補益肝腎中藥添加劑對蛋雞生產(chǎn)性能、抗氧化指標(biāo)及生殖激素分泌的影響

張金漢，何萬領(lǐng)，徐廷生，李曉麗，楊龍幫

（河南科技大學(xué)動物科技學(xué)院，生物飼料與精準(zhǔn)營養(yǎng)實驗室，河南洛陽 471023）

肝臟和腎臟分別是動物體內(nèi)最大的分解和合成器官、排泄器官，肝腎對雞蛋的形成及整個產(chǎn)蛋周期的維持具有十分重要的作用[1]。然而，在現(xiàn)代集約化蛋雞生產(chǎn)中，密集的飼養(yǎng)環(huán)境和高強度的生產(chǎn)過程對蛋雞肝臟和腎臟的應(yīng)激加大，造成產(chǎn)蛋周期縮短，死淘增加現(xiàn)象普遍。人類中醫(yī)藥學(xué)研究證實，肝臟、腎臟等臟腑與生殖關(guān)系密切[2]。調(diào)控肝腎機能將有望提高蛋雞生產(chǎn)性能，延長產(chǎn)蛋周期。

隨著抗生素在養(yǎng)殖業(yè)中的逐漸禁用，中草藥以其無毒副作用、無殘留、無抗藥性，且活性成分多樣，具有綜合調(diào)理和預(yù)防疾病的功能，在畜禽生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用。一些補肝益腎類中草藥將有望在改善產(chǎn)蛋后期蛋雞肝臟和腎臟機能、延長其生長周期、降低死淘率等方面發(fā)揮重要作用。為此，本試驗選用女貞子、巴戟天、菟絲子、白芍、當(dāng)歸、五味子、杜仲、淫羊藿、枸杞、牛膝、黃芪、川斷、山須臾等16種補肝益腎類中藥原料，根據(jù)中藥配伍原則，結(jié)合蛋雞生理特點，自擬4個補益肝腎中藥復(fù)方，研究其對蛋雞生產(chǎn)性能、肝腎抗氧化性能及生殖激素分泌的影響，為補肝益腎類中藥飼料添加劑的開發(fā)與應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 中草藥添加劑復(fù)方制備 女貞子、巴戟天、菟絲子、白芍、當(dāng)歸、五味子、杜仲、淫羊藿、枸杞、牛膝、黃芪、川斷、山須臾等16種補肝益腎類中藥材購自洛陽市關(guān)林中藥材市場，經(jīng)除雜、干燥、粉碎后過60目篩。將16種中草藥根據(jù)中藥配伍原則，結(jié)合蛋雞生理特點組成4個補益肝腎中草藥添加劑復(fù)方。復(fù)方1：女貞子、巴戟天、枸杞、牛膝等；復(fù)方2：白芍、淫羊藿、菟絲子、杜仲等；復(fù)方3：女貞子、淫羊藿、熟地黃、牛膝等；復(fù)方4：白芍、巴戟天、菟絲子、枸杞等。

1.2 試驗設(shè)計及飼養(yǎng)管理 將400只健康且體重均勻的60周齡海蘭褐蛋雞隨機分成5組，分別為對照組和試驗 Ⅰ、ⅠⅠ、ⅠⅠⅠ 、ⅠV 組。每組 4個重復(fù)，每個重復(fù) 20只雞。每天08:00和16:00各喂1次料，采用自然光照和人工光照相結(jié)合的方法保證每天16 h連續(xù)光照。試驗全期蛋雞自由采食與飲水，定期對雞舍進行衛(wèi)生管理和消毒。預(yù)試期7 d，正試期42 d。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧（原料組成及營養(yǎng)成分見表1），試驗Ⅰ、ⅠⅠ、ⅠⅠⅠ和ⅠV組分別在基礎(chǔ)日糧中添加1%的補益肝腎中藥添加劑復(fù)方1、復(fù)方2、復(fù)方3和復(fù)方4，從而制成含不同中藥復(fù)方的試驗日糧。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 樣品采集 在試驗第42天禁食，12 h后每個重復(fù)隨機取4只雞，用一次性真空采血管于翅下靜脈采集血液5 mL，傾斜靜置10 min，3 000 r/min 離心8 min，分離獲得血清。采血完畢將蛋雞處死，解剖，取肝臟、腎臟組織，用以抗氧化指標(biāo)的測定。

