STAT3、p-STAT3和E-cadherin在鼻咽癌中的表達及臨床意義

王海茹 譚湘敏 郝 玲 王海濤 (海口市人民醫(yī)院耳鼻喉科，海南 ?？?57008)

鼻咽癌(NPC)是我國華南地區(qū)高發(fā)惡性腫瘤之一，由北向南發(fā)病率逐漸增高(1.9/10萬)，我國發(fā)病率明顯高于世界平均水平(1.2/10萬)，位居全球鼻咽癌發(fā)病的第 18位〔1〕。發(fā)病年齡在45～60歲達到高峰〔2〕，嚴重威脅著人類的健康。鼻咽癌死亡的主要原因是復發(fā)和轉(zhuǎn)移，尤其是轉(zhuǎn)移和侵襲機制一直是研究的熱點，研究發(fā)現(xiàn)信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)3在多種惡性腫瘤中高表達，而E-cadherin表達降低與腫瘤的分化、侵襲轉(zhuǎn)移和復發(fā)相關(guān)。本研究檢測鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎組織中STAT3及其活化形式p-STAT3和E-cadherin的表達情況，探討其與鼻咽癌臨床特征之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2016年12月在海口市人民醫(yī)院治療的鼻咽癌初治病例40例。治療前均通過鼻咽組織活檢病理證實為鼻咽癌。其中男31例，女9例，年齡31～71(中位50)歲。所有患者根據(jù)第7版美國癌癥聯(lián)合委員會/國際抗癌聯(lián)盟(AJCC/UICC)的鼻咽癌TNM分期標準評定臨床分期。另取20例慢性鼻咽炎病例作為病理對照。

1.2 試劑和方法 STAT3鼠抗人單克隆抗體、p-STAT3(Tyr705)鼠抗人單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，鼠抗人上皮性鈣黏蛋白單克隆抗體、免疫組織化學試劑及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學染色采取增強聚合物法。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 染色結(jié)果判定參照Mattern方法進行判定。染色強度以細胞呈特異性染色計分，另以陽性細胞占比計分，隨機觀察5個高倍鏡視野，每個視野均進行染色強度評分和陽性細胞占比分析，取其平均值。綜合染色強度和陽性細胞占比，若兩者乘積0，則為陰性，計為(－);若兩者乘積為1～4分，則為弱陽性，計為(+);若兩者乘積為5～8分，則為中度陽性，計為(-);若兩則乘積為9～12分，則為強陽性，計為(+)。病理結(jié)果的判定由兩位高年資病理科醫(yī)師雙盲判定，若兩人意見不同則經(jīng)討論后決定。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 STAT3、p-STAT3、E-cadherin在鼻咽癌和慢性鼻咽炎組織中的表達 STAT3染色主要為胞質(zhì)和細胞核，p-STAT3染色主要為胞質(zhì)，E-cadherin染色位于胞膜。40例鼻咽癌患者組織中，STAT3、p-STAT3和E-cadherin陽性表達率分別為80%(32/40)，65%(26/40)和 12.5%(5/40);20例慢性鼻咽炎組織中，STAT3、p-STAT3和E-cadherin陽性表達率分別為25%(5/20)，0%(0/20)和100%(20/20)。鼻咽癌和慢性鼻咽炎組織中，STAT3、p-STAT3和E-cadherin蛋白表達均有差異(χ2=17.062，P=0.000;χ2=7.279，P=0.007;χ2=42.000，P=0.000，均 P＜0.05)，見圖 1。

圖1 鼻咽癌和慢性鼻咽炎組織中STAT3、p-STAT3、E-cadherin 的表達(DAB，×200)

2.2 STAT3與p-STAT3陽性表達與鼻咽癌臨床特征的關(guān)系 STAT3陽性表達與年齡、性別、T分期、N分期、臨床分期、病理類型無明顯相關(guān)(均P＞0.05);p-STAT3表達與患者年齡、N分期和臨床分期有關(guān)，在高齡、N分期和臨床分期較晚的病例中，p-STAT3表達較高(均P＜0.05)，與性別、T分期無明顯相關(guān)(均P＞0.05)，見表 1。

2.3 各抗體在鼻咽癌組織中表達的相關(guān)性 STAT3的陽性表達與E-cadherin的陽性表達呈明顯負相關(guān)(r=－0.378，P=0.016)，而 p-STAT3陽性表達與 E-cadherin陽性表達無明顯相關(guān)(r=－0.040，P=0.808)。

表1 STAT3、p-STAT3陽性表達與鼻咽癌臨床特征的關(guān)系〔n(%)，n=40〕

3 討論

STAT3是STATs的重要成員之一，與細胞的異常增殖密切有關(guān)，并參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移〔3〕，其介導的信號傳導通路與細胞增殖、分化及凋亡密切相關(guān)，該通路持續(xù)激活可導致細胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化〔4〕。有研究證實STAT3在鼻咽癌中高表達〔5～7〕，p-STAT3 是 STAT3 的磷酸化，是信號傳導通路持續(xù)激活的形式，主要參與細胞增殖、腫瘤發(fā)生、發(fā)展的調(diào)控〔8〕。而STAT3酪氨酸705位點的磷酸化(p-STAT3)是STAT3磷酸化的主要形式。

E-cadherin普遍存在于各類上皮細胞，主要介導同種細胞間的黏附反應，并起到細胞骨架的作用，是維護細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)完整性的重要分子。E-cadherin表達的下降或喪失與腫瘤低分化、高侵襲、高轉(zhuǎn)移和腫瘤復發(fā)呈正相關(guān)，是預示腫瘤進展及預后的重要指標之一，是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的抑制因子〔9〕?，F(xiàn)有研究表明鼻咽癌的轉(zhuǎn)移與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)存在密切關(guān)系〔10〕。本研究提示STAT3、p-STAT3激活與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。對鼻咽癌的臨床特征研究表明，p-STAT3的陽性表達與鼻咽癌的年齡、N分期和臨床分期有關(guān)。高齡、N分期和臨床分期較晚的NPC患者中p-STAT3表達增高。因為p-STAT3是STAT3的激活形式，p-STAT3蛋白的異常表達，可影響下游基因轉(zhuǎn)錄，從而影響細胞增殖侵襲，進而表現(xiàn)為p-STAT3表達同患者臨床病理特征相關(guān)。提示p-STAT3有可能成為鼻咽癌預后的指標之一，這有待于擴大樣本量進一步研究。文獻〔11〕報道E-cadherin在鼻咽癌組織中低表達，本研究結(jié)果亦顯示，E-cadherin在鼻咽癌中的表達較慢性鼻咽炎組低，STAT3的表達與E-cadherin的表達呈明顯負相關(guān)，而p-STAT3與E-cadherin無明顯相關(guān)性。由于STAT3許多位點存在磷酸化(Tyr-705，Ser-727)〔12〕。不排除STAT3 與 E-cadherin 在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中或許存在其他信號傳導通路。