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    氧化苦參堿緩釋片抗血栓作用的研究

    2018-11-28 01:39:32呂文偉
    關(guān)鍵詞:模型

    劉 芬,呂文偉,陳 霞

    (吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,吉林 長(zhǎng)春130021)

    氧化苦參堿(oxymatrine,OMT)是從豆科槐屬植物苦參(Sophora flavescens Ait.)等中提取的生物堿,具有四環(huán)的喹嗪啶類結(jié)構(gòu)。本課題組前期實(shí)驗(yàn)研究證明,氧化苦參堿(OMT)具有抗炎、鎮(zhèn)痛、降壓、抗心律失常等多種藥理作用[1-3]。另?yè)?jù)研究報(bào)道,氧化苦參堿體內(nèi)半衰期較短,生物利用度低[4]。有學(xué)者認(rèn)為是由于氧化苦參堿水溶性較強(qiáng),難于通過(guò)生物膜的原因[5]。因此,氧化苦參堿的制劑已嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用。為提高生物利用度,延緩藥物在人體內(nèi)釋放的速率、降低人體對(duì)藥物成分吸收速率的作用。本實(shí)驗(yàn)用氧化苦參堿與氧化苦參堿緩釋片比較抗血栓、改善血液流變性指標(biāo)的作用,觀察氧化苦參堿緩釋制的作用效果。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物

    Wister大鼠,雌雄各半,體重230-250 g,由長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供,合格證號(hào):SCXK-吉2015-0001。

    1.2 藥品

    氧化苦參堿(質(zhì)量分?jǐn)?shù)>99%),由寧夏紫荊花藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn);0.9%生理鹽水,批號(hào):150624D9,哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn);鹽酸腎上腺素注射液,批號(hào):4A09006,上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn);水合氯醛,批號(hào):20010712,上?;瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn);二磷酸腺苷(ADP ),批號(hào):990220,上?;瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn);枸櫞酸鈉,批號(hào):20100727,北京化工廠;磷酸緩沖液粉劑,批號(hào):AR0030,博士德生物有限公司;肝素,批號(hào):421F024;上?;瘜W(xué)試劑廠。緩釋片制備方法:氧化苦參堿40.0 g、羥丙甲纖維素30.0 g、丙烯酸樹(shù)脂10.0 g、加入適量的90%乙醇水溶液,制軟材50-60℃干燥,加人1%硬脂酸鎂和3%乳糖混勻,壓制100片即得氧化苦參堿緩釋片。

    1.3 儀器

    半自動(dòng)血液流變儀,型號(hào),北京普利生生產(chǎn),血液混勻儀,型號(hào),HY-1,北京宏潤(rùn)達(dá)科技發(fā)展有限公司,小動(dòng)物血栓形成儀,型號(hào),YLS-14B,濟(jì)南益延科技發(fā)展公司,全自動(dòng)血小板凝聚儀,型號(hào),LBY-NJ2,北京普利生生產(chǎn),自動(dòng)平衡離心機(jī),型號(hào),LDZ5-2,北京醫(yī)用離心機(jī)生產(chǎn)。半自動(dòng)凝血分析儀,型號(hào),PUN-2048A,北京普朗新技術(shù)有限公司。

    1.4 方法

    1.4.1實(shí)驗(yàn)分組及給藥

    實(shí)驗(yàn)分為6組,每組20只。分組及給藥劑量如下:模型組、正常對(duì)照組給予生理鹽水,OMT對(duì)照組劑量為200.0 mg·kg-1,OMT緩釋片劑量為50.0、100.0、200.0 mg·kg-1。按上述劑量灌胃給藥,每日一次,連續(xù)給藥7天。

    1.4.2制備急性血瘀模型

    除正常對(duì)照組外,其它5組動(dòng)物末次灌胃給藥1 h后每只大鼠sc注射2次0.1%鹽酸腎上腺素,每次0.8 ml·kg-1,間隔4 h,中間進(jìn)行一次冰水浴,溫度保持0-2℃,浸泡5 min,大鼠禁食不禁水12 h。

    1.4.3OMT緩釋片對(duì)血瘀大鼠全血黏度、血漿黏度的測(cè)定

    每組取10只大鼠,皮下注射10%水合氯醛3 ml·kg-1進(jìn)行麻醉,在腹部正中剪開(kāi)皮膚,于腹主動(dòng)脈插管取血,1%肝素抗凝(血液與抗凝劑的體積比為9∶1),應(yīng)用LBY-N6K半自動(dòng)血液流變儀測(cè)定全血高切比黏度、低切比黏度及血漿黏度。

    1.4.4OMT緩釋片對(duì)血瘀大鼠體內(nèi)、體外血栓的測(cè)定

    每組取10只大鼠,用10%水合氯醛腹腔注射3 ml·kg-1進(jìn)行麻醉,頸部常規(guī)手術(shù),分離右側(cè)頸總動(dòng)脈約15 mm,避免損傷血管表面和周圍神經(jīng)影響結(jié)果,將剝離好的頸總動(dòng)脈勾入紅外線監(jiān)測(cè)探頭的溝槽內(nèi),記錄因動(dòng)脈官腔內(nèi)血栓形成阻塞率達(dá)20%左右的時(shí)間,即血栓形成時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,腹主動(dòng)脈取血1.8 ml注入內(nèi)徑4 mm硅膠管內(nèi),置入37℃血液混勻儀內(nèi),轉(zhuǎn)動(dòng)15 min,取出血栓,測(cè)量體外血栓長(zhǎng)度。濾紙吸凈血栓水分,稱血栓濕量。將血栓放入干燥箱,60℃烘烤15 min,稱重,即為血栓干重。

