蝦青素、萬壽菊粉對獅子頭金魚生長、血液指標及免疫力的影響

曲木，張寶龍，于恩浩，黃建，趙國營，翟勝利＊

（1.天津現(xiàn)代晨輝科技集團有限公司，天津市水族動物功能性飼料企業(yè)重點實驗室，天津 301800；2.天津市寶坻區(qū)畜牧水產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津 301800）

隨著社會經(jīng)濟的不斷發(fā)展，人民的生活水平不斷提高，喜歡飼養(yǎng)觀賞魚的人越來越多。獅子頭金魚（Red lion-head goldfish）隸屬鯉形目（Cypriniformes）鯉科（Cyprinidae）鯽屬（Carassius），以其頭部豐滿的肉瘤聞名。近年來，其養(yǎng)殖范圍日趨廣泛，相關(guān)的著色研究也逐漸增多，而關(guān)于著色劑對其血液及免疫力方面的影響鮮有研究，但魚體健康程度可直接影響其體表顏色、降低其觀賞價值[1]。萬壽菊（Tagetes erecta）為菊科萬壽菊屬一年生草本植物，含有豐富的天然色素——葉黃素[2]。萬壽菊在園林綠化、食品著色、化妝品、煙草、醫(yī)療及禽類飼料中廣泛應(yīng)用，開發(fā)潛力巨大[3-4]。蝦青素是一種在水產(chǎn)養(yǎng)殖上被廣泛應(yīng)用的粉紅色的晶體，為類胡蘿卜素的一種，許多學(xué)者通過動物和臨床實驗證明蝦青素具有抑制腫瘤發(fā)生、增強免疫功能、提高肌肉性能等多方面的生理功能，具有廣闊的前景[5-7]。本試驗以獅子頭金魚為試驗對象，通過飼喂含有不同水平的萬壽菊粉和蝦青素的飼料，研究其生長、血液指標及免疫力的變化情況，旨在篩選出獅子頭金魚飼料中二者的適宜添加水平，為研制獅子頭金魚提升免疫力飼料提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗用魚

試驗用獅子頭金魚購自天津市金水族水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司。魚體消毒后，暫養(yǎng)1周，挑選體格健壯、規(guī)格一致（15.63±0.22）g的獅子頭金魚720尾，隨機分為9個處理組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)20尾魚。試驗在天津現(xiàn)代晨輝科技集團有限公司循環(huán)水試驗室進行。

1.2 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖箱長0.78m、寬0.58m、高0.47 m，有效水體積為150L。養(yǎng)殖過程中每天投喂兩次，投飼量為魚體質(zhì)量的3%～6%，隨獅子頭金魚生長狀況及吃食情況調(diào)整。投喂時間為每天的09:00和15:00。定期檢測水質(zhì)，每天記錄水溫、死亡條數(shù)及投餌量。每天換一次水，一周清洗循環(huán)水缸一次，20天清洗一次養(yǎng)殖水缸。試驗周期為56天。

1.3 試驗飼料

以萬壽菊粉（葉黃素含量2%）、蝦青素（有效含量10%）為影響因素，采用雙因素試驗設(shè)計中的3×3因子設(shè)計，設(shè)計9種飼料，每個因素各設(shè)3個水平，分別為萬壽菊粉（0.38%、0.76%、1.52%）、蝦青素（0.04%、0.08%、0.16%），依次記為Diet 1，Diet 2，Diet 3，Diet 4，Diet 5，Diet 6，Diet 7，Diet 8，Diet 9。以不含任何增色劑的基礎(chǔ)飼料做對照飼料，見表1。

1.4 測定指標和方法

1.4.1 飼料不同水平添加劑獅子頭金魚生長的影響

增重率、特定生長率、餌料系數(shù)、蛋白質(zhì)效率、肝體指數(shù)的測定公式如下：

式中，Wt為終末體重（g）；W0為初始體重（g）；t為試驗天數(shù)（d）；F為飼料攝入量干重（g）；CP為飼料粗蛋白含量（%）。

1.4.2 飼料不同水平添加劑對獅子頭金魚免疫指標的影響

試驗56天后，將試驗魚解剖，從魚尾柄腹側(cè)處抽血，將血液注入標記好的離心管中，4℃冰箱內(nèi)靜置4～8 h后在4℃、以4200 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，離心后吸取上層血清放置干凈的離心管中，置于-20℃保存?zhèn)溆?。測定生理指標時，取出組織，在冰浴條件下用研磨器手動勻漿，離心，離心機設(shè)置與血液離心相同，吸取上清液放置在干凈的離心管中，進行各指標的測定。

