犬小孢子菌性皮膚真菌病的流行病學調(diào)查

張永東 李 志 姜 晨 （北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院 北京 房山 102442）

李貞玉* （美聯(lián)眾合動物醫(yī)院轉(zhuǎn)診中心 北京 朝陽）

本研究對北京8家動物醫(yī)院2026例犬皮膚病臨床初診病例進行了調(diào)查分析，通過臨床癥狀、伍德氏燈檢查和直接鏡檢進行犬真菌性皮膚病初步診斷，以SDA等進行接種純培養(yǎng)和鏡檢分離鑒定致病真菌病原。結(jié)果顯示：在所調(diào)查的2026例犬皮膚病病例中，皮膚真菌病245例，占12.09%；犬小孢子菌157株，占犬皮膚真菌病病例的64.08%；犬小孢子菌感染幼齡犬77例，占49.04%；母犬81例，占51.59%；6～11月發(fā)病104例，占66.24%；頭部發(fā)病46例，占29.30%。結(jié)論：犬小孢子菌為致病的主要病原真菌，幼齡犬、母犬、6～11月、頭部發(fā)病率最高。

犬小孢子菌皮膚真菌病是一種傳染性強的淺部真菌病，致病菌黏附于犬的皮膚上，侵入皮膚毛發(fā)或趾甲，寄生或腐生于表皮、毛發(fā)和甲板的角質(zhì)蛋白組織中并大量繁殖，從而引起皮膚的一系列器質(zhì)性病變。臨床表現(xiàn)為皮膚上出現(xiàn)界限明顯的脫毛圓斑，皮膚瘙癢，潛在性皮膚損傷，具有滲出液、鱗屑或結(jié)痂等，若繼發(fā)細菌感染則可形成膿癬。此病的特點是病程長、治愈難、易復發(fā)，并可在動物之間、人與人之間、人與動物之間互相傳播。本研究試圖通過對犬小孢子菌皮膚真菌病的流行病學調(diào)查，掌握北京地區(qū)犬小孢子菌皮膚真菌病發(fā)病與流行狀況，為更好的防控該病奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查對象 選取2016年1月～2017年11月在北京農(nóng)職動物醫(yī)院、全心全意連鎖動物醫(yī)院、瑞派關(guān)忠動物醫(yī)院及美聯(lián)眾合伴侶動物醫(yī)院等北京地區(qū)8家動物醫(yī)院2026例犬皮膚病初診病例進行調(diào)查，對犬小孢子菌病的發(fā)病季節(jié)、年齡、性別及發(fā)病部位等病例數(shù)據(jù)進行收集、整理、統(tǒng)計與分析。

1.2 主要儀器與試劑 Οlympus雙目醫(yī)用顯微鏡(Οlympus公司)、電熱干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)、電熱培養(yǎng)箱PYX-DHS-500RS型(上海躍進醫(yī)療器械廠)、醫(yī)用凈化工作臺(蘇州凈化設(shè)備廠)、WDD-1伍德氏燈(武漢聯(lián)華科技有限公司)、10%KΟH、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)、皮膚癬菌鑒別瓊脂培養(yǎng)基(DTM)、乳酸酚棉藍染色液(青島捷世康生物科技公司)。

