低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1與胎盤植入及新生兒結(jié)局的關(guān)系

陳睿 王瑜

河南省人民醫(yī)院（鄭州 450003）

胎盤植入指胎盤絨毛異常而侵犯到子宮肌層，也有研究人員稱其為病態(tài)附著胎盤。近些年，大量研究證實(shí)，胎盤植入產(chǎn)婦可能出現(xiàn)大出血、子宮破裂以及子宮切除等一系列不良妊娠結(jié)局，嚴(yán)重威脅到產(chǎn)婦及新生兒的健康甚至生命［1-2］。低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1（low density lipoprotein receptor adaptor protein 1，LRP）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞表面蛋白，屬于一種內(nèi)吞性受體，系低密度脂蛋白受體基因家族中的一員。LRP1除了在細(xì)胞表面被發(fā)現(xiàn)以外，還在人類血漿以及腦脊液等體液中檢測(cè)到［3-4］。低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白與血管生成和多種血管疾病有關(guān)，但其在滋養(yǎng)細(xì)胞調(diào)節(jié)中的作用尚不完全清楚。近來，研究者通過測(cè)定鼠胚體外培養(yǎng)液發(fā)現(xiàn)，小鼠低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白基因敲除后導(dǎo)致胚胎死亡，提示低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白與小鼠胚胎生長、發(fā)育以及著床具有一定的相關(guān)性［6-8］。本研究的新穎之處是選擇胎盤植入產(chǎn)婦為研究對(duì)象探討胎盤植入產(chǎn)婦血清LRP1表達(dá)情況，目前該問題尚無研究者涉獵。本研究可分析其表達(dá)水平與產(chǎn)婦及新生兒結(jié)局的相關(guān)性，以為臨床診治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料本研究選取2016年4月至2017年10月期間于我院分娩的30例胎盤植入產(chǎn)婦以及同期于我院分娩的健康產(chǎn)婦為研究對(duì)象。入組標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理證實(shí)的胎盤植入產(chǎn)婦；（2）存在既往人工流產(chǎn)史或?qū)m腔操作史產(chǎn)婦；（3）神志、意識(shí)正常產(chǎn)婦。（4）臨床資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在家族遺傳病產(chǎn)婦；（2）合并嚴(yán)重慢性疾病產(chǎn)婦；（3）有精神疾病或精神病史產(chǎn)婦；（4）合并惡性腫瘤產(chǎn)婦。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且受試者均已簽署書面知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 受試者的分組根據(jù)LRP1表達(dá)水平，將30例胎盤植入產(chǎn)婦分為兩組，其中包含17例低表達(dá)組受試者以及13例高表達(dá)組受試者。注：低表達(dá)組和高表達(dá)組分組的具體標(biāo)準(zhǔn)是（6.55±0.78）μg/mL（該水平是普通人群中該蛋白的平均表達(dá)水平）［5］。

1.2.2 樣本收集于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，抽取3 mL靜脈血，采用離心機(jī)以3 000 r/min轉(zhuǎn)速條件下離心10 min；取上清液，置于-80℃冰箱中保存待測(cè)。

1.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定血清低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白 1、Caspase-3、Bax、bcl-2表達(dá)水平按照ELISA試劑盒操作說明中要求依次加樣，將標(biāo)準(zhǔn)品與標(biāo)本分別加入每孔；反應(yīng)孔采用封板膠紙封住，37℃條件下孵育1.5 h；清洗3次，每次5 min；將生物素化抗體稀釋液加入空白孔，生物素化抗體工作液加入其余孔內(nèi)，反應(yīng)孔采用封板膠紙封??；37℃條件下孵育1 h；清洗3次，每次5 min；打開電源，設(shè)置檢測(cè)程序；加入顯色底物，避光條件下孵育15 min；清洗3次，每次5 min；加入終止液以終止反應(yīng)，采用酶標(biāo)儀（芬蘭，Labsystems Multiskan MS）測(cè)定各孔450 nm波長條件下光密度值；以標(biāo)準(zhǔn)品濃度以及對(duì)應(yīng)光密度值為依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣本濃度根據(jù)曲線方程進(jìn)行計(jì)算。ELISA試劑盒購自武漢基因美公司。

