淫羊藿苷預處理對急性肝損傷大鼠肝功能的保護作用及機制

金華，蔡克瑞，董建將，孫曉冬，閆磊

(1本溪市第六人民醫(yī)院，遼寧本溪117000；2牡丹江醫(yī)學院)

肝損傷是多種肝臟疾病發(fā)生、發(fā)展及最終走向肝功能衰竭的始動環(huán)節(jié)和共同途徑，研究減輕肝損傷的方法具有重要的臨床意義。中藥淫羊藿具有溫陽補腎、強筋健骨、祛風除濕等功效，淫羊藿苷(ICA)是淫羊藿的主要活性成分，現(xiàn)代藥理研究證實，ICA具有抗腫瘤、增強免疫功能、改善心腦血管功能、抗氧化損傷、抗肝臟缺血再灌注損傷和抑制肝纖維化等多重藥理學作用[1]。有關ICA對急性肝損傷作用的研究少見報道。2016年11月～2017年6月，我們通過對急性肝損傷大鼠模型給予ICA預處理，觀察ICA對肝功能的保護作用，并探討其可能的機制，為防治肝損傷提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 動物、試劑與儀器 SPF級大鼠40只，質量300～400 g，雌雄不限。CCl4(廣州化學試劑廠)，ICA(陜西西安飛達生物技術有限公司)，超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)，腫瘤壞死因子α(TNF-α)、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒(上海信帆生物技術公司)，TritonX-100、二甲基亞砜、胰蛋白酶(華舜生物工程有限公司)。Scout-Ⅱ半自動生化分析儀，恒壓穩(wěn)流電泳儀，OLYMPUS熒光顯微鏡。

1.2 動物分組與處理 將大鼠隨機分為對照組、模型組、ICA低劑量組和ICA高劑量組，每組各10只。ICA低劑量組給予腹腔注射ICA 30 mg/kg 2 mL，ICA高劑量組給予腹腔注射ICA 80 mg/kg 2 mL，對照組和模型組給予相同體積生理鹽水注射，均1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥后2 h，模型組、ICA低劑量組和ICA高劑量組給予0.35% CCl410 mL/kg灌胃建立急性肝損傷模型，對照組給予相同體積生理鹽水灌胃。大鼠禁食不禁水，12 h后處死。

1.3 血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)檢測 大鼠處死后取股動脈血，室溫靜置1 h，低溫離心10 min分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆?。采用半自動生化分析儀檢測ALT、AST活性。

1.4 肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px、TNF-α水平檢測 取大鼠肝臟全葉，液氮速凍后，-80 ℃保存。取適量凍存的肝組織，加入液氮研磨，制備10%肝組織勻漿。采用考馬斯亮藍法檢測SOD、MDA、GSH-Px，ELISA法檢測TNF-α，嚴格按試劑盒說明書操作。

2 結果

2.1 各組血清ALT、AST水平比較 見表1。與對照組比較，模型組ALT、AST水平均升高(P均<0.01)；與模型組比較，ICA低劑量組、ICA高劑量組ALT、AST水平均降低(P均<0.01)。

表1 各組血清ALT、AST水平比較(U/L，x±s)

注：與對照組比較，*P<0.01；與模型組比較，△P<0.01。

2.2 各組肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px、TNF-α水平比較 見表2。與對照組比較，模型組SOD、GSH-Px水平降低，MDA、TNF-α水平升高；與模型組比較，ICA低、高劑量組SOD、GSH-Px水平升高，MDA、TNF-α水平降低(P均<0.01)。

表2 各組肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px、TNF-α水平比較

注：與對照組比較，*P<0.01；與模型組比較，△P<0.01。

3 討論

急性肝損傷是在短期內由多種原因引起的肝功能突發(fā)性異常的疾病，其病因較多，機理復雜[2]?，F(xiàn)代醫(yī)學認為，急性肝損傷的發(fā)生與中毒、病毒性肝炎、免疫、血管障礙等相關，其機制可能與質膜的完整性改變、線粒體功能失調、細胞內離子濃度變化、自由基損傷增強和炎性因子表達增強等有關[3～6]。因此，對抗自由基損傷和降低炎癥因子表達或將成為保護急性肝損傷的新途徑。ICA是傳統(tǒng)中藥淫羊藿的有效藥理成分。最新的研究表明，ICA具有抑制肝癌[7]、對抗大鼠肝臟缺血再灌注損傷[8]、增強免疫和抑制肝纖維化[1]等作用，因此ICA在肝臟領域具有廣闊的研究前景。

SOD和GSH-Px是機體內清除自由基的重要抗氧化酶，其活性高低可反映機體抗氧化能力[9，10]。SOD在全身各組織廣泛分布，可以與O2-反應形成H2O2，H2O2經過過氧化物酶和GSH-Px的催化生成水，從而清除自由基，保護細胞免受氧化性傷害。MDA是不飽和脂肪酸過氧化作用的終產物，可嚴重破壞細胞膜結構，導致細胞腫脹、壞死、肝細胞膜通透性增加，造成肝細胞損傷[11～13]；MDA還可以使胞質、膜蛋白及某些酶交聯(lián)蛋白復合物，刺激機體產生抗體，介導免疫損傷[14]。MDA含量可以間接反映細胞受自由基損害和過氧化的程度。ALT、AST是肝細胞內主要酶系，在肝細胞膜受損時，胞內ALT、AST釋放增加，ALT、AST活性檢測是判斷肝細胞膜損傷最直接的指標。本研究結果顯示，ICA預處理可以使急性肝損傷模型大鼠血清ALT、AST活性降低，肝組織中SOD、GSH-Px活性增高，MDA含量降低。提示ICA可以增強急性肝損傷模型大鼠對抗自由基和抗氧化的能力，減少肝細胞損傷，保護肝細胞的結構和功能。

TNF-α是引起肝細胞嚴重壞死的重要介質，TNF-α激活可以介導炎癥級聯(lián)反應，誘導巨噬細胞以及炎癥遞質等的表達，加重肝細胞損傷，在肝損傷中起著核心作用[15]。本研究結果顯示，ICA可以使急性肝損傷模型大鼠肝組織TNF-α含量降低，提示ICA預處理可以降低急性肝損傷模型大鼠肝細胞炎性因子表達，減輕炎癥反應，保護肝細胞功能。

綜上所述，ICA預處理對急性肝損傷大鼠的肝功能具有保護作用，其機制可能與降低ALT、AST活性，增加SOD、GSH-Px活性，降低MDA、TNF-α含量，減少自由基損害和減輕炎癥反應有關。