中華鱘主要細(xì)菌性疾病及其臨床診斷與防控

田 甜，張德志，杜合軍

( 中國長(zhǎng)江三峽集團(tuán)公司 中華鱘研究所, 三峽工程魚類資源保護(hù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖北 宜昌 443100 )

中華鱘(Acipensersinensis)是我國特有的典型溯河洄游性魚類，屬于國家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)水生動(dòng)物。近年來受環(huán)境污染、航運(yùn)、生境消失、過度捕撈等因素的影響，其野生種群急劇下降[1-2]，人工保種已成為該物種存在的重要途徑。中華鱘的保護(hù)研究主要集中在馴養(yǎng)繁殖、生理習(xí)性、種群資源、生態(tài)環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)需求以及分子遺傳等方面[3-9]，而對(duì)中華鱘病害方面的研究相對(duì)較少。目前已報(bào)道的中華鱘病害有細(xì)菌性敗血癥、腸炎病、爛鰓病、狂游癥、車輪蟲病和分枝桿菌(Mycobacterium)病等[10-14]。隨著中華鱘人工養(yǎng)殖歷史的延長(zhǎng)、種群養(yǎng)殖密度的加大，其病害問題也日趨嚴(yán)重。近十年來，筆者以患病中華鱘為研究對(duì)象，對(duì)其臨床檢驗(yàn)、診斷方法及防控技術(shù)進(jìn)行攻關(guān)，積累了豐富的病例資料，以期為今后中華鱘細(xì)菌性疾病的診治提供參考數(shù)據(jù)。

1 病例來源及檢驗(yàn)診斷方法

1.1 病例來源

(1)1～8齡子二代中華鱘及1齡和6齡野生中華鱘，養(yǎng)殖池為圓形或方形水泥池，每池養(yǎng)殖面積為15～67 m2，水深0.8～1.2 m；(2)9齡及以上子一代中華鱘，養(yǎng)殖池為方形或圓形水泥池，每池養(yǎng)殖面積150～200 m2，水深1.5 m；(3)20齡以上野生中華鱘，養(yǎng)殖池為圓形水泥池，每池養(yǎng)殖面積200 m2，水深1.5 m。以上各池水源均為井水，養(yǎng)殖水溫周年10～28 ℃，溶解氧>6.0 mg/L。

1.2 檢驗(yàn)診斷方法

1.2.1 流行病學(xué)調(diào)查

參照文獻(xiàn)[15-16]的流行病學(xué)調(diào)查方法，于2010—2017年每年的3—10月對(duì)黃柏河基地、三峽基地和大溪基地的發(fā)病中華鱘開展調(diào)查，調(diào)查項(xiàng)目包括發(fā)病過程、主要癥狀、流行情況、危害程度、養(yǎng)殖環(huán)境、水化學(xué)指標(biāo)、餌料種類及養(yǎng)殖管理等。

1.2.2 魚體檢驗(yàn)

參照文獻(xiàn)[17]取樣方法，于2010—2017年每年3—10月對(duì)黃柏河基地、三峽基地和大溪基地的發(fā)病中華鱘進(jìn)行取樣檢驗(yàn)，每個(gè)發(fā)病池取樣3～5尾。魚體檢驗(yàn)根據(jù)實(shí)際情況分為兩種檢驗(yàn)方式：(1)活體中華鱘只進(jìn)行體外檢驗(yàn)，開展病原學(xué)檢驗(yàn)；(2)瀕死或剛死中華鱘遵循由外到內(nèi)的檢查順序，開展病原學(xué)檢驗(yàn)、病理解剖檢驗(yàn)及病理學(xué)檢測(cè)等。根據(jù)疾病診斷結(jié)果，結(jié)合以往的防治經(jīng)驗(yàn)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果，提出治療方案，跟蹤臨床治療效果并作出總結(jié)。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌性敗血癥

2.1.1 臨床癥狀及解剖特征

病鱘活力下降、食欲減退，反應(yīng)遲緩，體表充血，尤以腹部、鰭條最為明顯，部分病鱘蛀鰭、肛門紅腫；解剖體腔內(nèi)充盈紅色或淡紅色腹水，內(nèi)臟充血，部分病鱘腸道充血(圖1a)。

2.1.2 診斷方法及病因分析

根據(jù)臨床癥狀及解剖特征可作初步診斷。無菌條件下對(duì)瀕死或剛死病鱘的腹水及內(nèi)臟器官進(jìn)行細(xì)菌分離，經(jīng)鑒定為維氏氣單胞菌(Aeromonasveronii)、嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)或溫和氣單胞菌(A.sobria)等氣單胞菌中的其中一種，可確診為細(xì)菌性敗血癥。此病是一種常見的細(xì)菌性疾病，主要危害中華鱘幼魚，成魚偶見發(fā)病。