1.2.4 觀察指標(biāo)（1）比較胎盤植入產(chǎn)婦與健康對(duì)照產(chǎn)婦血清LRP1表達(dá)水平；（2）比較胎盤植入產(chǎn)婦與健康對(duì)照產(chǎn)婦血清Caspase-3、Bax、bcl-2表達(dá)水平；（3）搜集血清LRP1低表達(dá)、高表達(dá)胎盤植入產(chǎn)婦年齡、生育史、產(chǎn)次、流產(chǎn)史以及剖宮產(chǎn)史等臨床資料并進(jìn)行比較；（4）比較血清LRP1低表達(dá)、高表達(dá)胎盤植入產(chǎn)婦血清Caspase-3、Bax、bcl-2表達(dá)水平；（5）比較血清LRP1低表達(dá)、高表達(dá)胎盤植入產(chǎn)婦產(chǎn)后出血、產(chǎn)后輸血以及子宮切除情況；（6）比較血清LRP1低表達(dá)、高表達(dá)胎盤植入產(chǎn)婦娩出新生兒結(jié)局。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件；計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析或者重復(fù)測(cè)量的方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）表示，多組間比較采用χ2分析；P＜0.05代表差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者LRP1表達(dá)水平比較觀察組受試者LRP1表達(dá)水平低于對(duì)照組［（4.10±0.63）μg/mL vs.（8.16 ± 1.12）μg/mL］，且兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組受試者LRP1表達(dá)水平比較Tab.1 Comparison of LDL receptor associated protein 1 expression level between two groups（n=30）±s

表1 兩組受試者LRP1表達(dá)水平比較Tab.1 Comparison of LDL receptor associated protein 1 expression level between two groups（n=30）±s

組別對(duì)照組觀察組t值P值例數(shù)30 30低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白（μg/mL）8.16±0.112 4.10±0.063 17.305 0.001

2.2 兩組受試者Caspase-3、Bax、bcl-2表達(dá)水平比較觀察組受試者Caspase-3表達(dá)水平高于對(duì)照組（0.606±0.082 vs.0.238±0.039）、Bax表達(dá)水平高于對(duì)照組（0.558±0.073 vs.0.146±0.021）、bcl-2表達(dá)水平低于對(duì)照組（0.185±0.026 vs.0.540±0.070），且兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組受試者Caspase-3、Bax、bcl-2表達(dá)水平比較Tab.2 The expression levels of Caspase-3，Bax and bcl-2 in two groups were compared（n=30）±s

表2 兩組受試者Caspase-3、Bax、bcl-2表達(dá)水平比較Tab.2 The expression levels of Caspase-3，Bax and bcl-2 in two groups were compared（n=30）±s

組別對(duì)照組觀察組t值P值Caspase-3 0.238±0.039 0.606±0.082-12.198 0.000 Bax 0.146±0.021 0.558±0.073-9.708 0.001 bcl-2 0.540±0.070 0.185±0.026 16.039 0.000

2.3 兩組胎盤植入產(chǎn)婦一般資料比較調(diào)查結(jié)果顯示，兩組受試者年齡、生育史、產(chǎn)次、流產(chǎn)史以及剖宮產(chǎn)史等臨床資料均不存在顯著差異（P＞0.05），故可排除上述因素對(duì)研究結(jié)果造成的影響，數(shù)據(jù)具有可比性，見表3。

表3 兩組胎盤植入產(chǎn)婦一般資料比較Tab.3 Comparison of general data of two groups of placenta implantation women（n）

