不低, HSV病毒亞臨床感染患者均存在間歇性病毒排放，臨床稱為“無癥狀排泌”、“亞臨床排泌”[18-19]。部分無自覺癥狀患者易發(fā)生疾病漏診，造成GH傳播，高靈敏性檢測(cè)方法如熒光定量PCR可減少這部分高危人群的漏診。

國外研究[20-22]認(rèn)為，所有生殖器潰瘍和裂隙均應(yīng)考慮生殖器皰疹的可能性，并行相應(yīng)的HSV檢測(cè)。HSVⅠ型病毒感染除一般性接觸感染外，需關(guān)注非常規(guī)傳播途徑如口、生殖器接觸傳播等。在不同性別HSV檢出率比較中，女性HSV檢出率為52.76%, 男性為34.10%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究[23]認(rèn)為，女性的生理構(gòu)造決定其HSV感染的風(fēng)險(xiǎn)性遠(yuǎn)高于男性，女性生殖系統(tǒng)的生理構(gòu)造接觸面更廣，病毒的清除更難。

綜上所述, HSV病毒具有潛伏感染及逃避先天免疫的特征，無癥狀感染在臨床較為常見，對(duì)非典型皮損及無皮損的生殖道分泌物，單純皰疹病毒DNA檢測(cè)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。