2.1.3 控制方法

(1)4齡及以下中華鱘外用1.0 mg/L二氧化氯(有效含量8%)浸泡10 min，1次/d，連用3～5 d；(2)同時(shí)內(nèi)服左氧氟沙星藥餌(投喂量30 mg/kg體質(zhì)量)，1次/d，連用5～7 d；(3)中華鱘成魚注射氟苯尼考(有效含量5%)針劑(注射劑量0.3～0.5 mL/kg)，1次/2 d，連用3～5次。采用上述方法，經(jīng)跟蹤調(diào)查中華鱘幼魚治愈率為60%，成魚治愈率為80%。

2.2 腸炎病

2.2.1 臨床癥狀及解剖特征

病鱘食欲減退，體表完整無外傷，肛門紅腫；解剖見腸道充血，輕者部分腸道充血發(fā)紅，嚴(yán)重者整個(gè)腸道充血呈紫紅色，腸壁變薄彈性差，部分魚體腸道內(nèi)存在黃色黏液與膿血混合物，內(nèi)臟器官未見明顯異常(圖1b)。

2.2.2 診斷方法及病因分析

根據(jù)臨床癥狀可初步診斷。無菌操作對(duì)病鱘腸道開展細(xì)菌分離，經(jīng)鑒定為點(diǎn)狀氣單胞菌(A.punctata)，可確診為細(xì)菌性腸炎病。患細(xì)菌性敗血癥的部分病鱘有時(shí)也出現(xiàn)腸道充血，但其腸道不存在變薄和彈性差的癥狀，易出現(xiàn)誤診，應(yīng)注意區(qū)分。此病是由于腸道消化異常感染點(diǎn)狀氣單胞菌而致病。

2.2.3 控制方法

(1)投喂恩諾沙星藥餌(投喂量30 mg/kg體質(zhì)量)，1次/d，連用5～7 d；(2)外用30～40 mg/L聚維酮碘(有效含量1%)浸泡1～2 h，1次/d，連用3～5 d；(3)加強(qiáng)日常管理，維持正常的投喂量，在季節(jié)更替期間逐漸增加投喂量，不可突然大幅度增大投喂量，投喂30 min后及時(shí)清除剩餌。采用上述方法，經(jīng)跟蹤調(diào)查治愈率為70%。

2.3 細(xì)菌性爛鰓病

2.3.1 臨床癥狀及解剖特征

病鱘體表完整無外傷、無充血現(xiàn)象。打開鰓蓋可見鰓絲顏色變淺，黏液增多，末端彎曲、膨大，局部可見明顯的黃色潰瘍?cè)?；解剖?nèi)臟器官無明顯異?，F(xiàn)象(圖1c)。

2.3.2 診斷方法及病因分析

根據(jù)臨床癥狀可初步診斷為爛鰓病。取鰓部黏液和鰓組織鏡檢未見寄生蟲、真菌及藻類，同時(shí)鰓組織水浸片放置30 min后鏡檢可見大量滑動(dòng)的桿狀細(xì)菌，初步診斷為細(xì)菌性爛鰓病。無菌條件下對(duì)鰓部病灶處開展細(xì)菌分離，經(jīng)鑒定為柱狀黃桿菌(Flavobacteriumcolumnare)，確診為細(xì)菌性爛鰓病。此病系中華鱘幼魚鰓部受損感染柱狀黃桿菌而發(fā)病。

2.3.3 控制方法

(1)改善養(yǎng)殖環(huán)境，加大排污頻率和換水量；(2)外用1% NaCl+5 mg/L左氧氟沙星停水浸泡1～2 h，1次/d，連用3～5 d；(3)投喂多維(3 g/kg飼料)和三黃散(0.5 g/kg體質(zhì)量)藥餌，1次/d，連用5～7 d。采用上述方法，經(jīng)跟蹤調(diào)查治愈率為60%。

2.4 花斑病

2.4.1 臨床癥狀及解剖特征

病鱘體表存在褪色斑，主要分布在身體后部，褪色斑上方骨板發(fā)白，部分病魚體表充血、潰爛；解剖體內(nèi)無腹水，肝臟充血，其他臟器未見明顯異常(圖1d)。

2.4.2 診斷方法及病因分析

根據(jù)臨床癥狀可作初步診斷。無菌操作對(duì)病鱘的體表病灶處及內(nèi)臟器官開展細(xì)菌分離，分離到兩類細(xì)菌，經(jīng)鑒定為氣單胞菌和不動(dòng)桿菌(Acinetobacter)，確診為花斑病。此病主要危害2齡及以下中華鱘，系氣單胞菌和不動(dòng)桿菌混合感染致病。

2.4.3 控制方法

(1)外用30～40 mg/L甲醛(有效含量37%～40%)浸泡1～2 h，1次/d，連用多次；(2)或外用1.0～1.2 mg/L二氧化氯(有效含量8%)浸泡10 min，1次/2 d，連續(xù)使用3～5次；(3)同時(shí)內(nèi)服左氧氟沙星或恩諾沙星藥餌(30 mg/kg體質(zhì)量)，1次/d，連用5 d。采用上述方法，經(jīng)跟蹤調(diào)查治愈率為50%。