表1 飼料配方

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料不同水平添加劑對獅子頭金魚生長的影響

由表2、表3、表4可知，飼料中添加不同水平的萬壽菊粉、蝦青素獅子頭金魚生長性能有顯著影響（P＜0.05）。增重率在Diet 2最高，與Diet 9差異不明顯（P＞0.05），但顯著高于其他飼料組（P＜0.05）；特定增長率、蛋白質(zhì)效率在Diet 9最高，Diet 2與之差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于其他組（P＜0.05）；餌料系數(shù)最低值在Diet 2，與Diet 9差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）；肝體指數(shù)在Diet 3組最低，與Diet 1、Diet 2、Diet 6、Diet 9飼料組差異不顯著（P＞0.05）。萬壽菊粉水平對獅子頭金魚肝體指數(shù)有顯著影響（P＜0.05），最優(yōu)水平為1.52%；萬壽菊粉和蝦青素及其交互作用對其他指標無顯著影響（P＞0.05）。

2.2 飼料不同水平著色劑對獅子頭金魚血液指標的影響

由表5、表6、表7可知，飼料中添加不同水平的萬壽菊粉、蝦青素對獅子頭金魚血液指標有顯著影響（P＜0.05）。甘油三酯受著色劑的影響不顯著（P＞0.05）；血清總膽固醇含量在Diet 1飼料組最低，與Diet 2、Diet 5、Diet 9飼料組無顯著差異（P＞0.05），但是顯著低于其他組（P＜0.05）；高密度值蛋白膽固醇含量最高值出現(xiàn)在Diet 9飼料組，與Diet 2、Diet 7、Diet 8飼料組差異不顯著（P＞0.05）；低密度脂蛋白膽固醇最低值出現(xiàn)在Diet 2飼料組，與Diet 1、Diet 9飼料組差異不顯著（P＞0.05），但是顯著低于其他組（P＜0.05）。萬壽菊粉水平對血清總膽固醇含量及高密度值蛋白膽固醇含量影響顯著（P＜0.05），最優(yōu)水平均為1.52%。萬壽菊粉、蝦青素及其交互作用對獅子頭金魚其他血液指標無顯著影響。

2.3 飼料不同水平添加劑對獅子頭金魚免疫指標的影響

由表8、表9、表10可知，飼料中添加不同水平的萬壽菊粉、蝦青素對獅子頭金魚免疫指標GOT、GPT活性有顯著的影響（P＜0.05），血清中GOT活性在Diet 6最低與Diet 2、Diet 8、Diet 9差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）；肝胰臟在Diet 9最低，與Diet 2、Diet 1差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）。GPT中血清含量在Diet 9最低，與Diet 6差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）；肝胰臟在Diet 6最低，與Diet 2差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于其他組（P＜0.05）。萬壽菊粉水平對肝胰臟中GOT活性有顯著影響（P＜0.05），最優(yōu)水平分別為0.38%、0.38%、1.52%；萬壽菊粉、蝦青素及其交互作用對獅子頭金魚血清及肝胰臟中其他指標無顯著影響（P＞0.05）。

