大白杜鵑中萜類化學(xué)成分研究△

陳新濤，呂光輝，陳黎

(十堰市太和醫(yī)院/湖北醫(yī)藥學(xué)院 藥學(xué)部，湖北 十堰 442000)

大白杜鵑Rhododendrondecorum為杜鵑花科杜鵑花亞科杜鵑花屬植物，產(chǎn)于四川西部至西南部、貴州西部、云南西北部和西藏東南部，生于海拔1000～3300 m的灌叢中或森林下，主產(chǎn)于中國四川、貴州、云南和西藏，緬甸東北部也有分布。該物種因花朵美麗，有栽培，具有較高的觀賞價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采自四川寶興，民間常用其根煎煮治療跌打損傷[1]。杜鵑花屬植物化學(xué)成分十分豐富[2-3]，但是文獻(xiàn)對大白杜鵑萜類的研究較少，文獻(xiàn)僅僅報(bào)道了少量的二萜類、黃酮類等化合物[4-7]，為了從天然產(chǎn)物中分離得到結(jié)構(gòu)新穎的化合物，我們選取大白杜鵑進(jìn)行了深入研究。從大白杜鵑的95%乙醇提取物中分離鑒定了8個(gè)化合物，其中包括6個(gè)二萜類化合物，2個(gè)降倍半萜類化合物，分別是grayanotoxin I(1)，grayanotoxin X(2)，grayanotoxin VIII(3)，rhododecorumin VII(4)，leucothol A(5)，grayanotoxin XXI(6)，(+)-Dehydrovomifoliol(7)，5α，6α-Epoxy-3β-hydroxy-megastigm-7-en-9-one(8)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

核磁共振譜(Bruker AM-400)，半制備液相(Agilent 1100)，氘代試劑，J&K Chemical LTD、Cambridge Isotope Laboratories，Inc.半制備型色譜柱為YMC(5 μm，RP C18，250 mm×100 mm)，正相柱層析硅膠(100目、200～300目，青島海洋化工)；高效液相色譜純甲醇、分析純甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、石油醚(上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán))。

1.2 材料

植物材料于2016年從四川寶興海拔1400 m左右采摘，由湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院葉方教授鑒定為杜鵑花屬植物大白杜鵑Rhododendrondecorum.，植物樣本現(xiàn)保存在湖北十堰市太和醫(yī)院武當(dāng)中藥研究所標(biāo)本室(No.20170725)。

