低血紅蛋白糖尿病人在HLC-723G8分析儀上測定糖化血紅蛋白方法的探討

陶純剛

（鎮(zhèn)江市丹徒區(qū)人民醫(yī)院檢驗科 江蘇 鎮(zhèn)江 212028）

對于貧血病人由于Hb異常或含量過少，常常導(dǎo)致儀器無法給出測定結(jié)果。本試驗為解決這個問題而提出，現(xiàn)對實驗結(jié)果做如下報告。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本院內(nèi)分泌科糖尿病住院和部分門診患者HbA1c標(biāo)本20份，其中血紅蛋白含量在≥100g/L的標(biāo)本10份，＜100g/L的標(biāo)本10份。每次檢測前及全部標(biāo)本檢測后進(jìn)行兩個水平質(zhì)控品測定，均顯示檢測結(jié)果在控。

1.2 儀器與試劑

五分類血球計數(shù)儀邁瑞5380，用來測量標(biāo)本血紅蛋白濃度，以便對標(biāo)本行分組。日本TOSOH HLC 723G8糖化血紅蛋白分析儀，所用試劑為儀器配套試劑，質(zhì)控品為Roche公司生產(chǎn)。所用的采血管均為EDTA-K2抗凝真空定量采血管。

1.3 方法

所有標(biāo)本均采雙份平行血樣。首先將患者其中一份EDTA-K2抗凝的全血標(biāo)本測量其血紅蛋白含量，記錄結(jié)果，并按≥100g/L和＜100g/L分A,B兩組。分別將兩組標(biāo)本直接上723G8糖化血紅蛋白分析儀測量，并記錄結(jié)果。然后，將A,B兩組對應(yīng)的另份平行樣本以500G/5分鐘離心,將離心后A組對應(yīng)的平行標(biāo)本用微量移液器吸出300ul血漿加入到先前已測過GHb的A組樣本中，使之成為稀釋過的A’組樣本。對B組標(biāo)本對應(yīng)的平行標(biāo)本則用微量移液器吸出300ul血漿棄去，使之成為濃縮過的B’組樣本。充份混均均A’,B’兩組標(biāo)本。分別測定A’,B’組樣本血紅蛋白含量，記錄結(jié)果，并上723G8分析儀測量HbA1C含量，并記錄全部結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SAS9.2統(tǒng)講軟件，根據(jù)數(shù)據(jù)資料求出各組平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，以±s表示，組間數(shù)據(jù)采用t檢驗。

2.結(jié)果

2.1 A組與A’組的數(shù)據(jù)比較

A組樣本為血紅蛋白正常范圍內(nèi)標(biāo)本，A’組為A組經(jīng)血漿稀釋過的試驗標(biāo)本。其中有一個樣本經(jīng)稀釋過后血紅蛋白濃度太低的緣故，未能測定出HbA1c結(jié)果。所以A2及A2’樣本數(shù)據(jù)在計算時未計入。A組樣本及A’組樣本的HbA1c結(jié)果分別為（8.30±1.55)%，（8.31±1.52)%。兩均數(shù)間比較用t檢驗，P＞0.05差異無統(tǒng)計學(xué)意義。詳見表1。

表1 A組與A'組的HbA1c實驗數(shù)據(jù)

2.2 B組與B’組的數(shù)據(jù)比較

B組樣本為血紅蛋白低于正常范圍標(biāo)本，B’組為B組經(jīng)離心去除部分血漿的濃縮的試驗標(biāo)本。其中有一個樣本未濃縮前血紅蛋白濃度太低的緣故，未能測定出HbA1c結(jié)果。所B7及B7’樣本數(shù)據(jù)在計算時未計入。B組樣本及B’組樣本的HbA1c結(jié)果分別為（8.54±1.64)%，（8.52±1.62)%。兩均數(shù)間比較用t檢驗，P＞0.05差異無統(tǒng)計學(xué)意義。詳見表2。

表2 B組與B'組的HbA1c實驗數(shù)據(jù)

3.討論

實驗數(shù)據(jù)顯示，HLC-723G8糖化血紅蛋白分析儀對測量分析的樣本的血紅蛋白濃度是有一定要求的，從實驗數(shù)據(jù)上看，當(dāng)血紅蛋白濃度低于60g/L左右時,就不能給出實驗結(jié)果。儀器給出的時間對輸出信號作積分的可靠值在500～2700mV·s?？梢妼ρt蛋白的濃度是有一定范圍要求的。由于采用的是HPLC技術(shù)，使用陽離子交換柱，用3種不濃度鹽溶液所形成的梯度洗脫液根據(jù)血紅蛋白所帶電荷差異分離出6種血紅蛋白，測定分離后的各種Hb含量從而獲得HbA1c的百分含量。所以當(dāng)我們對貧血比較嚴(yán)重的樣本采取適當(dāng)?shù)臐饪s，使其Hb在儀器測量范圍內(nèi)測定時，應(yīng)該對血紅蛋白各組分含量的百分比是沒有什么影響的。本試驗正是基于此假設(shè)進(jìn)行的，試驗的數(shù)據(jù)結(jié)果很好的驗證了我們的假設(shè)。