某電化學(xué)發(fā)光儀冷凍試劑再利用的可行性研究

姚 麗,王 珊,李佳琪,王莎莎

(山東省濟(jì)寧市汶上縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 272500)

電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)是電化學(xué)發(fā)光和免疫測(cè)定相結(jié)合的新一代標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各種激素、腫瘤標(biāo)志物等測(cè)定。羅氏e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀是目前檢驗(yàn)科在該領(lǐng)域使用最廣泛的儀器之一，具有高靈敏度、檢測(cè)范圍寬、重復(fù)性好、檢驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠等優(yōu)點(diǎn)。電化學(xué)發(fā)光試劑為原裝進(jìn)口，價(jià)格相對(duì)較高，測(cè)定人份固定，掃描條碼自動(dòng)獲取試劑信息。每個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目試劑檢測(cè)完畢后仍有30%～35%剩余量，造成了試劑的浪費(fèi)，可以對(duì)試劑進(jìn)行回收再利用[1-8]。另外不同保存溫度的羅氏試劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較大，羅氏原裝試劑由M、R1、R2三聯(lián)瓶組成，M試劑為免疫磁性微球或稱免疫磁珠，是表面結(jié)合有單克隆抗體的磁性微球[9-13]。試劑冷凍后可能由于M試劑中的磁珠微粒很怕低溫，被凍后會(huì)聚集成團(tuán)，機(jī)器無(wú)法混勻完全，導(dǎo)致結(jié)果很不穩(wěn)定。在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，試劑在運(yùn)輸和保存過(guò)程中由于各種原因被凍后，即使試劑再次復(fù)溶使用，仍會(huì)出現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控失控，即使定標(biāo)也不能糾正，導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果不可信。出現(xiàn)這種情況，為保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，只能丟棄試劑，造成浪費(fèi)。筆者又發(fā)現(xiàn)不同項(xiàng)目三聯(lián)試劑瓶中的M試劑主要成分均為鏈霉親和素包被的磁珠微粒，為非特異性，試劑冷凍后主要是M試劑受到影響，R1、R2試劑可能影響不大，因此考慮冷凍后的M試劑是否可以用任意剩余M試劑代替進(jìn)行檢測(cè)。

1 資料與方法

1.1一般資料 標(biāo)本來(lái)源于本院住院和門診患者血清。

1.2儀器與試劑 羅氏e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。原裝試劑為e601原裝配套試劑。更換M試劑：將冷凍復(fù)溶后的M試劑輕輕混勻，用一次性吸管全部吸出丟棄，用任意項(xiàng)目、批號(hào)剩余的1～2瓶M試劑混勻后代替。2～8 ℃冰箱放置一夜，使其充分沉淀消除氣泡備用。使用時(shí)放入儀器試劑盤，儀器自動(dòng)掃描識(shí)別。定標(biāo)物和質(zhì)控物均為羅氏原裝配套，小量分裝放于-20 ℃冰箱保存。

1.3方法

1.3.1精密度驗(yàn)證 參考EP15-A2[14-15]，選取兩個(gè)水平的質(zhì)控，連續(xù)重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算批內(nèi)精密度，要求批內(nèi)精密度≤1/4允許總誤差(TEa)；將兩個(gè)濃度的質(zhì)控品每日檢測(cè)1次，連續(xù)檢測(cè)20 d，計(jì)算批間精密度，要求批間精密度≤1/3 TEa。

1.3.2準(zhǔn)確性測(cè)試 更換M試劑分別檢測(cè)三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、促甲狀腺激素(TSH)、β-人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)、黃體酮(PRG)高、低水平質(zhì)控物各20次，檢測(cè)分析結(jié)果是否在允許范圍內(nèi)。

1.3.3標(biāo)本檢測(cè) 分別用原裝試劑和更換M試劑對(duì)低、中、高3個(gè)水平的標(biāo)本各20例進(jìn)行T3、T4、TSH、β-HCG、PRG的測(cè)定。

