兩種血液檢測(cè)方式對(duì)核酸試劑有效利用率的分析比較

張照陽

［作者單位］450000河南鄭州，河南中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科（張照陽）

根據(jù)《血站質(zhì)量管理規(guī)范》設(shè)立規(guī)范的血液檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，建立完善的血液制備管理體系，確保血液安全有效并嚴(yán)格執(zhí)行隔離與放行制度［1］。血標(biāo)本在全自動(dòng)核酸檢測(cè)儀器（nucleic acid amplifica－tion testing，NAT）下檢測(cè)乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、獲得性免疫缺陷病毒（HIV），該檢測(cè)儀器的靈敏度、特異性度高，檢測(cè)為假陽性的概率低，保證檢測(cè)結(jié)果的正確性和可信性。另外，我國(guó)于2015年制定了《血站技術(shù)操作規(guī)程》［2］，進(jìn)一步對(duì)核酸檢測(cè)做了規(guī)范性的指導(dǎo)，試驗(yàn)中將嚴(yán)格按照指導(dǎo)規(guī)范操作，保證結(jié)果的正確和可信。提高核酸試劑的效能和利用率是現(xiàn)在研究的一項(xiàng)重點(diǎn)工作，為了探索最佳檢測(cè)方式，故筆者對(duì)核酸試劑采用不同方式進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2016年、2017年市中心血站無償獻(xiàn)血者標(biāo)本分別為8000份、8500份 （快速HBsAg和ALT試紙檢測(cè)血液標(biāo)本合格）。獻(xiàn)血者需根據(jù)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》［3］和《中華人民共和國(guó)獻(xiàn)血法》［4］選取。

1.2 試劑與儀器HIV、HCV、HBV ANT聯(lián)合測(cè)試（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)）；全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)（北京博暉創(chuàng)新光電技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)）；3k30德國(guó)SIGMA低溫高速離心機(jī) （上海基匯生物科技有限公司），儀器都經(jīng)過校準(zhǔn)并在有效期內(nèi)。

1.3 方 法

1.3.1 分組方法 對(duì)照組：2016年度實(shí)驗(yàn)站對(duì)實(shí)行批放行的血液樣本進(jìn)行血型、ANT、ELISA等常規(guī)初檢，若ELISA初檢時(shí)樣本結(jié)果為“反應(yīng)性”則進(jìn)行雙孔復(fù)檢，若復(fù)檢為“反應(yīng)性”無須進(jìn)行核酸試驗(yàn)，所有檢測(cè)結(jié)果為“無反應(yīng)性”的標(biāo)本均需進(jìn)行核酸試驗(yàn)。先對(duì)8個(gè)標(biāo)本采用核酸檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行混檢并于48h內(nèi)檢測(cè)完畢，對(duì)于混檢為陽性的再做拆分測(cè)試，在此過程中記錄報(bào)廢試劑的原因及狀況并進(jìn)行總結(jié)。核酸檢測(cè)操作步驟如下：取5 ml標(biāo)本放入低溫高速離心機(jī)內(nèi)離心，離心條件為1600 g、20 min，標(biāo)本需在4 h內(nèi)離心防止RNA降解，離心后置于4℃冰箱內(nèi)靜置30 min；將離心完畢后樣本、HIV、HCV、HBV ANT聯(lián)合測(cè)試試劑及芯片置于全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)相應(yīng)位置，關(guān)閉儀器門并點(diǎn)擊運(yùn)行，即可得到檢測(cè)結(jié)果。研究組：于2017年按照要求嚴(yán)格實(shí)行隔離與放行的血液管理制度。優(yōu)化操作人員技術(shù)水平、提高室內(nèi)環(huán)境并加強(qiáng)儀器的管理質(zhì)量，試驗(yàn)站對(duì)每天采集的血標(biāo)本定為1個(gè)大的檢測(cè)批，同樣先對(duì)血標(biāo)本行血型、ANT、ELISA（兩次）等常規(guī)初檢，對(duì)血液標(biāo)本檢查為“無反應(yīng)”的結(jié)果進(jìn)行“滿架”核酸混檢，每天的檢測(cè)總量為25個(gè)，將剩余的標(biāo)本在冷凍室保存（4℃），每天按此循環(huán)。根據(jù)對(duì)照組的方式進(jìn)行拆分單檢，對(duì)于不合格及“無反應(yīng)性”的血標(biāo)本禁止核酸檢測(cè)，所有測(cè)試均在72 h內(nèi)完成，血液質(zhì)量合格的做好標(biāo)記核對(duì)再批放行，同樣在操作過程中記錄報(bào)廢試劑的原因及狀況并進(jìn)行總結(jié)。

