老年抑郁癥患者血漿腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子水平與G196A基因多態(tài)性的相關(guān)性

王麗娜 馬金芳 王秀娟 張美霞 王 娟

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院精神科，河南 新鄉(xiāng) 453002)

抑郁癥為精神障礙性疾病，以顯著而持久的心境低落、思維和行為異常為主要臨床特征〔1〕，近年來老年抑郁癥發(fā)病率逐年上升〔2，3〕。老年抑郁癥病因復(fù)雜，與大腦神經(jīng)遞質(zhì)減少、激素異常、內(nèi)分泌系統(tǒng)變化及大腦神經(jīng)纖維攝氧不足、下丘腦-垂體-腎上腺-軸功能障礙等密切相關(guān)〔4,5〕。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)對(duì)神經(jīng)元的生長(zhǎng)、發(fā)育、存活及突觸可塑性具有重要作用，其與抑郁的發(fā)病機(jī)制可能有重要關(guān)聯(lián)〔6〕。隨著人類基因組計(jì)劃的完成，研究發(fā)現(xiàn)BDNF水平、G196A基因多態(tài)性與抑郁相關(guān)〔6，7〕。但目前國(guó)內(nèi)外尚缺乏關(guān)于老年抑郁癥血漿BDNF水平與G196A基因多態(tài)性的相關(guān)性研究。因此，本研究探討老年抑郁癥患者血漿BDNF水平與G196A基因多態(tài)性的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 選取2016年1月至2017年4月新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院確診的90例老年抑郁癥患者為研究組，入選標(biāo)準(zhǔn)：符合中國(guó)精神疾病分類方案與診斷標(biāo)準(zhǔn)修訂版(CCMD-2-R)抑郁癥及美國(guó)精神障礙診斷手冊(cè)第4版(DSM-W)抑郁障礙的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔8〕、17 項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表評(píng)分>17分〔9〕、年齡>60歲、無神經(jīng)障礙及癡呆。選取同期17 項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表評(píng)分<7分的60例健康體檢者作為對(duì)照組，排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重軀體疾病及精神障礙、意識(shí)障礙、運(yùn)動(dòng)視覺或聽覺異常、嚴(yán)重癡呆。研究組男38例、女52例，年齡61～80歲，平均(67.35±6.57)歲；對(duì)照組男23名，女37名，年齡61～77歲，平均(67.32±7.12)歲。兩組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有研究對(duì)象知情同意。

1.2BDNF水平的檢測(cè) 分別抽取研究對(duì)象早晨空腹靜脈血3 ml，放入采血管中(不加抗凝劑)，于25℃、轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心10 min，分離血漿；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定血漿中BDNF水平，操作步驟按照BDNF試劑盒(上海拜力生物科技有限公司)說明書進(jìn)行。

1.3G196A基因多態(tài)性的檢測(cè) 分別抽取研究對(duì)象早晨空腹靜脈血3 ml，放入采血管中(不加抗凝劑)，于25℃、3 000 r/min離心10 min，分離血清，-80℃凍存?zhèn)溆?。采用聚合酶鏈反?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)法檢測(cè)血清中G196A基因：用Trizol試劑盒(上海生工生物工程有限公司)提取血清中總RNA，計(jì)算提取的RNA的純度后，按照mRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(上海生工生物工程有限公司)說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄全成cDNA；采用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物，上游引物為5′ACTCTGGAGAGCGTGAAT3′，下游引物為5′ ATACTGTCACACACGCTC3′，引物由上海生工生物工程有限公司合成，并經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫同源性比對(duì)；以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系：95℃，(94℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 50 s)共40個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min，96孔板，并設(shè)3個(gè)復(fù)孔，以重水為陰性對(duì)照。取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物(308 bp)，加入5 U Nia限制性內(nèi)切酶(新英格蘭生物實(shí)驗(yàn))，置37℃水浴消化6 h后，用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分離(100 V電壓電泳2 h，硝酸銀染色分型)。擴(kuò)增片段長(zhǎng)度243、59、6 bp的為G/G 型，168、75、59、6 bp的為A/A 型，43、168、75、59、6 bp的為G/A 型。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2和t檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)性分析及多元逐步回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組血漿BDNF水平比較 研究組血漿BDNF水平〔(10.47±3.15)μmol/L〕顯著低于對(duì)照組〔(16.13±2.54)μmol/L〕(P<0.05)。