1.3 方法 （1）犬真菌性皮膚病調(diào)查：①臨床調(diào)查：患犬常表現(xiàn)為瘙癢，不同程度的脫屑、脫毛和結(jié)痂。毛發(fā)變脆、毛干易斷、毛根易脫，毛根萎縮，重者大面積脫毛，皮膚上可見到紅疹脫毛區(qū)覆蓋油性結(jié)痂，刮去痂皮裸露潮紅或潰爛的表皮。②伍德氏燈檢查：具有真菌性皮膚病臨床癥狀的患犬采樣前進行伍德氏燈檢查。伍德氏燈檢查在暗室中進行，將伍德氏燈開啟5min后，待其波長穩(wěn)定，將光源對準待檢查部位，陽性者有熒光反應。③直接鏡檢：采用刮刀法用乙醇棉球擦拭患病部位皮膚邊緣處，自然風干后用消毒后的鈍性刀片與皮膚呈45°輕刮取患病部位皮膚表層，至皮膚呈輕微出血狀。采用刮取法取得皮膚樣品至于載玻片上，滴加1～2滴10%KΟH溶液，蓋上蓋玻片，在火焰上輕微加熱，使角蛋白溶解，然后壓緊蓋玻片，用濾紙吸去多余液體。將載玻片置于光學顯微鏡下，先用低倍鏡檢查是否有菌絲和孢子，再用高倍鏡觀察孢子和菌絲形態(tài)，若觀察到菌絲和孢子，即可診斷為陽性。（2）病原真菌分離鑒定：①病料采集與接種培養(yǎng)：用無菌棉拭子對皮膚真菌病患犬的發(fā)病部位進行病料采集，裝入滅菌瓶內(nèi)并做記錄。在超凈工作臺內(nèi)，以劃線法將病料接種到SDA培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)2～3周；待菌落出現(xiàn)后用接菌環(huán)挑取菌落中部新生菌絲至SDA進行純培養(yǎng)，每天觀察菌落的顏色、生長速度、表面狀態(tài)、背部顏色并記錄。②致病真菌鑒定：對可疑真菌用SDA、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)、DTM及玉米粉瓊脂培養(yǎng)基(CMA)做進一步培養(yǎng)，連續(xù)培養(yǎng)觀察3～4周。從第3～28d將菌落病料以乳酸酚棉藍染色法連續(xù)鏡檢，用釣菌環(huán)挑取菌落邊緣與中部之間菌絲置于載玻片上，滴加1滴乳酸酚棉藍染色液，蓋上蓋玻片，輕壓使標本平鋪，然后將玻片置于光學顯微鏡下，先用低倍鏡檢查是否有菌絲和孢子，再用高倍鏡觀察孢子和菌絲形態(tài)，根據(jù)菌落培養(yǎng)性狀和鏡檢結(jié)果，確定真菌的屬種并記錄結(jié)果。犬小孢子菌的生長速度較快，接種后2d 即形成肉眼可見菌落，培養(yǎng)14d 布滿整個培養(yǎng)基。表面質(zhì)地光滑，呈白色絲狀或毛狀，背面呈黃褐色。鏡檢可見梭形表面粗糙的孢子，多呈線狀排列。

2 結(jié)果

2.1 犬真菌性皮膚病發(fā)病率 在所調(diào)查的2026例犬皮膚病病例中，皮膚真菌病245例，占12.09%。

2.2 犬皮膚真菌病病原調(diào)查 用SDA培養(yǎng)基鑒定犬小孢子菌、須癬毛癬菌、石膏樣小孢子菌、馬拉色菌及其它未鑒定真菌，共分離獲得真菌245株。犬皮膚真菌病真菌病原分離統(tǒng)計見表1。

表1 不同真菌病原與發(fā)病率

結(jié)果表明：犬小孢子菌157株，占64.08%；須癬毛癬菌36株，占14.69%；石膏樣小孢子菌27株，占11.02%；馬拉色菌23株，占9.39%；其它未鑒定2株，占0.81%。

2.3 不同年齡與發(fā)病率 在所調(diào)查的157例犬小孢子菌皮膚病患犬中，按小于或等于1歲齡為幼齡犬、1～7歲齡為成年犬、大于7歲齡為老年犬分3個組。犬小孢子菌性真菌皮膚病幼齡犬組77例，占49.04%；成年犬組27例，占17.20%；老年犬組53例，占33.76%。不同年齡與發(fā)病率見表2。

表2 不同年齡與發(fā)病率

2.4 不同性別與發(fā)病率 在所調(diào)查的157例犬小孢子菌皮膚病患犬中，雄性犬76例，占48.41%；雌性犬81例，占51.59%。不同性別與發(fā)病率見表3。

表3 不同性別與發(fā)病率

2.5 不同季節(jié)與發(fā)病率 在所調(diào)查的157例犬小孢子菌皮膚病患犬中，犬小孢子皮膚菌真菌病在夏秋季發(fā)病率較高，為104例，占66.24%；冬季、春季發(fā)病病例依次為28例和25例，占33.76%；3月、4月的發(fā)病率最低為4.46%。不同季節(jié)與發(fā)病率見表4。

表4 不同季節(jié)與發(fā)病率

2.6 不同部位與發(fā)病率 在所調(diào)查的157例犬小孢子菌皮膚真菌病患犬中，犬小孢子菌皮膚真菌病發(fā)病最高的部位依次是頭部46例占29.30%，四肢39例占24.84%，背部31例占19.75%。其次是腹部14例占8.92%，頸部12例占7.64%。其他部位15例占9.55%。不同部位與發(fā)病率見表5。

