轉(zhuǎn)基因玉米的檢測(cè)手段分析

趙彥濤

摘 要：近年來轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)快速發(fā)展，對(duì)農(nóng)作物產(chǎn)量及品質(zhì)的提高等方面起到非常重要的作用。但是轉(zhuǎn)基因食品的安全性目前還處于模擬兩可的狀態(tài)，尚未有確切的定論，因此有必要加大對(duì)轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)手段方面的分析研究。文中總結(jié)了目前國內(nèi)外在轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)方面應(yīng)用較多的幾種檢測(cè)手段，并對(duì)其未來發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行了展望。

關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因玉米；檢測(cè)手段；展望

中圖分類號(hào)：S513 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20181033022

轉(zhuǎn)基因玉米是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的轉(zhuǎn)基因作物之一。目前我國轉(zhuǎn)基因玉米種植的面積在轉(zhuǎn)基因作物種植的總面積中占比達(dá)到20%以上，雖然目前對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米是否有害尚無確切的證據(jù)，但是在定論之前做好轉(zhuǎn)基因玉米的檢測(cè)工作是非常有必要的。目前國內(nèi)外在轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)方面應(yīng)用的技術(shù)手段較多，轉(zhuǎn)基因玉米產(chǎn)品的種類不同、或者檢測(cè)的目的不同，采取的檢測(cè)技術(shù)也不同，現(xiàn)簡(jiǎn)單總結(jié)幾種常用的檢測(cè)手段。

1 基于蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法

轉(zhuǎn)基因作物中外源蛋白的檢測(cè)可以利用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）、Western雜交等方法，具體是將需要檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因作物中的目的蛋白的基質(zhì)通過一定的步驟抽提出來，再利用抗體、目的蛋白之間可以產(chǎn)生特異性結(jié)合的特點(diǎn)，進(jìn)而通過產(chǎn)生的信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)。

1.1 酶聯(lián)免疫吸附法

此種方法具有以下特點(diǎn)：抗原抗體的免疫反應(yīng)在固體的表面發(fā)生；蛋白質(zhì)檢測(cè)的標(biāo)記物為某種特定的酶。轉(zhuǎn)基因作物表達(dá)的外源蛋白的抗體可以結(jié)合待檢測(cè)樣品的外源蛋白，再通過酶標(biāo)反應(yīng)、酶促反應(yīng)等表現(xiàn)出顏色反應(yīng)，進(jìn)而做出判斷。此種檢測(cè)方法可以定量，優(yōu)點(diǎn)是需要較少的樣品即可，操作標(biāo)準(zhǔn)，可對(duì)大批樣品進(jìn)行檢測(cè)，缺點(diǎn)是其他因素容易影響檢測(cè)的結(jié)果，造成假陽性。

1.2 Western雜交法

此種雜交方法是將抗體與抗原在硝酸纖維素膜上實(shí)現(xiàn)特異性結(jié)合，從而對(duì)外源基因進(jìn)行檢測(cè)的目的。將蛋白質(zhì)提取分離出來，轉(zhuǎn)移到固相膜上與抗體結(jié)合，再通過標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)。此種檢測(cè)方法的靈敏性很高，但是涉及到的操作復(fù)雜，步驟較多，有較高的技術(shù)要求，日常檢測(cè)中不太適合采用此方法。

2 基于核酸的檢測(cè)方法

2.1 定性PCR檢測(cè)技術(shù)

此種技術(shù)的原理與DNA復(fù)制過程的原理類似，在聚合酶的作用下，體外快速擴(kuò)增目的片段，在很短的時(shí)間內(nèi)將微量的目的DNA片段擴(kuò)增到原來的百萬倍以上，再根據(jù)電泳、染色結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)。此種方法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、速度快。

2.2 復(fù)合定性PCR檢測(cè)方法

此種檢測(cè)方法是在相同的反應(yīng)管中對(duì)2對(duì)或者超過2對(duì)的引物進(jìn)行擴(kuò)增，達(dá)到同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目的片段的作用，檢測(cè)的效率高，費(fèi)用低，靈敏度高。

2.3 巢式PCR

巢式PCR有內(nèi)引物、外引物2對(duì)引物，外引物在目的模板DNA的外側(cè)，外引物在此模板外引物的內(nèi)側(cè)，簡(jiǎn)單來說就是外引物經(jīng)過擴(kuò)增后獲得產(chǎn)物，而此產(chǎn)物又與內(nèi)引物互補(bǔ)，可以作為內(nèi)引物的模板，經(jīng)過擴(kuò)增2次，檢測(cè)的靈敏度大大提高，對(duì)微量DNA樣品的檢測(cè)也更加的準(zhǔn)確。

2.4 基因芯片檢測(cè)法

基因芯片，也稱DNA芯片，就是對(duì)待檢測(cè)樣品中的DNA等進(jìn)行標(biāo)記，與探針進(jìn)行雜交，利用探針上雜交信號(hào)做出分析，以反映出待測(cè)材料中大量基因的表達(dá)圖譜。

2.5 競(jìng)爭(zhēng)性定量PCR

此種檢測(cè)方法的原理根據(jù)轉(zhuǎn)基因樣品的DNA構(gòu)建出與其有競(jìng)爭(zhēng)作用的DNA，競(jìng)爭(zhēng)DNA與樣品DNA需要的底物、引物都相同，形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，再經(jīng)過電泳，根據(jù)做出的曲線圖進(jìn)行定量檢測(cè)。

2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法

此種檢測(cè)方法就是將熒光基團(tuán)加入到PCR反應(yīng)體系中，通過積累的熒光信號(hào)對(duì)PCR整個(gè)過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，然后結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量檢測(cè)。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法中，應(yīng)用最為廣泛的當(dāng)推TaqMan熒光定量PCR，其探針簡(jiǎn)單，特異性高。

3 其他的檢測(cè)方法

3.1 PCR-ELISA檢測(cè)法

這種方法是利用免疫學(xué)的方法對(duì)PCR的產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，可將PCR技術(shù)的高效以及ELISA技術(shù)的高特異性充分地發(fā)揮出來；免疫PCR。

3.2 免疫PCR

就是DNA標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)，檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米的原理就是用PCR檢測(cè)免疫學(xué)反應(yīng)，先對(duì)抗原抗體復(fù)合物用一段DNA片段（序列已知）進(jìn)行標(biāo)記，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，之后對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)（采取常規(guī)的檢測(cè)方法即可）。

目前，包括轉(zhuǎn)基因玉米在內(nèi)的所有轉(zhuǎn)基因作物以及其產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)的推出都需要慎之又慎，這些檢測(cè)技術(shù)推出的最終目的，就是希望能夠提高轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)的靈敏度、準(zhǔn)確度。以后檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的趨勢(shì)主要是品系的特異性檢測(cè)、復(fù)合型的PCR檢測(cè)等，以上幾種常規(guī)方法分別各具優(yōu)缺點(diǎn)，如果能將以上幾種常規(guī)檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合使用，不僅可以滿足基本的轉(zhuǎn)基因作物的檢測(cè)需求，還可以大大提高檢測(cè)技術(shù)的水平，為轉(zhuǎn)基因作物的發(fā)展起到很好的推動(dòng)指導(dǎo)效果。

參考文獻(xiàn)

[1]于君楓，方波.玉米及其制成品轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)研究[J].科教導(dǎo)刊，2011（15）：97.