    1.4.5OMT緩釋片對(duì)血瘀模型大鼠血小板聚集率及PT、APTT的測(cè)定

    從上述血瘀模型大鼠腹主動(dòng)脈取動(dòng)脈血3 ml,用3.28%枸櫞酸鈉抗凝(血液與抗凝劑的體積比為9∶1),以1 500 rpm離心5 min,制備富血小板血漿(PRP),其余血液3 000 rpm離心10 min,獲取貧血小板血漿(PPP),以PPP調(diào)零,在200 μl PRP中加入ADP, ADP誘導(dǎo)劑最終濃度為4 μM/L,應(yīng)用LBY-NJ2全自動(dòng)血小板凝聚儀測(cè)定血小板5 min內(nèi)最大聚集率。取貧血小板血漿(PPP),采用PUN-2048A型血小板凝血分析儀測(cè)定凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血酶原時(shí)間(APTT)。

    1.4.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x—±s)表示,均數(shù)比較用單因素方差分析(One-wauANDVA),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 氧化苦參堿緩釋片對(duì)全血和血漿黏度的影響

    高切比黏度、低切比黏度、血漿黏度指標(biāo)與正常對(duì)照組比較,模型組差異有顯著性(P<0.05,P<0.01,P<0.01),OMT200 mg·kg-1、OMT緩釋片50.0、100.0、200.0 mg·kg-1可降低高切比黏度和低切比黏度。血漿黏度則表現(xiàn)在OMT緩釋片100.0、200.0 mg·kg-1組,見(jiàn)表1。

    表1 氧化苦參堿緩釋片對(duì)全血和血漿黏度的影響(x—±s,n=10)

    注:與正常對(duì)照組比較#P<0.05,##P<0.01;與模型組比較*P<0.05,**P<0.01

    2.2 氧化苦參堿緩釋片對(duì)體內(nèi)、體外血栓的影響

    OMT200 mg·kg-1、OMT緩釋片100.0、200.0 mg·kg-1可明顯降低血栓長(zhǎng)度、濕重、干重質(zhì)量(P<0.05,P<0.01),模型組與正常對(duì)照組比較血栓形成時(shí)間差異有顯著性(P<0.05,P<0.01,P<0.01),說(shuō)明模型成立。OMT200 mg·kg-1、OMT緩釋片100.0、200.0 mg·kg-1組可明顯延緩電刺激大鼠頸總動(dòng)脈血栓的形成,與模型組比較有顯著性差異(P<0.05,P<0.001)。見(jiàn)表2。

    表2 氧化苦參堿緩釋片對(duì)體外血栓、體內(nèi)血栓形成時(shí)間的影響(x—±s,n=10)

    注:與正常對(duì)照組比較 #P<0.05,##P<0.01;與模型組比較*P<0.05,**P<0.01

    2.3 氧化苦參堿緩釋片對(duì)血小板聚集率、PT、APTT的影響

    模型組與正常對(duì)照組比較血小板最大聚集率差異有顯著性(P<0.05,P<0.01),OMT200 mg·kg-1、OMT緩釋片100.0、200.0 mg·kg-1組與模型組比較降低血小板聚集率(P<0.05,P<0.01)。OMT200 mg·kg-1、OMT緩釋片100.0、200.0 mg·kg-1組延長(zhǎng)凝血酶原(PT)和活化部分凝血酶原(APTT)凝集時(shí)間。見(jiàn)表3。

    表3 氧化苦參堿緩釋片對(duì)血小板聚集率、PT、APTT的影響(x—±s,n=10)

    注:與正常對(duì)照組比較#<0.05,##P<0.01;與模型組比較*P<0.05,**P<0.01

    3 討論

    本課題組已對(duì)氧化苦參堿對(duì)大鼠局灶性腦缺血性損傷的保護(hù)作用進(jìn)行了研究[6]。氧化苦參堿緩釋片具體藥理作用,尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究觀察氧化苦參堿緩釋片抗血栓作用。以血栓和血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)為觀察點(diǎn),結(jié)果表明氧化苦參堿緩釋片能夠劑量依賴性改善皮下注射腎上腺素加冰水冷浴法所致的大鼠急性血瘀模型作用,延長(zhǎng)凝血時(shí)間、體外血栓形成時(shí)間、降低血瘀大鼠血粘度、血小板聚集率、降低大鼠血栓干、濕重質(zhì)量。目前許多研究表明,血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和血流狀態(tài)的變化是血栓形成的重要原因[7]。由于紅細(xì)胞處于聚集狀態(tài),在毛細(xì)血管中流動(dòng)則顯示全血低切黏度狀態(tài),如果紅細(xì)胞處于分散狀態(tài),在大血管中流動(dòng)則顯示全血高切黏度狀態(tài)。在體外血栓實(shí)驗(yàn)中,由于加熱可使蛋白變形,血液凝固性增加,導(dǎo)致血栓形成[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與模型組比較,氧化苦參堿緩釋片能夠改善血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo),降低血栓形成。特別是氧化苦參堿緩釋片100.0 mg·kg-1劑量組,在各個(gè)指標(biāo)中作用均與氧化苦參堿200.0 mg·kg-1劑量組相同,提示氧化苦參堿緩釋片具有用量小的特點(diǎn),可有效的應(yīng)用在臨床抗血栓治療。

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