高效液相色譜法在藥物分析實驗中的應(yīng)用

龔逸奕

【摘要】2015年藥典和加10年藥典相比，越來越多的藥物的檢驗技術(shù)依賴于高效液相色譜法，這也在客觀上要求醫(yī)藥類職業(yè)學(xué)院要加強高效液相色譜法的講授。在藥物分析這門課程中，地西泮注射液含量測定，諾氟沙星膠囊含量測定，阿司匹林片劑中雜質(zhì)含量測定這幾個實驗都要求用HPLC進行，這也是醫(yī)藥化工行業(yè)的標準操作規(guī)范。因此，筆者通過在教學(xué)中總結(jié)出幾條經(jīng)驗，為以后實驗教學(xué)質(zhì)量的改進提供一定的理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】藥物分析 HPLC 含量測定 經(jīng)驗總結(jié)

高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）技術(shù)始于20世紀60年代末期，是以氣相色譜和經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)的新型分析技術(shù)網(wǎng)。高效液相色譜具有分辨率高、速度快、分析精準等優(yōu)點，從而使其在藥物分析研究中對于物質(zhì)的分離和分析占據(jù)越來越重要的作用，成為目前醫(yī)藥行業(yè)研究中的一種重要分析手段，也是各大高等學(xué)校藥學(xué)等相關(guān)專業(yè)藥物分析課程中的一個重點內(nèi)容。隨著科學(xué)技術(shù)的突飛猛進和國家經(jīng)濟建設(shè)的快速發(fā)展，高效液相色譜作為一種重要的分離分析技術(shù)，需求和應(yīng)用越來越廣泛[1]。國家對高等教育的投入日益增大，高校的辦學(xué)規(guī)模、教學(xué)質(zhì)量和基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)都有了明顯的改善和提高[2-5]，同時對實驗設(shè)備的經(jīng)費投入也逐年增加。我校根據(jù)醫(yī)藥行業(yè)的實際情況，大力支持發(fā)展HPLC的實驗教學(xué)，購人國產(chǎn)普源儀器八套及進口島津，安捷倫儀器各兩套，基本能夠滿足學(xué)生的日常教學(xué)要求。但是，在實際教學(xué)過程中，還是會遇到各種問題，以下是筆者的一些教學(xué)經(jīng)驗。

一、培養(yǎng)學(xué)生預(yù)習(xí)復(fù)習(xí)習(xí)慣

高職學(xué)校的學(xué)生數(shù)理化成績普遍不高，因此，大多數(shù)學(xué)生對課堂內(nèi)容掌握不

深，對于高效液相色譜的基本原理基本不懂，有些學(xué)生只是死記硬背所有的操作步驟，由于所有的記憶沒有建立在理解的基礎(chǔ)上，因此課程結(jié)束以后，便會忘記所有課程內(nèi)容，對今后的學(xué)習(xí)和工作完全沒有幫助。針對于此，筆者要求學(xué)生課前預(yù)習(xí)溶劑組織器，高壓泵，自動進樣器，紫外檢測器的工作原理及操作藥典，并要求課代表實現(xiàn)把學(xué)生分成若干小組，分組檢查，上課時，我再對全體學(xué)生進行抽查，不合格的學(xué)生不得進行操作，本次實驗成績?yōu)榱惴帧?/p>

二、要求學(xué)生進行樣品前處理操作

前處理工作往往相當耗費時間，因此在一些實驗安排中該部分工作都由教師提前完成了，導(dǎo)致很多分學(xué)過高效液相色譜實驗的同學(xué)都不能很好掌握。一般前處理包括試劑的純化、樣品溶解、樣品的過濾等步驟。這些前處理非常重要，一方面有利于儀器的保護，特別是直接關(guān)系樣品分析的有效性。因此，我們綜合考慮實驗學(xué)時，要求對樣品的過濾必須進行，讓學(xué)生熟悉該過程，并且在過濾過程中講授其它前處理方法和步驟。另外，通過前處理操作可以使學(xué)生掌握超聲儀，超濾裝置等儀器的使用，還能訓(xùn)練學(xué)生進行容量瓶的使用，微孔濾膜的選擇，流動相及色譜柱的選擇，為將來的檢驗崗位工作提供一定的經(jīng)驗。

三、分組教學(xué)，逐個輔導(dǎo)和考核

目前我校的實驗條件還無法做到一人一組的教學(xué)，一般將學(xué)生分為6組，每組四人進行教學(xué)工作，但是在實際教學(xué)工作中，難免出現(xiàn)有個別同學(xué)得不到操作機會，導(dǎo)致在實驗考核過程中什么都不會，為了避免此類情況的發(fā)生，筆者將本門課程所要進行的四節(jié)HPLC實驗課進行標記，每次的主操作人員必須不同，例如：在進行阿司匹林片劑中雜質(zhì)含量測定時，主操作人員是學(xué)生A，在進行諾氟沙星膠囊含量測定時，主操作人員就是學(xué)生B，以此類推，這樣每個學(xué)生都會得到均等的練習(xí)機會。并且在分組教學(xué)的過程中，教師詳細講解第一個實驗操作，接下來的幾個實驗可以輔導(dǎo)學(xué)生單獨完成，這樣更培養(yǎng)學(xué)生獨立思考的能力和團結(jié)協(xié)作的精神。實驗考核可采用單獨考核的方式，每個學(xué)生必須單獨完成過關(guān)，包括理論考試，前處理操作考試和樣品檢驗考試，盡量做到使每一個學(xué)生熟悉每一個緩解。

四、學(xué)生申報相關(guān)大學(xué)生課題

對于求知欲比較強，有進一步學(xué)歷發(fā)展需求的學(xué)生，可以鼓勵其報課題，課題內(nèi)容可與HPLC相關(guān)，這樣可以通過查閱資料及反復(fù)操作，進一步加深對HPLC的認識，并且將實際運用和科學(xué)研究聯(lián)系起來，全面加強學(xué)生的科研及實際操作水平。目前，學(xué)生正在進行《飲料中咖啡因含量測定》及《常見汽水中苯甲酸含量測定》兩項大學(xué)生課題，大量的學(xué)生參與到了其中，為學(xué)生的未來發(fā)展提供了中藥的助力。

五、結(jié)語

筆者通過和教研室相關(guān)教師的討論，共同提出了以上實驗教學(xué)改革方案，通過最后實驗考核結(jié)果，明顯發(fā)現(xiàn)學(xué)生操作能力的提升，通過對從事相關(guān)崗位的回訪，學(xué)生對以上教學(xué)改革也頗為滿意。我們在接下來的教學(xué)改革過程中堅持以研究問題為中心，開設(shè)綜合性、實用性實驗，提高大專生的實際操作和自主學(xué)習(xí)能力。結(jié)合高效液相色譜實驗，教會學(xué)生“提出問題分析問題解決問題”的系統(tǒng)學(xué)習(xí)方法，培養(yǎng)學(xué)生系統(tǒng)全面的分析解決問題的能力；培養(yǎng)相關(guān)專業(yè)學(xué)生的使用高效液相色譜儀的實踐動手操作能力，使學(xué)生在進入實習(xí)后可以獨立操作高效液相色譜儀。

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