2.4 兩組胎盤植入產(chǎn)婦Caspase-3、Bax、bcl-2表達(dá)水平比較高表達(dá)組受試者Caspase-3表達(dá)水平低于低表達(dá)組（0.525±0.068vs.0.761±0.092）、Bax表達(dá)水平低于低表達(dá)組（0.403±0.046vs.0.755±0.088）、bcl-2表達(dá)水平高于低表達(dá)組（0.268±0.049vs.0.132±0.028），且兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組胎盤植入產(chǎn)婦Caspase-3、Bax、bcl-2表達(dá)水平比較Tab.4 Comparison of expression levels of Caspase-3，Bax and Bcl-2 in two groups of placenta accreta ±s

表4 兩組胎盤植入產(chǎn)婦Caspase-3、Bax、bcl-2表達(dá)水平比較Tab.4 Comparison of expression levels of Caspase-3，Bax and Bcl-2 in two groups of placenta accreta ±s

組別低表達(dá)組高表達(dá)組t值P值例數(shù)17 13 Caspase-3 0.761±0.092 0.525±0.068 7.757＜0.05 Bax 0.755±0.088 0.403±0.046 14.516＜0.05 bcl-2 0.132±0.028 0.268±0.049-9.580＜0.05

2.5 兩組胎盤植入產(chǎn)婦產(chǎn)后情況比較高表達(dá)組受試者產(chǎn)后出血率高于低表達(dá)組（30.77%vs.17.65%）、產(chǎn)后輸血率高于低表達(dá)組（20.08%vs.11.76%）、子宮切除率高于低表達(dá)組（15.38%vs.0.00%），且兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表5。

表5 兩組胎盤植入產(chǎn)婦產(chǎn)后情況比較Tab.5 Comparison of postpartum outcomes between two groups of placenta accreta例（%）

2.6 兩組胎盤植入產(chǎn)婦娩出新生兒結(jié)局比較兩組受試者娩出新生兒出生體重、Apgar評(píng)分、分娩孕周均不存在顯著差異（P＞0.05）；高表達(dá)組受試者娩出新生兒病死率高于低表達(dá)組（15.40%vs.5.90%），且兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表6。

表6 兩組胎盤植入產(chǎn)婦娩出新生兒結(jié)局比較Tab.6 Comparison of neonatal outcomes of two groups of placenta implanted mothers ±s

表6 兩組胎盤植入產(chǎn)婦娩出新生兒結(jié)局比較Tab.6 Comparison of neonatal outcomes of two groups of placenta implanted mothers ±s

組別低表達(dá)組高表達(dá)組χ2（t）值P值例數(shù)17 13分娩孕周（周）36.26±2.68 36.43±2.74-0.171＞0.05出生體重（kg）2.86±0.57 2.89±0.55-0.145＞0.05 Apgar評(píng)分（分）1 min 8.90±1.36 8.92±1.44-0.039＞0.05 5 min 9.45±1.63 9.39±1.55 0.108＞0.05病死率［例（%）］1（5.90）2（15.40）-4.765＜0.05

3 討論

LRP1屬于低密度脂蛋白受體超家族成員之一，最初被發(fā)現(xiàn)是作為淀粉樣蛋白Aβ以及ApoE內(nèi)吞受體，隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)其可作為活化的α2巨球蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶-9以及組織型纖溶酶原激活劑等多種配體的細(xì)胞信號(hào)受體［9-10］。LRP1激活劑可通過NPXY的酪氨酸磷酸化使得細(xì)胞信號(hào)通路被激活。此外，LRP1還能夠與PDGF受體、結(jié)合素類以及uPAR等多種受體相互作用。總的來說，LRP1與細(xì)胞的信號(hào)通路、遷徙、代謝以及血腦屏障的完整性等多種生物過程相關(guān)［11］。研究人員通過破壞小鼠的LRP1基因發(fā)現(xiàn)，小鼠胚胎的著床以及繼續(xù)發(fā)育受阻，分析原因是由于LRP1通過對(duì)纖溶酶原激活物抑制物1表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)從而影響其著床，證同時(shí)也說明了LRP1的表達(dá)水平與胚胎著床密切相關(guān)［12-14］。另有研究發(fā)現(xiàn)，LRP1在胚胎著床位置侵入的合體滋養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞以及體外培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細(xì)胞中均有表達(dá)，提示在胚胎著床時(shí)滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲過程中低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白扮演重要角色，而胚胎著床植入子宮內(nèi)膜的前提即為囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞的正常增殖與黏附。有研究對(duì)移植患者妊娠組與未妊娠組胚胎培養(yǎng)液中LRP1的表達(dá)水平進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)妊娠組胚胎培養(yǎng)液中LRP1的表達(dá)量高于未妊娠組，提示LRP1的高表達(dá)量與胚胎形態(tài)學(xué)以及妊娠結(jié)局良好相關(guān)。由此可以推斷，對(duì)LRP1的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)有利于預(yù)測(cè)產(chǎn)婦妊娠結(jié)局。

