補氣養(yǎng)陰顆粒對特發(fā)性血小板減少性紫癜模型小鼠淋巴細胞亞群的影響

李 琳 丁云錄 張蓮珠 張明天 初洪波 牛春風(fēng)

(長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長春 130021)

特發(fā)性血小板減少性紫癜是血液系統(tǒng)常見病，發(fā)病率逐年增高，西醫(yī)主要以糖皮質(zhì)激素與免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)合治療，存在療效差，病情反復(fù)，副作用大的缺點，中成藥在治療該疾病時優(yōu)勢明顯，標本同治〔1～4〕。補氣養(yǎng)陰顆粒是以氣陰兩虛理論為指導(dǎo)，以人參為基源研發(fā)的用于特發(fā)性血小板減少性紫癜治療的中藥復(fù)方制劑，臨床應(yīng)用療效極佳。本研究主要觀察補氣養(yǎng)陰顆粒對特發(fā)性血小板減少性紫癜模型小鼠淋巴細胞亞群的影響。

1 材料與方法

1.1實驗材料 BALB/c小鼠，18～22 g，雌雄各半。動物合格證號：SCXK-(吉)2011-0004，購于長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司。藥品及試劑：補氣養(yǎng)陰顆粒，性狀：棕褐色顆粒，批號：20141201，由長春中醫(yī)藥大學(xué)植物化學(xué)研究中心提供。豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)，北京西苑醫(yī)院血液病研究室提供。歸脾丸，規(guī)格：200丸/瓶，每8丸相當(dāng)于原生藥3 g，批號：160209，仲景宛西制藥股份有限公司產(chǎn)品。滅菌注射用水，規(guī)格：2 ml/支，批號：1605418，國藥集團容生制藥有限公司。紅細胞裂解液、同型對照抗體、分化簇(CD)3-多甲藻黃素葉綠素蛋白(PercP)、CD4-異硫氰酸熒光素(FITC)、CD8-藻紅蛋白(PE)、CD61-PE(美國BD)。儀器及器材：一次性使用人體靜脈血樣采集容器，規(guī)格2 ml/支，批號：20161008，河北祥遠醫(yī)療器械股份有限公司。流式細胞儀，型號:FACS ARIA Ⅱ，美國BD公司。倒置熒光顯微鏡，型號:IX71，日本OLYMPUS，超純水器，型號:Mili Q，美國Millipore。離心機，型號:LD5-2B，北京雷勃爾離心機有限公司。電子天平，型號:BSA224S，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司。恒溫磁力攪拌器，型號:JB-3A，雷茲互感器(上海)有限公司。

1.2動物造模與分組〔5～9〕特發(fā)性血小板減少性紫癜模型小鼠：將BALB/c小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，按體重隨機分為對照組，模型組，陽性組(歸脾丸3.5 g/kg)，補氣養(yǎng)陰顆粒12 g/kg、6 g/kg、3 g/kg 3個劑量組。于第1，3，5，7，9，11天分別腹腔注射1∶6 GP-APS，每只0.1 ml(對照組注射0.1 ml蒸餾水)。給藥，從第1次注射后開始灌胃至造模后第14天。每2天稱重1次，以調(diào)整給藥量。

1.3淋巴細胞亞群檢測 取小鼠乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝全血100 μl至流式管中，空白對照管不加熒光抗體，同型對照管加入同型對照熒光抗體，樣品管加入熒光標記的抗體CD3-PercP、CD4-FITC、CD8-PE，混勻，室溫避光孵育 20 min；取出試管，每管加入2 ml 1倍紅細胞裂解液，立即輕輕渦旋混勻，室溫避光孵育15 min，1 200 r/min離心5 min，棄去上清液；每管加磷酸鹽緩沖液(PBS)2 ml洗滌，渦旋混勻，1 200 r/min離心5 min，棄去上清液，每管加0.5 ml PBS，混勻，1 h內(nèi)上機檢測。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1各組淋巴細胞亞群統(tǒng)計結(jié)果 與模型組比較，補氣養(yǎng)陰顆粒6 g/kg和3 g/kg組CD8+T細胞數(shù)量明顯減少(P<0.01)，而CD4+/CD8+比值顯著提高(P<0.01)。見表1，圖1。

2.2不同性別小鼠淋巴細胞亞群統(tǒng)計結(jié)果 與對照組比較，雌性小鼠模型組CD3+、CD4+、CD8+T細胞數(shù)量顯著降低(P<0.01，P<0.05)，補氣養(yǎng)陰顆粒12 g/kg和6 g/kg有增加雌性小鼠體內(nèi)CD4+T細胞的趨勢，但差異無顯著性。雄性小鼠模型組CD3+、CD8+T 細胞數(shù)量明顯高于對照組(P<0.05)，與模型組比較，雄性小鼠補氣養(yǎng)陰顆粒6 g/kg可明顯降低CD3+、CD4+T 細胞數(shù)量(P<0.01，P<0.05)。與模型組比較，雄性小鼠補氣養(yǎng)陰顆粒6 g/kg及3 g/kg組CD8+T細胞顯著降低，CD4+/CD8+比值顯著升高(P<0.01，P<0.05)。見表2。

表1 各組對淋巴細胞亞群的影響

與模型組比較：1)P<0.01

表2 各組不同性別小鼠淋巴細胞亞群的變化

與模型組比較：1)P<0.05；2)P<0.01

3 討 論

正常機體中各T淋巴細胞亞群相互作用，維持著機體的正常免疫功能。當(dāng)不同淋巴細胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異常時，機體就可導(dǎo)致免疫紊亂并發(fā)生一系列的病理變化〔10,11〕。CD4+T 細胞即輔助T 細胞，具有協(xié)助體液免疫和細胞免疫的功能，也有部分細胞具有免疫抑制和細胞毒作用；CD8+T 細胞即細胞毒性T 細胞，具有細胞毒作用，能夠特異殺傷靶細胞〔12,13〕。本實驗結(jié)果表明，補氣養(yǎng)陰顆粒具有維持機體免疫功能穩(wěn)定的作用，當(dāng)機體T細胞數(shù)量異常減少時，補氣養(yǎng)陰顆粒能夠溫和地增加T細胞數(shù)量，反之，當(dāng)機體中T細胞數(shù)量異常增多時，補氣養(yǎng)陰顆粒又可以減少T細胞數(shù)量，從而使機體處于相對穩(wěn)定的免疫狀態(tài)。