QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞蛋中125種獸藥殘留

方從容， 高 潔， 王雨昕， 周 爽， 趙云峰， 陳達(dá)煒*， 郭啟雷

(1．國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心，衛(wèi)生部食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100021;2．安捷倫科技有限公司，北京100102)

我國(guó)是鮮蛋生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，為防止禽類疫病發(fā)生，獸藥被廣泛應(yīng)用于對(duì)禽類的治療，但由于經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)使，養(yǎng)殖戶往往濫用各種抗生素，造成禽蛋中獸藥殘留超標(biāo)的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生［1，2］。中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第193號(hào)和278號(hào)明確規(guī)定了食品動(dòng)物禁用的一系列藥物清單，其中包括性激素類、氯霉素類、磺胺類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、硝基咪唑類等獸藥?，F(xiàn)在迫切需要建立雞蛋中獸藥多殘留的高通量快速檢測(cè)方法。

國(guó)標(biāo)方法［3－7］采用的是分類檢測(cè)各類獸藥，優(yōu)點(diǎn)是樣品前處理適用范圍廣，缺點(diǎn)是樣品前處理復(fù)雜，完成不同種類的獸藥檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UHPLC-MS/MS)因具有高靈敏度、高選擇性的優(yōu)勢(shì)已被廣泛用于獸藥多殘留分析，但在蛋類樣品中同時(shí)檢測(cè)硝基咪唑類、苯并咪唑類、磺胺類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、氯霉素類、激素類(雄激素、孕激素、糖皮質(zhì)類激素、雌激素類)獸藥還鮮有報(bào)道。冷凍脂質(zhì)過(guò)濾凈化在低溫(≤－20℃)條件下將提取液中的脂質(zhì)析出，適用于富含脂類的動(dòng)物性食品;而基于分散固相萃取(dispersive solid-phase extraction，DSPE)的 QuECh-ERS方法因其樣品用量少、試劑消耗少、操作簡(jiǎn)單、有效等特點(diǎn)，已成為快速分析獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)［8－19］。本研究采用DSPE法結(jié)合冷凍脂質(zhì)過(guò)濾法處理樣品，同時(shí)測(cè)定蛋類樣品中11類共125種禁限用獸藥，與國(guó)標(biāo)方法相比，本研究所建方法操作更為簡(jiǎn)單、快速，適用于蛋類樣品中獸藥殘留的高通量快速分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 儀器、試劑與材料

6495型超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧離子(ESI)源，美國(guó)安捷倫公司;3K15型冷凍離心機(jī)(最大轉(zhuǎn)速10 000 r/min)，購(gòu)自Sigma公司。

乙腈、甲醇和甲酸均為色譜純，購(gòu)自Fisher公司;125種獸藥標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自德國(guó)Dr．Ehrenstorfer公司(見表1);氟化銨(NH4F)純度大于99.99%，購(gòu)自上海阿拉丁試劑有限公司;C18粉(50 μm，6 nm)以及 DSPE混合凈化劑(50 mg N-丙基乙二胺(PSA)+50 mg C18+250 mg Na2SO4)購(gòu)自天津博納艾杰爾公司;乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)購(gòu)自廣東汕頭市西隴化工廠。

表1 125種獸藥的質(zhì)譜采集參數(shù)、保留時(shí)間(tR)、線性范圍、相關(guān)系數(shù)Table 1 MS parameters，retention times(tR)，linear ranges，correlation coefficients(R2)of the 125 veterinary drugs

表1 (續(xù))Table 1 (Continued)

表1 (續(xù))Table 1 (Continued)

表1 (續(xù))Table 1 (Continued)

1．2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1．2．1 獸藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

分別稱取各獸藥標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度均為1 g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于－20℃條件下保存。

1．2．2 獸藥混合標(biāo)準(zhǔn)使用液

分別吸取適量獸藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 g/L)，用甲醇配制成中間液;再分別吸取0.5 mL磺胺類標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 mg/L)、1.0 mL喹諾酮標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 mg/L)、0.5 mL大環(huán)內(nèi)酯類標(biāo)準(zhǔn)中間液(100 mg/L)、0.5 mL四環(huán)素類標(biāo)準(zhǔn)中間液(100 mg/L)、1.0 mL硝基咪唑類標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 mg/L)、1.0 mL苯基咪唑類標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 mg/L)、1.0 mL雄激素類標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 mg/L)、1.0 mL孕激素類標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 mg/L)、1.0 mL雌激素類標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 mg/L)、1.0 mL糖皮質(zhì)醇類激素標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 mg/L)、1.0 mL氯霉素類標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 mg/L)置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，置于－20℃冰箱中保存?；前奉惈F藥的質(zhì)量濃度為0.5 mg/L，四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類獸藥的質(zhì)量濃度為5.0 mg/L，其他8類獸藥的質(zhì)量濃度為1.0 mg/L。

