高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)在高齡孕婦中的應用研究

田琪 ，黃凡華 ，章鈞 ，侯紅瑛 ?（通訊作者）

（1.中山大學附屬第三醫(yī)院 產(chǎn)科，廣東 廣州 510630；2.中山大學附屬第三醫(yī)院 檢驗科，廣東 廣州 510630）

0 引言

唐氏綜合征也稱為21-三體綜合征(trisomy 21 syndrome)，和孕婦的年齡存在密切相關(guān)性，其發(fā)病的風險性會隨著孕婦年齡加大而提升。中國《母嬰保健法》中提及對高齡孕婦需要開展羊水診斷，然而，因為羊水診斷具有流產(chǎn)風險、感染風險及損傷胎兒風險等，一些孕婦和其家屬存在一定的擔憂，可能會拒絕接受羊水診斷，最終引發(fā)導致唐氏綜合征患兒的出生[1]。本文實施研究的資料為在本醫(yī)院接受診斷的6400例高齡孕婦（時間段是2015年2月至2018年5月），研究及分析將高通量基因測序的產(chǎn)前篩查以及診斷技術(shù)應用于高齡孕婦中的診斷價值及意義。

1 資料與方法

1.1 基礎(chǔ)資料

本文將在本醫(yī)院接受診斷的6400例高齡孕婦納入分析資料，選取時間是2015年2月至2018年5月，予以回顧分析，年齡在35-46歲，平均（39.85±2.45）歲；孕周13到25+6周，平均（21.12±2.07）周，其中，直接要求羊水診斷的孕婦有3385例，先要求接受無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測間接羊水診斷的孕婦有3015例。納入標準：年齡在35周歲及以上的孕婦；高齡孕婦與其家屬都簽字知情同意書，得到醫(yī)學倫理會相關(guān)人員的批準及準許。排除標準：年齡在35周歲以下的孕婦；不愿意簽字知情同意書或是不愿意參與本研究的孕婦。

表1 高齡孕婦采取不同檢測方法的染色體異常檢出總計率（n，%）

1.2 方法

（1）采集全部高齡孕婦的靜脈血，予以無創(chuàng)DNA檢測，對DNA檢測結(jié)果呈現(xiàn)陽性的孕婦再開展羊水細胞培養(yǎng)處理和染色體核型分析予以確診。

（2）羊水細胞培養(yǎng)后予以染色體核型分析的方法：對直接要求羊水診斷的孕婦和無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測結(jié)果呈現(xiàn)陽性的孕婦分別抽取20mL羊水進行細胞培養(yǎng)，并開展染色體核型分析予以確診。

（3）隨訪全部高齡孕婦，將采取羊膜腔穿刺術(shù)抽羊水開展細胞培養(yǎng)處理和予以染色體核型分析的結(jié)果作為金標準，統(tǒng)計診斷結(jié)果。

1.3 相關(guān)指標

觀察并分析高齡孕婦采取不同檢測方法的染色體異常檢出情況。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

得到的數(shù)據(jù)呈現(xiàn)，先要求接受無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測間接羊水診斷的高齡孕婦中，檢出陽性共37例，通過羊水診斷得以確診有30例，生后隨訪其外周血染色體檢查得以確診有7例，其中，21-三體有20例，18-三體有10例，47,XXY有7例；直接要求羊水診斷的高齡孕婦中，21-三體有19例，18-三體有9例，47,XXY有7例。高齡孕婦先要求接受無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測間接羊水診斷的染色體異常檢出總計率（1.23%）與直接要求羊水診斷（1.03%）對比，前者略高，不過無顯著數(shù)據(jù)差異，P＞0.05，未體現(xiàn)數(shù)據(jù)之間的統(tǒng)計學意義。

3 討論

多數(shù)出生缺陷是因遺傳因素而引發(fā)的，最為常見的是染色體的非整倍體異常，主要為21、18、13、X、Y染色體的非整倍體異常情況。對孕婦開展產(chǎn)前診斷有助于減少異常胎兒的出生，羊水診斷是臨床常用的檢查方式。本文數(shù)據(jù)展示，3385高齡孕婦接受直接要求羊水診斷，檢出35例染色體異常。雖然羊水診斷對胎兒染色體的檢測比較全面，但是，羊水診斷需要開展侵入性穿刺操作，易導致出血或是感染情況，提升流產(chǎn)風險或是畸形風險。

無創(chuàng)DNA檢測是抽取孕婦的外周靜脈血，采取高通量基因測序方法對孕婦血漿內(nèi)胎兒的游離DNA片段開展檢測，將胎兒的染色體倍性情況檢測，和常規(guī)的唐氏篩查方法相對比，無創(chuàng)DNA檢測方法具有比較低的假陽性情況[2-3]。本文相關(guān)研究資料呈現(xiàn)，3015例高齡孕婦接受高通量基因測序，檢出37例陽性（染色體異常），且均通過羊水診斷或是生后隨訪其外周血染色體檢查確診，都和檢測結(jié)果相符合。

高通量基因測序是無創(chuàng)性的DNA檢測方法，其對21、18、13等一些常見的染色體數(shù)目異常情況檢出敏感度及特異度均比較高[4]，可以用作接近診斷級別的一種篩查手段，能夠?qū)⒋蟛糠植槐匾难蛩┐滩僮鞅苊饣驕p少，不過，高通量基因測序主要針對常見的21、18、13-三體開展檢測，可能會將其他染色體異常情況漏檢，而且，對于其檢出的染色體異常情況，一般也需要開展羊水穿刺進行確診[5-6]。所以，高通量基因測序僅為更高級別的一種產(chǎn)前篩查方式，可以看做是傳統(tǒng)產(chǎn)前篩查以及診斷技術(shù)的重要補充，但其并無法將羊水診斷取代[7-8]。

綜上所述，對高齡孕婦采用高通量基因測序的產(chǎn)前篩查以及診斷技術(shù)展示重要診斷價值，可以為拒絕接受羊膜腔穿刺術(shù)或是具有羊水診斷相關(guān)禁忌證的高齡孕婦提供新的一種產(chǎn)前診斷方式，呈現(xiàn)進一步推廣應用的意義和優(yōu)勢。