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 生產(chǎn)性能 試驗期間，每周以重復(fù)為單位記錄蛋雞產(chǎn)蛋量、耗料量和不良蛋數(shù)（臟蛋、沙皮蛋、軟皮蛋、血斑蛋等），并計算產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比和不良蛋率。

1.4.2 蛋品質(zhì) 在試驗第42天，每個重復(fù)隨機取4枚雞蛋，使用游標(biāo)卡尺測量雞蛋的縱軸、橫軸，計算蛋形指數(shù)（蛋形指數(shù)=縱軸/橫軸）；用蛋殼強度儀（Ⅰn-Spec 2200，美國ⅠNSTRON公司）、螺旋測微器（Mitutoyo103-137，日本三豐公司）和蛋品質(zhì)測定系統(tǒng)（EMT5200，日本Robotmation公司）測定雞蛋的蛋殼顏色、蛋殼強度、蛋殼厚度、蛋白高度和哈夫單位等蛋品質(zhì)指標(biāo)。

1.4.3 生殖激素 采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELⅠSA）測定血清樣品中雌二醇（E2）、促卵泡素（FSH）和促黃體素（LH）的水平，具體操作步驟按說明書進行。酶聯(lián)免疫檢測試劑盒購于南京建成生物工程研究所，貨號分別為E2（H102）、FSH（H101）、LH（H206）。

1.4.4 肝臟、腎臟抗氧化指標(biāo) 取肝臟、腎臟組織各0.5 g，按重量（g）:體積（mL）為1:9的比例加入冷的生理鹽水，在冰水浴條件下經(jīng)組織研磨儀（COYOTE G50）研磨成10%的肝臟、腎臟組織勻漿液，2 500 r/min離心10 min后取上清液進行抗氧化指標(biāo)檢測。使用試劑盒測定組織勻漿上清液中總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA），按說明書具體操作步驟進行測定。試劑盒購自南京建成生物工程研究所，測試盒貨號分別為T-AOC（A015）、SOD（A001-1）、GSH-Px（A005）、CAT（A007-1）、MDA（A003-1）。

1.5 統(tǒng)計分析 用Excel 進行初步數(shù)據(jù)處理，采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件中的One-Way ANNOVA的運算模塊進行單因素方差分析，用Duncan's法進行多重比較。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示，以P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 補益肝腎中草藥添加劑對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響 如表2所示，4種補肝腎復(fù)方中草藥飼料添加劑對蛋雞的平均日采食量無顯著影響（P＞0.05）；與對照相比，試驗Ⅰ、ⅠⅠ、ⅠⅠⅠ、ⅠV組產(chǎn)蛋率分別顯著提高了7.73%、23.90%、17.91%和20.75%（P＜0.05）；試驗ⅠⅠ組的平均蛋重最大，顯著高于對照組和其他中草藥復(fù)方組（P＜0.05）；與對照組相比，試驗 ⅠⅠ、ⅠⅠⅠ組和 ⅠV組料蛋比顯著降低（P＜0.05），試驗ⅠⅠ、ⅠV組的不良蛋率顯著降低（P＜0.05）。

由表3可知，與對照組相比，試驗ⅠⅠ組和ⅠV組的蛋殼顏色顯著變深（P＜0.05）；各中草藥復(fù)方組雞蛋蛋白高度和哈夫單位分別較對照組提高了17.07%（P＜0.05）、11.20%（P＜0.05）、25.05%（P＜0.05）、5.12%（P＞0.05）和11.63%（P＜0.05）、10.31%（P＜0.05）、16.69%（P＜0.05）、6.90%（P＞0.05）；與對照組相比，各復(fù)方組蛋殼強度和蛋形指數(shù)無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 補益肝腎中藥添加劑對蛋雞肝臟和腎臟抗氧化性能的影響 由表4可知，與對照組相比，試驗Ⅰ組腎臟GSH-Px顯著提高（P＜0.05），但肝臟和腎臟的其他抗氧化指標(biāo)與對照組差異不顯著（P＞0.05）；試驗ⅠⅠ組蛋雞肝臟和腎臟中T-AOC、SOD、GSH-Px和CAT活性顯著升高（P＜0.05）；試驗ⅠⅠⅠ組SOD和CAT活性顯著升高（P＜0.05）；試驗ⅠV組肝臟T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT活性和腎臟SOD、GSH-Px、CAT活性顯著升高（P＜0.05）；與對照組相比，試驗 ⅠⅠ、ⅠⅠⅠ和ⅠV組肝臟MDA水平和ⅠⅠ組腎臟MDA水平均顯著下降（P＜0.05）。