表2 各組飼料對獅子頭金魚生長指標的影響

表3 各組飼料對獅子頭金魚生長指標的影響的主體間效應(yīng)檢驗

表4 各組飼料對獅子頭金魚生長指標的影響的Two-way ANVOA

表5 各組飼料對獅子頭金魚血液指標的影響

表6 各組飼料對獅子頭金魚血液指標的影響的主體間效應(yīng)檢驗

表7 各組飼料對獅子頭金魚血液指標的影響的Two-way ANOVA

表8 各組飼料對獅子頭金魚組織中GOT、GPT活性的影響

表9 各組飼料對獅子頭金魚組織中GOT、GPT活性的影響的主體間效應(yīng)檢驗

表10 各組飼料對獅子頭金魚組織中GOT、GPT活性的影響的Two-way ANOVA

3 討論

3.1 飼料不同水平添加劑對獅頭金魚生長的影響

蝦青素是一種酮式類胡蘿卜素，屬于萜烯類不飽和化合物，能夠促進養(yǎng)殖對象的生長、存活[7]。孫劉娟等報道了蝦青素對血鸚鵡的生長有顯著促進作用[8]，王魯波等指出，一定濃度的萬壽菊葉黃素對黃顙魚的生長表現(xiàn)出促進作用[9]。本試驗也發(fā)現(xiàn)了類似的情況，在飼料中添加蝦青素和萬壽菊粉后，各試驗組獅子頭金魚的增重率、特定生長率、餌料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率均有所升高，其中Diet 2和Diet 9組增重率顯著高于對照組。肝指數(shù)是評價魚體健康程度的重要指標，較低的肝指數(shù)可以說明魚體的肝臟負荷在其自身肝功能調(diào)節(jié)的可控范圍內(nèi)。謝家俊[10]發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加蝦青素后，卵形昌鯵幼魚的肝體比和肥滿度大體呈下降的趨勢。本試驗結(jié)果與上述研究相類似，即添加不同含量的蝦青素和萬壽菊粉對獅子頭金魚內(nèi)臟比和肝體比無顯著影響。

3.2 飼料不同水平添加劑對獅頭金魚血液指標的影響

TG、TC、HDL-C、LDL-C都是反映機體脂類代謝的指標。甘油三酯是機體內(nèi)存在最多的脂類，其含量升高與動脈樣硬化性心血管疾病密切相關(guān)，膽固醇是血液中所有蛋白質(zhì)所含膽固醇之和，高密度脂蛋白膽固醇主要是由肝臟合成，其可以抗動脈粥樣硬化，減少患冠狀動脈心臟病的危險，低密度脂蛋白膽固醇含有大量的不飽和脂肪酸，其含量越高，機體患動脈粥樣硬化、冠心病等心血管疾病的概率越大。王述浩等[11]報道飼料中添加萬壽菊粉提高了肉雞血清高密度脂蛋白水平，降低了血清膽固醇和低密度脂蛋白水平。本實驗也發(fā)現(xiàn)了類似的情況，當飼料中萬壽菊粉、蝦青素水平為0.38%、0.08%時，獅子頭金魚血液中高密度脂蛋白膽固醇最高，而低密度脂蛋白膽固醇含量最低，表明在飼料中添加萬壽菊粉和蝦青素可以維持魚體血脂平衡、保持魚體健康。

3.3 飼料不同水平添加劑對獅子頭金魚免疫的影響

GOT是轉(zhuǎn)氨酶的一種，主要存在于肝細胞的線粒體內(nèi)，是醫(yī)學(xué)臨床上肝功能檢查的指標，用來判斷肝臟是否受到損害。當肝臟發(fā)生嚴重壞死或破壞時，會引起谷草轉(zhuǎn)氨酶在血清中濃度偏高，所以谷草轉(zhuǎn)氨酶高更能反映肝細胞受損傷的嚴重程度。GPT主要存在于肝臟、心臟組織細胞中，當這些組織發(fā)生病變時，該酶活力增多。付媛媛在飼料中添加黃芪和蝦青素顯著提高中國對蝦的免疫相關(guān)酶活，增強非特異性免疫功能及降低中國對蝦對病原的敏感性，增強機體抗病能力[12]。海璇雋等[13]也報道了蝦青素可提高小鼠的非特異性免疫和體液免疫功能。本試驗中，在飼料中添加萬壽菊粉和蝦青素后，各試驗組獅子頭金魚的免疫指標均有所提升。

4 結(jié)論

投喂萬壽菊粉和蝦青素的飼料對獅子頭金魚的生長指標、免疫指標均有顯著影響。實驗中添加0.38%萬壽菊粉+0.08%蝦青素和1.52%萬壽菊粉+0.16%蝦青素時效果最佳。從節(jié)約生產(chǎn)成本來講，建議獅子頭金魚飼料中添加萬壽菊粉添加量為0.38%、蝦青素添加量為0.08%。