高效液相色譜-ELSD法檢測(cè)泡菜中三氯蔗糖的含量

王麗蘭

(國家泡菜質(zhì)量檢驗(yàn)中心(四川)，四川 眉山 620010)

三氯蔗糖是一種甜度可達(dá)蔗糖600倍的新型甜味劑，具有甜度高、甜味純正、無熱值、耐高溫和安全性高等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于食品加工中[1-3]。但美國一項(xiàng)新的研究表明三氯蔗糖會(huì)消滅腸道內(nèi)的有益菌，可能導(dǎo)致胰島素和血糖水平發(fā)生變化，所以，過量食用三氯蔗糖可能對(duì)身體產(chǎn)生危害[4]。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2014中也明確規(guī)定了三氯蔗糖的食用范圍和限量[5]。因此，在食品質(zhì)量監(jiān)管中，監(jiān)測(cè)三氯蔗糖的含量是十分重要的。

泡菜產(chǎn)品常用的甜味劑主要是安賽蜜和糖精鈉等，隨著三氯蔗糖的廣泛使用，近2年，有些泡菜企業(yè)用三氯蔗糖替代了安賽蜜等甜味劑?，F(xiàn)行三氯蔗糖檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB 22255-2014中樣品前處理過程較為復(fù)雜[6]。為滿足泡菜企業(yè)三氯蔗糖的批量檢測(cè)需求，本實(shí)驗(yàn)結(jié)合泡菜產(chǎn)品特點(diǎn)和三氯蔗糖性質(zhì)，采用乙醇超聲提取，直接濃縮處理樣品，省去固相萃取步驟，大大簡(jiǎn)化了樣品前處理過程，降低了檢驗(yàn)成本，縮短了檢驗(yàn)時(shí)間，建立了一種簡(jiǎn)易、快速、低成本的三氯蔗糖檢測(cè)方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent 1260 高效液相色譜儀：配置蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，美國安捷倫公司；電子分析天平；漩渦混合器；超聲波清洗儀；恒溫水浴鍋。

1.2 試劑

乙腈：色譜純；無水乙醇：分析純；三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品(98%)。

三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品0.0100 g，用高純水溶解并定容至10 mL, 配制成濃度為1.0 mg/mL 的三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液，再分別移取一定體積的該標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水稀釋成0,0.05,0.1,0.2,0.4,0.6 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液系列。

2 分析方法

2.1 色譜條件

C18色譜柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，梯度洗脫(見表1)，流速1.0 mL/min, 進(jìn)樣量20 μL，柱溫35 ℃，霧化壓力3.5 Bar，增益8，蒸發(fā)溫度40 ℃。在該色譜條件下得到三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖，見圖1。

表1 梯度洗脫條件

圖1 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

2.2 樣品前處理

稱取粉碎后的泡菜樣品5.0 g于50 mL離心管中，加入30 mL無水乙醇，漩渦提取2 min后超聲提取20 min，搖勻，以3000 r/min離心10 min。濾紙過濾提取溶液，取濾液15 mL于25 mL燒杯中，置于60 ℃水浴鍋中揮發(fā)至干，殘?jiān)?.0 mL水復(fù)溶，混勻后過0.45 μm濾膜，濾液上機(jī)分析。

3 結(jié)果與討論

3.1 濃縮方法的選擇

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB 22255-2014中采用固相萃取法進(jìn)行樣品提取液的凈化和濃縮。本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了固相萃取法凈化濃縮和直接濃縮的實(shí)驗(yàn)效果。結(jié)果表明，固相萃取法對(duì)泡菜產(chǎn)品的凈化效果并不明顯，兩法差異不大，故選擇直接揮發(fā)濃縮提取液，既簡(jiǎn)易又節(jié)約成本。

3.2 提取液的選擇

三氯蔗糖極易溶于水、乙醇和甲醇，實(shí)驗(yàn)中分別采用水、70%乙醇、乙醇、甲醇作為提取液提取樣品，結(jié)果表明提取效果未見明顯差異。但水溶液不易揮發(fā)，會(huì)增加后面的濃縮處理時(shí)間和難度，而甲醇成本相對(duì)較高且有毒性，所以采用低毒性、沸點(diǎn)低、易于揮發(fā)濃縮的乙醇作為提取試劑。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

根據(jù)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的原理，制作峰面積和三氯蔗糖進(jìn)樣量的冪函數(shù)工作曲線，見圖2。

圖2 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖2可知，相關(guān)系數(shù)為0.9998，測(cè)量范圍為0.05～0.6 mg/mL。

3.4 加標(biāo)回收率和精密度

在樣品中按低、中、高3個(gè)水平添加三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，平行測(cè)定6次，計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 加標(biāo)回收率和精密度(n=6)

由表2可知，平均加標(biāo)回收率范圍為88.3%～92.1%，3個(gè)添加水平的RSD都小于5%，均能滿足定量分析要求?？瞻讟悠泛图訕?biāo)樣品的液相色譜圖見圖3。

圖3 空白樣品和加標(biāo)樣品的液相色譜圖

注：a為泡菜樣品的色譜圖；b為泡菜加標(biāo)樣品的色譜圖。

4 結(jié)語

本實(shí)驗(yàn)研究了一種簡(jiǎn)易、高效和低成本的三氯蔗糖樣品前處理方法。泡菜樣品經(jīng)乙醇超聲提取，直接揮發(fā)濃縮，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該法檢測(cè)結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確度和良好的穩(wěn)定性，可為泡菜中三氯蔗糖的檢測(cè)提供參考。