表5 不同部位與發(fā)病率

3 討論

（1）犬皮膚病約占臨床病例的10%～30%。犬皮膚真菌病是致病性真菌黏附并侵入機體皮膚、毛發(fā)或指(趾)甲的角蛋白組織，在一定條件下引起器質(zhì)性病變的感染癥，病原真菌多為環(huán)境常在菌，廣泛分布于健康犬的體表，是一種傳染性較強的人寵共患病。犬皮膚真菌病不僅可引起犬局部或全身脫毛、脫屑、紅斑等癥狀，嚴重影響犬的美觀和健康，其病原還可感染人，引起人的頭癬、體癬及甲癬，其中老人和兒童較易感染，有報道高達90%的兒童皮膚真菌病系與患病動物接觸而感染，犬貓一旦感染真菌，其豢養(yǎng)者的感染率可高達50%～70%以上。調(diào)查結(jié)果表明：在所調(diào)查的2026例犬皮膚病病例中，皮膚真菌病245例，占12.09%。其中犬小孢子菌157株，占64.08%；須癬毛癬菌36株，占14.69%；石膏樣小孢子菌27株，占11.02%；馬拉色菌23株，占9.39%；其它未鑒定2株，占0.81%。犬小孢子菌為致病的主要真菌。（2）犬小孢子菌為親動物性真菌，感染主要通過直接或間接接觸患病動物、帶菌動物及污染的環(huán)境，孢子可在環(huán)境中存活幾個月還具有感染性。犬小孢子菌又屬親角質(zhì)性皮膚真菌，具有角蛋白酶，易于侵入并寄生于犬的皮膚角質(zhì)層。犬小孢子菌引起的典型皮膚病變是局限的輕度角化過度或不全，棘皮層輕度增厚和中度水腫。真皮內(nèi)血管輕度擴張，少量淋巴細胞滲出，伴隨毛囊向更深層伸入，有時還有毛囊內(nèi)膿皰等。在北京地區(qū)近2年調(diào)查，犬皮膚真菌病占臨床皮膚病病例的12.09%，犬小孢子菌性皮膚真菌病占犬真菌性皮膚病病例的64.08%。犬小孢子菌病原分離鑒定以高營養(yǎng)的SDA分離培養(yǎng)，10%KΟH法和乳酸酚棉藍染色法進行直接鏡檢鑒別，取材操作較為方便。（3）犬小孢子菌性皮膚病發(fā)病受多種因素影響，皮毛損傷病菌乘虛而入、應激因素消弱皮膚屏障機能、長時間大劑量應用抗生素破壞體表正常菌群等。年齡方面在所調(diào)查的157例犬小孢子菌皮膚真菌病患病犬中，犬小孢子菌性皮膚真菌病幼齡犬組77例占49.04%，成年犬組27例占17.20%，老年犬組53例占33.76%。幼齡犬和老年犬高發(fā)，究其原因是犬皮膚皮脂腺分泌不飽和脂肪酸可抑制犬小孢子菌在犬皮膚及其附屬結(jié)構(gòu)的生長與繁殖，幼齡犬皮膚分泌較少而免疫力較弱，對皮膚真菌病更加易感；成年犬皮膚皮脂腺分泌活躍感染較少，同時已被感染的幼犬會在到達成年期后自愈；老齡犬皮脂腺分泌減少免疫力降低容易感染。性別方面，在所調(diào)查的157例犬小孢子菌性皮膚真菌病患病犬中，犬小孢子菌性真菌皮膚病公犬76例占48.41%，母犬81例占51.59%。母犬的發(fā)病率高于公犬，可能與性激素對皮脂腺分泌的影響或公犬活動區(qū)域較大及喜愛打逗損傷等容易接觸感染病菌有關(guān)。在季節(jié)方面，在所調(diào)查的157例犬小孢子菌性皮膚真菌病患病犬中調(diào)查結(jié)果顯示，

犬小孢子菌性皮膚真菌病在夏秋季發(fā)病率較高，104例占66.24%；冬季、春季發(fā)病病例依次為28例和25例，占33.76%；3、4月和11月的發(fā)病率最低為4.46%。北京地區(qū)每年6月中旬至8月底進入高溫悶熱、陰雨潮濕季節(jié)，犬體、犬舍及環(huán)境潮濕，適宜真菌孳生，真菌致病力提升，成為真菌感染高峰。在發(fā)病部位方面，犬小孢子菌性皮膚真菌病發(fā)病最高的部位依次是頭部46例占29.30%，四肢39例占24.84%，背部31例占19.75%。這與這些好發(fā)部位毛皮角質(zhì)層量較其它部位豐富、與病源真菌接觸機會多等因素有關(guān)。