2.2兩組G196A基因多態(tài)性比較 G196A基因PCR特異性擴(kuò)增產(chǎn)物約為500 bp(圖1)。當(dāng)?shù)任换驗(yàn)锳型時(shí)，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度為500 bp的1條電泳帶；等位基因?yàn)镚型時(shí)，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度為131 和369 bp的2條電泳帶；等位基因?yàn)锳G型時(shí)，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度為131、369和500 bp的3條電泳帶(圖2)。研究組G196A基因型分布頻率、等位基因分布頻率和等位基因攜帶分布頻率與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.3Pearson相關(guān)性分析及多元逐步回歸分析結(jié)果 Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，老年抑郁患者血漿中BDNF水平與G196A等位基因分布頻率呈負(fù)相關(guān)(r=-0.674，P<0.05)。多元逐步回歸分析結(jié)果顯示，血漿BDNF水平與G196A等位基因多態(tài)性密切相關(guān)(P<0.01)。見表2。

表1 兩組G196A基因型分布及等位基因攜帶的比較〔n(%)〕

A+表示AA+GA；A-表示GG；G+表示GG+GA；G-表示AA

表2 血漿BDNF水平與G196A等位基因分布頻率的相關(guān)性

圖1 G196A基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳圖

圖2 G196A酶切電泳

3 討 論

老年抑郁癥發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可伴隨有軀體生理的變化、神經(jīng)細(xì)胞因缺少營(yíng)養(yǎng)發(fā)生皺縮、腦發(fā)生萎縮，引起神經(jīng)系統(tǒng)功能的衰退，去甲腎上腺素、多巴胺、乙酰膽堿等的分泌水平和下丘腦-垂體-腎上腺軸及下丘腦-垂體-甲狀腺軸等的損傷均與老年抑郁密切相關(guān)〔10,11〕。BDNF可通過降低神經(jīng)細(xì)胞對(duì)缺血狀態(tài)的反應(yīng)，延緩缺血后神經(jīng)細(xì)胞的死亡時(shí)間，恢復(fù)缺血后神經(jīng)細(xì)胞的功能，對(duì)缺血后腦神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用〔12,13〕。BDNF可穿過血腦屏障，血漿中BDNF水平可反映腦組織中BDNF含量。G196A基因是由第196位堿基鳥嘌呤(G)突變?yōu)橄汆堰?A)而形成，其影響成熟BDNF的生成，參與多種精神疾病，是學(xué)習(xí)記憶、神經(jīng)元突觸可塑性形成過程中的重要蛋白分子。G196A基因多態(tài)性可影響細(xì)胞內(nèi)的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌，G196A等位基因頻率可反映蛋白細(xì)胞的內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和活性〔14〕。老年抑郁癥患者機(jī)體功能發(fā)生了退行性改變，使體內(nèi)環(huán)境中細(xì)胞因子出現(xiàn)了相應(yīng)改變、神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生了分化凋亡，喪失了對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的再生修復(fù)及保護(hù)的作用〔15〕；G196A基因多態(tài)性的改變，改變了患者細(xì)胞內(nèi)pro-BDNF的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌水平，影響成熟BDNF的生成和活性，進(jìn)而影響患者神經(jīng)細(xì)胞的可塑性和再生能力。BDNF通過與高親和力的酪氨酸激酶受體結(jié)合，刺激和促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)分化、維持神經(jīng)細(xì)胞存活和正常功能、防止神經(jīng)元受損死亡，BDNF基因調(diào)控BDNF的表達(dá)水平〔16〕。BDNF分泌減少可影響患者的記憶功能及海馬體積，增加抑郁癥、精神分裂癥等的易感性，使患者認(rèn)知功能下降〔17〕。因此，血漿BDNF水平的降低、G196A基因多態(tài)性的改變、血漿中BDNF水平與G196A基因多態(tài)性密切相關(guān)，可作為老年抑郁癥的生物學(xué)指標(biāo)。