2 提取和分離

干燥的大白杜鵑枝葉12 kg粉碎，在室溫條件下反復(fù)用95%的乙醇冷浸提取4次，真空濃縮得總浸膏。然后將總浸膏用熱水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，分別合并濃縮后得到石油醚部位180 g，乙酸乙酯部位102 g。將乙酸乙酯部位用大正相柱(CHCl3-MeOH，50∶1→1∶1)分成4個(gè)組分(A-D)。B組分用用ODS柱分成了5個(gè)子組分(MeOH-H2O，30%→90%)。各子組分又經(jīng)凝膠、正相以及半制備HPLC分離純化得到化合物3(7.5 mg)、5(3.8 mg)、6(3.9 mg)。C組分用RP-C18柱分成了3個(gè)子組分(MeOH-H2O，30%→90%)。各子組分又經(jīng)凝膠、正相以及半制備HPLC分離純化得到化合物2(28.4 mg)、4(11.5 mg)、7(14.3 mg)。D組分反復(fù)用RP-C18柱，正相以及半制備HPLC分離純化得到化合物1(8.6 mg)、化合物5(6.4 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色針晶；ESI-MSm/z：413.12[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：2.52(1H，dd，J=11.8，4.4 Hz，H-1)，2.11(1H，m，H-2α)，1.93(1H，m，H-2β)，3.51(1H，d，J=4.4 Hz，H-3)，3.52(1H，d，J=4.6 Hz，H-6)，1.91(1H，d，J=4.4 Hz，H-7β)，1.84(1H，br s，H-7α)，2.07(1H，br s，H-9)，1.66(1H，dd，J=13.5，6.0 Hz，H-11β)，1.51(1H，m，H-11α)，2.08(1H，overlap，H-12β)，1.53(1H，m，H-12α)，1.75(1H，m，H-13)，5.38(1H，s，H-14)，1.95(1H，s，H-15α)1.85(1H，s，H-15β)，1.26(3H，s，H-17)，0.91(13H，s，H-18)，1.12(3H，s，H-19)，1.29(3H，s，H-20)，2.04(3H，s，14-COCH3)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：51.2(C-1)，35.1(C-2)，83.5(C-3)，51.4(C-4)，84.6(C-5)，74.2(C-6)，43.4(C-7)，52.2(C-8)，55.5(C-9)，79.3(C-10)，22.6(C-11)，27.5(C-12)，59.5(C-13)，83.0(C-14)，60.2(C-15)，80.2(C-16)，23.5(C-17)，23.5(C-18)，19.1(C-19)，27.1(C-20)，172.3(14-COCH3)，21.3(14-COCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的grayanotoxin I數(shù)據(jù)一致[8]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物2：無色針晶；ESI-MSm/z：377.05[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.98(3H，s，H-18)，1.15(3H，s，H-19)，1.82(1H，ddd，J=14.4，8.9，2.7 Hz，H-2a)，2.05(3H，s，14-COCH3)，2.36(1H，m，H-2b)，2.44(2H，m，H-15)，2.62(1H，m，H-13)，2.72(1H，t，J=6.7 Hz，H-9)，2.94(1H，t，J=9.4 Hz，H-1)，3.63(1H，dd，J=6.6，2.7 Hz，H-3)，3.70(1H，dd，J=10.5，2.2 Hz，H-6)，4.88(1H，s，H-17a)，4.92(1H，s，H-17b)，5.01(1H，s，H-20a)，5.08(1H，s，H-20b)，5.22(1H，s，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：45.4(C-1)，38.9(C-2)，82.5(C-3)，51.4(C-4)，84.2(C-5)，71.6(C-6)，40.1(C-7)，48.1(C-8)，54.6(C-9)，151.8(C-10)，26.3(C-11)，32.4(C-12)，49.2(C-13)，81.8(C-14)，50.5(C-15)，155.7(C-16)，106.8(C-17)，24.7(C-18)，19.4(C-19)，114.4(C-20)，172.9(14-COCH3)，21.2(14-COCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的grayanotoxin X數(shù)據(jù)一致[9]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物3：無色針晶；ESI-MSm/z：335.15[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.04(3H，s，H-18)，1.18(3H，s，H-19)，1.72(1H，dd，J=14.3，2.3 Hz，H-7α)，1.83(1H，ddd，J=14.4，9.2，2.8 Hz，H-2β)，1.92(1H，dd，J=14.3，10.2 Hz，H-7β)，2.25(1H，d，J=16.5 Hz，H-15β)，2.34(1H，ddd，J=14.4，9.8，6.8 Hz，H-2α)，2.45(1H，dt，J=16.5，2.5 Hz，H-15α)，2.53(1H，d，J=5.1 Hz，H-13)，2.65(1H，t，J=6.8 Hz，H-9)，2.95(1H，t，J=9.5，H-1)，3.62(1H，dd，J=6.8，2.8 Hz，H-3)，4.00(1H，dd，J=10.2，2.3 Hz，H-6)，4.06(1H，s，H-14)，4.86(1H，s，H-17a)，4.93(1H，s，H-17b)，4.96(1H，s，H-20a)，5.04(1H，s，H-20b)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：45.4(C-1)，39.1(C-2)，82.6(C-3)，51.5(C-4)，84.0(C-5)，71.6(C-6)，40.0(C-7)，48.8(C-8)，55.1(C-9)，152.5(C-10)，26.1(C-11)，32.6(C-12)，51.2(C-13)，78.1(C-14)，50.1(C-15)，157.3(C-16)，106.5(C-17)，24.9(C-18)，19.4(C-19)，113.8(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的grayanotoxin VIII數(shù)據(jù)一致[10]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物4：無色針晶；ESI-MSm/z：351.20[M+H]+。