表2 補益肝腎中草藥添加劑對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

表3 補益肝腎中草藥飼料添加劑對產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)的影響

表4 補益肝腎中藥添加劑對產(chǎn)蛋后期蛋雞肝臟、腎臟抗氧化性能的影響

表5 補益肝腎中藥添加劑對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清生殖激素的影響

2.3 補益肝腎中藥添加劑對蛋雞生殖激素的影響 如表5所示，與對照組相比，中藥添加劑各組蛋雞血清FSH水平顯著升高（P＜0.05），試驗ⅠⅠ組和ⅠV組顯著高于試驗ⅠⅠⅠ組（P＜0.05）；試驗ⅠⅠ組E2水平顯著高于對照組和試驗ⅠⅠⅠ組（P＜0.05），LH水平顯著高于其他各中藥試驗組（P＜0.05）；試驗Ⅰ組E2和LH水平與對照組無顯著差異（P＞0.05）。

3 討 論

3.1 補益肝腎中草藥添加劑對蛋雞生產(chǎn)性能的影響 大量研究表明，隨著蛋雞生產(chǎn)周期的延長，肝臟分解與合成能力降低，腎氣衰弱，進而引起生殖器官衰退，生產(chǎn)性能逐漸下降[3-4]。本試驗發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，4個補益肝腎中草藥復(fù)方均不同程度地提高了蛋雞產(chǎn)蛋率、降低料蛋比和不良蛋率，其中以白芍、淫羊藿和菟絲子等組成的中草藥添加劑復(fù)方（復(fù)方2）效果最好；在改善蛋品質(zhì)方面，補益肝腎中藥添加劑對蛋雞蛋殼顏色、蛋白高度、哈夫單位、蛋殼強度和蛋殼厚度均有改善作用，其中戈貞子、淫羊藿和熟地黃等組成的復(fù)方（復(fù)方3）效果最為理想。這一結(jié)果可能原因：一方面補益肝腎中草藥添加劑通過改善產(chǎn)蛋后期蛋雞肝腎機能而間接調(diào)控蛋雞的生產(chǎn)性能；另一方面補益肝腎中草藥添加劑中活性成分可能對蛋雞生殖器官產(chǎn)生直接作用?，F(xiàn)代中醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，補肝益腎類中草藥能夠改善人類生殖機能障礙[2,5]。研究表明，肝臟合成的膽固醇、甘油三酯等與載脂蛋白結(jié)合形成極低密度脂蛋白（VLDL）運輸?shù)铰殉仓?，促進蛋黃形成，相反，肝臟機能異常時，蛋黃形成受阻，產(chǎn)蛋性能下降[6]。蛋品質(zhì)是衡量蛋雞生產(chǎn)性能的又一重要指標(biāo)。其中，蛋殼質(zhì)量是產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋品質(zhì)下降最嚴(yán)重的指標(biāo)之一，鈣吸收利用率降低是影響蛋殼質(zhì)量的主要因素[7]。研究表明，鈣吸收利用受肝、腎合成1，25-二羥基膽鈣化醇的影響，一方面，1，25-二羥基膽鈣化醇通過VD（VDR）受體介導(dǎo)的基因組使小腸黏膜鈣結(jié)合蛋白-D9k增加而促進鈣吸收[8]；另一方面，1，25-二羥基膽鈣化醇可增加鈣-ATP酶的活性，從而增強鈣向血液中的轉(zhuǎn)運[9]。本試驗中，飼料中鈣含量為3.2%，略低于蛋雞對鈣的營養(yǎng)需要量，這可能是造成各組生產(chǎn)水平偏低的原因之一。但中藥添加組的產(chǎn)蛋率和蛋品質(zhì)較對照組有所提高和改善，這可能與補肝益腎中藥增加了鈣的轉(zhuǎn)運、吸收有關(guān)，具體有效物質(zhì)和作用機理有待于進一步研究。