2.5 膿包病

2.5.1 臨床癥狀及解剖特征

病鱘體表有輕微隆起，手觸柔軟，劃開隆起處立即有大量紅色血水流出，膿包處皮下肌肉潰爛，嚴(yán)重者在肌肉內(nèi)層形成空洞；解剖內(nèi)臟器官未見明顯異常(圖1e)。

2.5.2 診斷方法及病因分析

根據(jù)癥狀可作初步診斷。無菌條件下對(duì)患病中華鱘膿包處血水和潰爛的肌肉開展細(xì)菌分離，可分離到大量的革蘭氏陰性菌，經(jīng)鑒定為弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)，可確診為膿包病。此病主要危害中華鱘成魚，系感染弗氏檸檬酸桿菌而致病。

2.5.3 控制方法

(1)提供良好的水環(huán)境，定期監(jiān)測(cè)水質(zhì)，要求水質(zhì)指標(biāo)符合鱘魚養(yǎng)殖用水要求；(2)對(duì)病鱘膿包處用無菌注射器吸取血水，并注入生理鹽水反復(fù)清洗創(chuàng)口2～3次；(3)注射氟苯尼考針劑(有效含量5%，注射劑量0.3～0.5 mL/kg)，1次/2 d，連用5～8次。由于本病不易早期發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)后，疾病進(jìn)程已達(dá)到后期，采用上述方法，經(jīng)跟蹤調(diào)查治愈率僅為10%。

2.6 腹水病

2.6.1 臨床癥狀及解剖特征

病鱘體表完整無傷，提起頭部可見由肛門流出紅色液體，劃開肛門立即涌出紅色腹水；解剖可見體腔內(nèi)存在大量紅色腹水，體腔內(nèi)壁及部分臟器、性腺被腹水染紅(圖1f)。

2.6.2 診斷方法及病因分析

根據(jù)癥狀可作初步診斷。無菌操作對(duì)病鱘體腔內(nèi)的腹水開展細(xì)菌分離，可分離到大量奶白色的細(xì)菌，經(jīng)鑒定為嗜水氣單胞菌，可確診為腹水病。此病主要危害中華鱘幼魚，系高溫季節(jié)感染嗜水氣單胞菌而致病。在疾病診斷時(shí)易誤診為細(xì)菌性敗血癥，應(yīng)加以注意。

2.6.3 控制方法

(1)投喂多維(3 g/kg飼料)+氟苯尼考(20 mg/kg體質(zhì)量)藥餌，1次/d，連用5～7 d；(2)適當(dāng)降低投喂量以降低魚體生理負(fù)荷；(3)嚴(yán)重者停食3～5 d，以恢復(fù)魚體消化能力。采用上述方法，經(jīng)跟蹤調(diào)查治愈率為80%。

圖1 患病中華鱘外觀與剖檢變化a.細(xì)菌性敗血癥； b.腸炎病； c.細(xì)菌性爛鰓?。?d.花斑??； e.膿包??； f.腹水病.箭頭示患病部位.

3 討 論

3.1 氣單胞菌的致病性

3.2 中華鱘細(xì)菌性疾病的種類及診斷要點(diǎn)

細(xì)菌性疾病是魚類中最為常見且危害較大的一類疾病。隨著中華鱘養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，學(xué)者對(duì)中華鱘保護(hù)技術(shù)的探索也未曾間斷。筆者近十年來對(duì)中華鱘病害的流行病學(xué)調(diào)查及防治技術(shù)研究結(jié)果顯示，中華鱘病害以細(xì)菌性疾病為主，這與江南等[30]的研究結(jié)果相似。此外，擬馬頸魚虱(Pseudotracheliastessoldtovi)病、日本鲺(Argulusjaponicus)病和魚鰾失調(diào)癥在中華鱘人工養(yǎng)殖過程中也陸續(xù)發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，中華鱘細(xì)菌性疾病除已報(bào)道的細(xì)菌性敗血癥[10]、爛鰓病[11]、腸炎病[12]等常見疾病外，還陸續(xù)出現(xiàn)了花斑病、膿包病和腹水病等新病。人工養(yǎng)殖中華鱘易患細(xì)菌性疾病，可能受養(yǎng)殖密度大、餌料營(yíng)養(yǎng)不均衡、水環(huán)境惡化、水溫升高或魚體抵抗力下降等因素影響[19,31]。在中華鱘的細(xì)菌性疾病研究過程中，疾病的早期診斷在防控過程中具有極為重要的作用[14]。但在中華鱘細(xì)菌性敗血癥、腸炎病和腹水病的診斷過程中，其臨床癥狀及解剖情況存在相似之處，且病原體均為氣單胞菌，易造成漁業(yè)工作者的誤診。細(xì)菌性敗血癥與腸炎病的診斷要點(diǎn)在于后者一般僅限于腸道充血明顯，且腸道變薄、彈性差；細(xì)菌性敗血癥與腹水病的診斷要點(diǎn)在于后者主要發(fā)生高溫季節(jié)，且體表無明顯疾病癥狀，解剖體腔內(nèi)可見大量腹水，內(nèi)臟非實(shí)質(zhì)性充血。

3.3 建立中華鱘健康評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，保障中華鱘健康成長(zhǎng)