2 結(jié) 果

2.1精密度檢測(cè) 更換M試劑T3、T4、TSH、β-HCG、PRG的檢測(cè)，批內(nèi)精密度及批間精密度結(jié)果均合格，見(jiàn)表1。

2.2更換M試劑準(zhǔn)確性檢測(cè) 更換M試劑測(cè)得2個(gè)水平質(zhì)控物結(jié)果與原裝試劑靶值結(jié)果比較，均在質(zhì)控允許范圍內(nèi)。

2.3標(biāo)本檢測(cè) 2種試劑檢測(cè)患者血清樣品的結(jié)果呈良好的線性相關(guān)(r>0.95)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表1 更換M試劑批內(nèi)、批間CV結(jié)果

表2 原裝試劑與更換M試劑檢測(cè)20例標(biāo)本血清T3、T4、TSH、β-HCG、PRG結(jié)果比較

3 討 論

羅氏e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀采用ECLIA的原理，其基本原理及大致反應(yīng)過(guò)程為反應(yīng)杯中加入用三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗體及生物素化的抗體及含抗原的待測(cè)血清，加入鏈霉親和素磁性微粒，再加入三丙胺，啟動(dòng)電化學(xué)反應(yīng)過(guò)程，激發(fā)態(tài)的二價(jià)的三聯(lián)吡啶釕被還原成基態(tài)，發(fā)出的620 nm 波長(zhǎng)的光被光電倍增管收集，根據(jù)光的強(qiáng)度換算成待測(cè)標(biāo)本中抗原的水平。

本研究結(jié)果顯示，更換M試劑檢測(cè)血清T3、T4、TSH、β-HCG、PRG的重復(fù)性及準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)性能指標(biāo)均符合相關(guān)實(shí)驗(yàn)要求，原裝試劑與更換M試劑的比對(duì)結(jié)果呈良好的線性相關(guān)(r>0.95)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明更換M試劑性能穩(wěn)定，質(zhì)量可靠。因此只要注意保存條件，冷凍試劑復(fù)溶后更換任意項(xiàng)目M試劑是完全可行的。

根據(jù)羅氏化學(xué)發(fā)光試劑說(shuō)明書(shū)可知，原裝試劑在未開(kāi)封的情況下可在2～8 ℃下保存最長(zhǎng)至規(guī)定的有效期；應(yīng)用于羅氏e601電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀使用時(shí)間為6周，或在儀器和冰箱中交替存放8周；若開(kāi)封后可在2～8 ℃下保存12周，試劑穩(wěn)定性幾乎不變[16]。在工作中應(yīng)注意使用完原裝試劑后，將其瓶蓋扣緊盡量盡快放入2～8 ℃冰箱中保存，防止瓶中試劑包被的單克隆抗體活性降低捕捉抗原能力下降及防止試劑水分蒸發(fā)，造成變質(zhì)。因此更換的M試劑應(yīng)選擇相應(yīng)保存時(shí)間內(nèi)的剩余試劑，最好4周內(nèi)的剩余試劑。更換M試劑后應(yīng)盡快使用，最好在1周內(nèi)應(yīng)用完畢。更換M試劑應(yīng)用操作過(guò)程中應(yīng)設(shè)置質(zhì)控進(jìn)行嚴(yán)密監(jiān)控，如發(fā)現(xiàn)失控等情況，應(yīng)查明原因，需要定標(biāo)時(shí)應(yīng)重新定標(biāo)至質(zhì)控通過(guò)方可進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)，但需特別注意更換M試劑使用完畢，再次使用原裝試劑時(shí)必須重新定標(biāo)，質(zhì)控在允許范圍內(nèi)方可進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。實(shí)踐證明羅氏e601試劑冷凍后更換任意項(xiàng)目M試劑操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)結(jié)果可靠，可有效避免試劑浪費(fèi)。