胎盤植入能夠造成產(chǎn)婦發(fā)生嚴(yán)重產(chǎn)后出血、凝血障礙以及臟器受損等多種并發(fā)癥、嚴(yán)重可造成死亡［15］。近年來我國胎盤植入發(fā)病率呈逐年攀升的趨勢(shì)，也得到了越來越多產(chǎn)科醫(yī)師的幫助。由于胎盤植入產(chǎn)婦主要為瘢痕子宮，手術(shù)過程中涉及大量輸血、處理子宮與比鄰器官以及并發(fā)癥防治，為了改善胎盤植入產(chǎn)婦及其免除新生兒結(jié)局，需要探索有效的生物指標(biāo)以進(jìn)行早期診斷以及處理方案的制定。本研究采用ELISA法對(duì)胎盤植入產(chǎn)婦與健康對(duì)照產(chǎn)婦血清LRP1表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)胎盤植入產(chǎn)婦血清LRP1表達(dá)水平低于健康對(duì)照產(chǎn)婦，提示胎盤植入產(chǎn)婦存在LRP1表達(dá)水平下降。LI等［16］發(fā)現(xiàn)，脂蛋白受體相關(guān)蛋白敲除抑制了HTR-8/SvNo細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和管形成，以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，LRP敲除也顯著降低MMPs、PLGF和VEGF的表達(dá)和Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活。LRP可能通過血管形成和滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤來積極調(diào)節(jié)母體動(dòng)脈的重塑。該研究的結(jié)論與本研究可相互印證，即LRP是滋養(yǎng)層細(xì)胞存活和侵襲的關(guān)鍵，胚胎植入后母體螺旋動(dòng)脈的重塑依賴于緊密調(diào)節(jié)的滋養(yǎng)細(xì)胞功能，是確保妊娠成功的關(guān)鍵。

為進(jìn)一步分析LRP1與胎盤植入以及新生兒結(jié)局的相關(guān)性，本研究將30例胎盤植入患者分為LRP1低表達(dá)組與高表達(dá)組，通過分析發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)組受試者Caspase-3、Bax表達(dá)水平低于高表達(dá)組，bcl-2表達(dá)水平高于低表達(dá)組，且產(chǎn)婦產(chǎn)后出血率、輸血率、子宮切除率以及娩出新生兒病死率均高于低表達(dá)組，提示LRP1表達(dá)水平降低可上調(diào)Caspase-3與bax活性，進(jìn)而下調(diào)Akt的磷酸化以及Bcl-2表達(dá)水平［17-18］。已有研究［19］指出，Caspase-3與Bax被激活后與細(xì)胞凋亡相關(guān)，而敲低LRP1后細(xì)胞二者表達(dá)水平會(huì)增加。本研究的新發(fā)現(xiàn)是，LRP1低表達(dá)的細(xì)胞Bcl-2表達(dá)水平降低，而Bcl-2的作用為阻止腫瘤壞死因子所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這提示LRP1在促細(xì)胞生存與抗凋亡方面具有重要作用，該發(fā)現(xiàn)也是本研究的的新穎之處。

綜上所述，胎盤植入患者LRP1表達(dá)水平降低，可能通過上調(diào)Caspase-3與bax活性，下調(diào)Bcl-2表達(dá)水平對(duì)產(chǎn)婦及新生兒結(jié)局造成不良影響。