3.2 補益肝腎中草藥添加劑對蛋雞肝腎抗氧化性能的影響 動物機體內(nèi)活性氧（ROS）的產(chǎn)生、利用與清除維持著動態(tài)平衡，當(dāng)機體ROS產(chǎn)生和抗氧化體系失衡時，可引起氧化應(yīng)激，進而導(dǎo)致機體內(nèi)脂質(zhì)、蛋白、核酸等大分子過氧化，影響機體健康和生產(chǎn)性能[10]。因此，SOD、GSH-Px、CAT、T-AOC等抗氧化酶類含量和活力及氧化代謝產(chǎn)物MDA水平往往被用作評價機體組織器官機能的重要指標(biāo)[11]。本試驗結(jié)果顯示，在產(chǎn)蛋后期蛋雞日糧中添加補肝益腎中草藥添加劑能夠提高肝臟和腎臟T-AOC的量以及SOD、GSH-Px、CAT的活性，降低了MDA水平。這表明補益肝腎中草藥復(fù)方能夠通過提高肝臟和腎臟抗氧化能力而達(dá)到補肝益腎的作用，這與馬春陽等[12]報道的結(jié)果相似。中草藥成分復(fù)雜，活性物質(zhì)多樣，其中多糖、黃酮類等生物活性物質(zhì)被證明能夠有效提高動物機體抗氧化水平。研究表明，補肝益腎中草藥具有增加肝臟和腎臟的血流量，改善血管微循環(huán)系統(tǒng)，促進損傷細(xì)胞修復(fù)，增強細(xì)胞內(nèi)氧化自由基的清除能力[13]。季麗萍[14]通過給大鼠灌服含熟地黃、枸杞等補腎中藥制劑，發(fā)現(xiàn)能增加大鼠的心肌收縮力，增加心肌供氧，并且減少了自由基的生成、降低了對細(xì)胞膜的損害。史東輝等[15]研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)方中草藥制劑可通過調(diào)控蛋雞肝臟和腎臟組織中抗氧化酶mRNA的表達(dá)而明顯提高蛋雞腎臟、肝臟的抗氧化能力。本試驗中，4個補益肝腎中草藥復(fù)方對肝腎抗氧化性能的作用效果不一，這可能與各中藥活性成分發(fā)揮作用的通路不同有關(guān)，其具體作用機制有待進一步研究。

3.3 補益肝腎中草藥添加劑對蛋雞生殖激素的影響 蛋雞產(chǎn)蛋是通過“下丘腦-垂體-性腺軸（卵巢）”所分泌的激素相互調(diào)節(jié)的結(jié)果。一方面，F(xiàn)SH和LH作為蛋雞卵泡發(fā)育的主要調(diào)控激素，對促進卵泡生長發(fā)育和成熟起關(guān)鍵作用，并同時促進卵巢分泌E2等性激素；另一方面，蛋雞卵巢分泌的E2等性激素與孕激素（P）協(xié)同作用，發(fā)動下丘腦和垂體引起LH釋放從而引起排卵[16]。隨著生產(chǎn)周期延長，蛋雞體內(nèi)生殖激素水平的降低是其產(chǎn)蛋性能下降的主要因素之一。楊文斌等[17]研究發(fā)現(xiàn)，補腎中草藥可提高大鼠主動脈、垂體和下丘腦雌激素受體的α、β基因的表達(dá)，證明了補腎中藥對提高雌激素受體-配體的結(jié)合力有改善作用。體外細(xì)胞試驗表明，補肝腎中藥能夠提高體外受精胚胎卵泡液轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGFβ1）和性激素水平[18]。此外，部分補益肝腎中藥具有雌激素樣作用，對性腺軸具有雙向調(diào)節(jié)的功能，使沖任胞脈通暢，有利于卵子發(fā)育和排出。李炳奇等[19]研究表明，中草藥中具有雌激素樣作用的黃酮類能夠明顯增加大鼠卵巢、子宮質(zhì)量，原因是黃酮類促進了卵巢中各級卵泡總數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度。這一作用對提高蛋雞產(chǎn)蛋性能和改善蛋品質(zhì)均具有正向效果。本試驗中，4個補益肝腎中藥添加劑復(fù)方均不同程度提高了蛋雞FSH、LH和E2水平，這可能是上述補益肝腎中藥添加劑提高產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的重要原因之一。

4 結(jié) 論

在蛋雞飼糧中添加1%補肝益腎中草藥添加劑，能夠增強蛋雞肝臟和腎臟抗氧化能力，促進生殖激素分泌，提高蛋雞的產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)。綜合效果來看，以白芍、淫羊藿、菟絲子和杜仲等組成的復(fù)方2最好。