參股芪口服液提取工藝研究

李小進(jìn)

（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原030006）

參股芪口服液（暫命名）是由人參、西洋參、絞股藍(lán)、黃芪、甘草提取物、調(diào)味劑低聚果糖和穩(wěn)定劑海藻酸鈉制成的具有提高人體免疫力的中藥復(fù)方保健食品。人參作為藥食兩用的強(qiáng)壯滋補(bǔ)藥，具有補(bǔ)氣固脫、生津安神益智等功效；西洋參補(bǔ)而不燥；絞股藍(lán)與人參功效相似；黃芪具有補(bǔ)中益氣的功效。四味合用，補(bǔ)中益氣功效加強(qiáng)。甘草既可以滋補(bǔ)脾胃，又可以調(diào)和諸藥。

現(xiàn)代藥理研究證實(shí)，人參能提高機(jī)體免疫功能，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能，延長細(xì)胞壽命，消除自由基，延緩大腦衰老，改善大腦功能［1］；黃芪對(duì)免疫功能有雙向調(diào)節(jié)作用［2］；西洋參總皂苷可活化巨噬細(xì)胞，從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能［3］；絞股藍(lán)中含有136種絞股藍(lán)皂苷，已確定其中6種絞股藍(lán)皂苷結(jié)構(gòu)與人參皂苷結(jié)構(gòu)完全相同［4］；甘草免疫調(diào)節(jié)作用體現(xiàn)在其具有激活小鼠淋巴細(xì)胞增殖的作用，選擇性增強(qiáng)輔助性T淋巴細(xì)胞的增殖力與活性，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子的生成與分泌［5］。本研究比較高速離心方法和水醇法處理傳統(tǒng)方法提取的總皂苷含量，探索研制參股芪口服液的最佳提取工藝。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent 1200 series）；ELSD檢測器（Agilent 3300）；高速離心機(jī)（型號(hào)LYNX 6000），Thermo公司。

1.2 試劑與材料

人參、西洋參、絞股藍(lán)、黃芪、甘草飲片均購自山西省中醫(yī)院藥房，低聚果糖、海藻酸鈉均購自山西國藥集團(tuán)；所用試劑乙腈為色譜純，磷酸、乙醇均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 配方與產(chǎn)品

按照5 d配方量設(shè)計(jì)配方：人參80 g，西洋參100 g，絞股藍(lán) 250 g，黃芪 200 g，甘草 60 g，低聚果糖70 g，海藻酸鈉2 g。經(jīng)水煮等工藝，制成1 000 mL成品，按10 mL/支規(guī)格灌裝。

2.2 供試品溶液的制備

取口服液5只，合并口服液，濾過，取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過即得。

2.3 含量測定

參照藥典方法［6］以人參皂苷為含量指標(biāo)測定提取液總皂苷含量。

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 采用高效液相色譜儀（Angilent 1200 series），十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈（A）和0.1%磷酸溶液（B）以不同比例混合為流動(dòng)相，采用紫外檢測器進(jìn)行檢測，檢測波長為203 nm，柱溫20℃，流速1 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，理論塔板數(shù)按人參皂苷Re計(jì)算不低于1 500。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精密稱取人參皂昔Re對(duì)照品0.501 mg，加流動(dòng)相（乙腈-0.1%磷酸溶液，20∶80）配制成濃度為 0.501 mg/mL 的對(duì)照品溶液，精密吸取 1 mL，2 mL，4 mL，6 mL，8 mL，10 mL 置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20 μL，測定峰面積，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X，μg）進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=170.34 X+1.18，r=0.999 8，人參皂苷 Re 在 l～10.000 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察

2.3.3 精密度考察 精密吸取人參皂苷對(duì)照品溶液（0.501 mg／mL）5 mL置于10 mL量瓶中加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，重復(fù)5次進(jìn)樣20 μL，測定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果RSD為1.15%（n＝5），表明儀器精密度良好。結(jié)果見表2。

表2 精密度考察

2.3.4 重復(fù)性考察 精密吸取同一批口服液樣品溶液20 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算結(jié)果，平均值0.45%，RSD=1.93%，表明重復(fù)性良好。結(jié)果見表3。

表3 重復(fù)性考察結(jié)果

2.3.5 回收率實(shí)驗(yàn) 取同一批口服液樣品5只，分別加入1.00 mL混和標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，水浴鍋加熱至10 mL以下，置10 mL量瓶中補(bǔ)足體積，進(jìn)樣20 μL，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表4。

表4 加樣回收率

2.4 提取方法

按照傳統(tǒng)提取煎煮的方法，按配方稱量飲片，提取2次，第1次煎煮前浸泡4 h，分別加入12倍和10倍量的去離子水，每次煎煮均用1 h時(shí)間，合并提取液，濃縮至700 mL左右，即可。

2.4.1 高速離心工藝流程 上述提取濃縮液分別加入低聚果糖和海藻酸鈉并充分?jǐn)嚢?，冷藏、靜置24 h，調(diào)節(jié)pH值，高速離心，加入去離子水至1 000 mL，分裝、灌封、滅菌，即得。

2.4.2 水醇法工藝流程 上述提取濃縮液繼續(xù)濃縮至400 mL，放冷，加入乙醇1 100 mL充分?jǐn)嚢?，放?4 h過濾，回收乙醇并濃縮至700 mL左右，加入去離子水至1 000 mL，分裝、灌封、滅菌，即得。

2.5 樣品含量測定

2種工藝生產(chǎn)的樣品各3批（樣品I為高速離心工藝生產(chǎn)：20160701、20160702、20170703；樣品II 為 水 醇 法 工 藝 生 產(chǎn) ：20160704、20160705、20160706），分別取溶液 20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算含量。含量測定結(jié)果表明，高速離心方法處理提取液保留了更多的總皂苷。結(jié)果見表5。

表5 供試品含量測定

2.6 樣品比較

2.6.1 外觀觀察 色澤：樣品I為深黃棕色，樣品Ⅱ?yàn)闇\黃棕色。澄清度：樣品I、Ⅱ澄清，均無沉淀。有效成分含量：樣品I中所含總皂苷量明顯高于樣品Ⅱ。

2.6.2 留樣觀察 分別取上述各批號(hào)的藥液放置12個(gè)月，觀察其變化。色澤：基本無變化，樣品I為深黃棕色，樣品Ⅱ?yàn)闇\黃棕色。澄明度：樣品I、Ⅱ澄清，均無沉淀。有效成分含量：樣品I中所含總皂苷量明顯高于樣品Ⅱ。原料成本及生產(chǎn)周期：高速離心法比水醇法節(jié)省了大量乙醇、蒸餾水等，降低了原料成本，縮短了生產(chǎn)周期。

3 討論

本產(chǎn)品中有效成分主要為以人參皂苷Re為代表的總皂苷及多糖，以總皂苷含量為指標(biāo)作為衡量產(chǎn)品的定量指標(biāo)。結(jié)果表明，水醇法制備參股芪口服液工藝成本較高，有效成分損失較大。高速離心法是一種物理的分離法，它除去的是水不溶的固體雜質(zhì)，有效地保留了絕大部可溶性有效成分，從而節(jié)省了大量物料和能源，降低了產(chǎn)品的成本。因此高速離心法簡便可行，適宜工業(yè)化生產(chǎn)，值得進(jìn)一步推廣。