1.3.2 數(shù)據(jù)整理 每天記錄好實(shí)驗(yàn)室核酸測(cè)試。包括每天標(biāo)本總數(shù)和試劑總數(shù)、混檢標(biāo)本數(shù)和試劑用量、拆分試劑用量和報(bào)廢的試劑量，做好報(bào)廢原因的記錄并進(jìn)行總結(jié)分析。

1.3.3 計(jì)算公式 總有效利用率=實(shí)際測(cè)試量/試劑標(biāo)定測(cè)試量×100%。

1.3.4 觀察指標(biāo) 測(cè)試完結(jié)后，對(duì)比兩種檢測(cè)方式的有效利用率和廢用率。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)，核酸的總有效利用率與總報(bào)廢率計(jì)數(shù)資料以%表示，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方式下核酸有效利用率的比較檢測(cè)后，研究組的總有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=15.312，P＜0.01）。 見表 1。

2.2 兩種檢測(cè)方法的試劑報(bào)廢率比較檢測(cè)后，研究組的廢棄率低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.312，P＜0.01）。 見表 2。

表 1 兩種檢測(cè)方式下核酸有效利用率的比較

表 2 兩種檢測(cè)方法的試劑報(bào)廢原因比較

3 討論

做好血液的篩查工作，保證血液質(zhì)量的安全，是臨床患者用血的根本。全自動(dòng)化核酸檢測(cè)可以減少工作量、減少樣本的污染、高效提取樣本的核酸、實(shí)施過程監(jiān)護(hù)等。但其成本比較高，為了減少浪費(fèi)，所以本次實(shí)驗(yàn)采用兩種不同的管理方式對(duì)其利用率進(jìn)行比較且須在48 h完成檢測(cè)。據(jù)結(jié)果顯示，優(yōu)化檢測(cè)模式可提高試劑有效利用率［5］。

此次研究采用了兩個(gè)年度血標(biāo)本進(jìn)行試驗(yàn)，分別采用血液批模式和血液隔離放行模式完成檢測(cè)，并在研究組血液隔離放行模式中完善了操作人員技術(shù)水平并加強(qiáng)了環(huán)境管理制度。根據(jù)兩次檢測(cè)結(jié)果可知研究組中核酸試劑的利用率優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），研究組中的報(bào)廢率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。說明研究組的檢測(cè)方式更具有優(yōu)勢(shì)，可有效提高試劑利用率，減少資源浪費(fèi)，可能是研究組中完善了檢測(cè)流程，提高了管理方式。李天君等［6］學(xué)者指出導(dǎo)致試劑浪費(fèi)的原因多是因?yàn)闄z測(cè)流程安排的不夠完善。

綜上所述，強(qiáng)化操作流程、提高工作人員的專業(yè)水平、完善環(huán)境的管理、做好儀器的保管工作，采用研究組方法進(jìn)行檢測(cè)，可進(jìn)一步的提高核酸檢測(cè)的利用率，減少資源的浪費(fèi)。隨著科技不斷進(jìn)步，全自動(dòng)ANT檢測(cè)儀器也會(huì)升級(jí)換代，檢測(cè)技術(shù)也將會(huì)不斷完善，以后還需做更多血液檢測(cè)模式的研究以適用臨床需求。