1H-NMR(C6D5N，400 MHz)δ：3.46(1H，brd，H-1)，3.75(1H，d，J=2.6 Hz，H-2)，3.28(1H，d，J=2.9 Hz，H-3)，4.04(1H，dd，J=11.2，2.9 Hz，H-6)，1.99(1H，m，H-7a)，2.62(1H，t，J=12.2 Hz，H-7b)，2.44(1H，d，J=6.4 Hz，H-9)，1.97(1H，m，H-11a)，2.07(1H，m，H-11b)，1.85(1H，m，H-12a)，2.03(1H，m，H-12b)，1.95(1H，d，J=11.6 Hz，H-14a)，2.61(1H，d，J=9.8 Hz，H-14b)，1.90(1H，d，J=15.3 Hz，H-15a)，2.09(1H，d，J=14.2 Hz，H-15b)，1.45(3H，s，H-17)，1.30(3H，s，H-18)，1.58(3H，s，H-19)，5.30(1H，s，H-20a)，5.63(1H，s，H-20b)；13C-NMR(C6D5N，100 MHz)δ：49.8(C-1)，60.2(C-2)，65.6(C-3)，48.1(C-4)，80.7(C-5)，74.0(C-6)，49.0(C-7)，41.2(C-8)，49.1(C-9)，151.3(C-10)，32.2(C-11)，33.0(C-12)，81.1(C-13)，44.5(C-14)，59.1(C-15)，77.3(C-16)，21.7(C-17)，21.2(C-18)，21.1(C-19)，115.8(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的Rhododecorumin VII數(shù)據(jù)一致[11]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物5：無色粉末；ESI-MSm/z：319.08[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：1.12(3H，s，H-19)，1.19(3H，s，H-18)，1.36(3H，s，H-17)，3.97(1H，t，J=2.8 Hz，H-3)，4.84(1H，s，H-20a)，4.94(1H，s，H-20b)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：42.8(C-1)，31.4(C-2)，78.4(C-3)，49.7(C-4)，214.6(C-5)，48.2(C-6)，38.4(C-7)，46.0(C-8)，49.8(C-9)，151.7(C-10)，21.4(C-11)，24.6(C-12)，49.2(C-13)，36.1(C-14)，55.1(C-15)，80.2(C-16)，24.2(C-17)，25.4(C-18)，21.1(C-19)，105.6(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的leucothol A數(shù)據(jù)一致[12]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物6：白色無定形粉末；ESI-MSm/z：395.14[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.14(3H，s，H-19)，1.30(3H，s，H-18)，1.37(3H，s，H-17)，2.01(3H，s，H-20)，2.06(3H，s，14-COCH3)，3.87(1H，dd，J=6.9，2.9 Hz，H-3)，4.07(1H，dd，J=4.8，2.0 Hz，H-6)，5.47(1H，s，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：127.1(C-1)，33.5(C-2)，79.5(C-3)，51.8(C-4)，215.6(C-5)，70.3(C-6)，42.5(C-7)，55.1(C-8)，59.2(C-9)，143.2(C-10)，23.4(C-11)，28.3(C-12)，54.2(C-13)，82.0(C-14)，57.9(C-15)，80.2(C-16)，24.5(C-17)，23.9(C-18)，22.1(C-19)，16.7(C-20)，172.8(14-COCH3)，21.6(14-COCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的grayanotoxin XXI數(shù)據(jù)一致[13]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物7：白色無定形粉末；ESI-MSm/z：223.20[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：0.99(3H，s，H-11)，1.08(3H，s，H-12)，1.86(3H，d，J=1.3 Hz，H-13)，2.28(3H，s，H-10)，2.50(1H，d，J=17.3 Hz，H-2a)，2.33(1H，d，J=17.3 Hz，H-2b)，5.93(1H，s，H-4)，6.45(1H，d，J=15.7 Hz，H-8)，6.81(1H，d，J=15.7 Hz，H-7)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：41.8(C-1)，49.7(C-2)，197.4(C-3)，127.6(C-4)，160.8(C-5)，79.5(C-6)，145.5(C-7)，130.5(C-8)，197.8(C-9)，28.6(C-10)，24.5(C-11)，23.1(C-12)，18.7(C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的(+)-Dehydrovomifoliol數(shù)據(jù)一致[14]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物8：白色無定形粉末；ESI-MSm/z：225.09[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.96(3H，s，H-12)，1.18(3H，s，H-13)，1.19(3H，s，H-11)，1.58(1H，ddd，J=12.8，3.3，1.8 Hz，H-2a)，1.66(1H，dd，J=14.3，9.1 Hz，H-4a)，1.82(1H，d，J=12.8 Hz，H-2b)，2.28(3H，s，H-10)，2.30(1H，ddd，J=14.3，5.0，1.8 Hz，H-4b)，3.76(1H，m，H-3)，6.18(1H，d，J=15.8 Hz，H-8)，7.16(1H，d，J=15.8 Hz，H-7)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：36.4(C-1)，47.8(C-2)，64.7(C-3)，41.5(C-4)，69.3(C-5)，71.0(C-6)，145.6(C-7)，133.7(C-8)，200.4(C-9)，27.6(C-10)，29.9(C-11)，25.3(C-12)，20.2(C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的5α，6α-Epoxy-3β-hydroxy-megastigm-7-en-9-one數(shù)據(jù)一致[15]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 大白杜鵑中化合物1～8化學(xué)結(jié)構(gòu)

4 結(jié)論

文獻(xiàn)中報(bào)道的對大白杜鵑化學(xué)成分和生物活性的研究主要集中在黃酮類成分上，杜鵑花屬植物化學(xué)成分豐富，主要包含揮發(fā)油、二萜、三萜、甾體、黃酮以及香豆素類化合物。該研究深化了對大白杜鵑化學(xué)成分的認(rèn)識(shí)，豐富了杜鵑花屬植物中化合物的結(jié)構(gòu)類型。

本實(shí)驗(yàn)從大白杜鵑的95%乙醇提取物中分離鑒定了8個(gè)化合物，其中包括6個(gè)二萜類化合物，2個(gè)降倍半萜類化合物，除了化合物4，其余化合物均為首次從大白杜鵑枝葉中分離得到。該實(shí)驗(yàn)為大白杜鵑的化學(xué)成分和藥理活性的研究提供了一定參考。