1．2．3 獸藥混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

吸取適量125種獸藥標(biāo)準(zhǔn)使用液，用初始流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度為0.025～500.0 μg/L標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，于4℃條件下保存。

1．3 樣品處理

取10枚雞蛋混合均勻，稱取2.0 g(精確到0.01 g)混勻的蛋液于50 mL離心管中，加入1.0 mL水和0.4 mL的0.1 mol/L EDTA溶液，混勻后再加入7 mL乙腈渦旋(1 600 r/min)混勻5 min，在4℃條件下離心(10 000 r/min)5 min，上清液轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中，加水定容至10 mL，于－20℃冷凍2 h后，在4℃條件下離心(10 000 r/min)5 min，取1.0 mL上清液，加入DSPE混合凈化劑(50 mg PSA+50 mg C18+250 mg Na2SO4)，渦旋 30 s后，取上清液0.3 mL加入0.6 mL水稀釋，混勻后過(guò)0.2 μm有機(jī)微孔濾膜，濾液注入U(xiǎn)HPLC-MS/MS分析。

1．4 儀器分析條件

UHPLC在正離子模式下的條件:ZORBHX C18色譜柱(3.0 mm ×100 mm，1.8 μm);流速 0.4 mL/min;流動(dòng)相 A:0.5 mmol/L NH4F-0.1%(v/v)甲酸溶液，流動(dòng)相B:0.1%(v/v)甲酸甲醇;梯度洗脫:2%B保持1 min，在1 min內(nèi)增至20%B，在6 min內(nèi)增至28%B，在0.5 min內(nèi)增至60%B，在7 min內(nèi)增至98%B(保持3 min);柱溫40℃;進(jìn)樣量1 μL。

UHPLC在負(fù)離子模式下的條件:ZORBHX C18色譜柱(100 mm ×3.0 mm，1.8 μm);流速 0.4 mL/min;流動(dòng)相A:1 mmol/L NH4F溶液，流動(dòng)相B:甲醇;梯度洗脫:20%B保持0.5 min，在1 min內(nèi)增至50%B，在4 min內(nèi)增至70%B(保持3 min)，在0.1 min內(nèi)增至100%B(保持2 min);柱溫40℃;進(jìn)樣量 5 μL。

質(zhì)譜條件:ESI源;正負(fù)離子模式;干燥氣溫度210℃;干燥氣流速13 L/min;霧化器溫度壓力245 kPa;鞘氣溫度400℃;鞘氣流速12 L/min;毛細(xì)管電壓(正離子)3 500 V，毛細(xì)管電壓(負(fù)離子)3 000 V;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)離子對(duì)、質(zhì)譜采集參數(shù)、保留時(shí)間、線性范圍、相關(guān)系數(shù)(R2)見表1，其中以化合物的色譜保留時(shí)間和兩對(duì)MRM離子對(duì)進(jìn)行定性，定量MRM離子對(duì)的峰面積進(jìn)行定量。

采用正離子模式分析的114種獸藥總離子流圖見圖1a，采用負(fù)離子模式分析的11種獸藥總離子流圖見圖1b。

圖1 (a)正離子模式分析114種獸藥和(b)負(fù)離子模式分析11種獸藥的總離子流圖Fig．1 Total ion chromatograms of(a)the 114 veterinary drugs in positive ion mode and(b)the 11 veterinary drugs in negative ion mode

2 結(jié)果與討論

2．1 流動(dòng)相的選擇

選擇ZORBHX C18為分析柱，選取0.1%(v/v)甲酸水溶液-0.1%(v/v)甲酸甲醇、0.2%(v/v)甲酸水溶液-0.2%(v/v)甲酸甲醇、1 mmol/L NH4F水溶液-甲醇、1 mmol/L NH4F水溶液-甲酸-甲醇為流動(dòng)相，考察4種流動(dòng)相對(duì)125種化合物色譜行為、靈敏度的影響。結(jié)果表明，以正離子模式分析獸藥化合物時(shí)，在甲酸水溶液-甲酸甲醇體系中，隨著酸度的增加，四環(huán)素類、喹諾酮類化合物色譜峰峰形得到改善;但大多數(shù)的雄激素、孕激素和糖皮質(zhì)醇激素類化合物的靈敏度降低了5%～50%。1 mmol/L NH4F水溶液-甲醇體系會(huì)使絕大多數(shù)化合物的靈敏度提高0.5～2倍，但四環(huán)素類、喹諾酮類化合物的色譜峰峰型較寬，且明顯前伸;在1 mmol/L NH4F水溶液-甲醇中加入甲酸，四環(huán)素類、喹諾酮類化合物峰形比溶液-甲醇體系明顯改善，峰寬變窄，峰形對(duì)稱，所有化合物的靈敏度都滿足本方法分析的要求。因此，選擇NH4F水溶液-甲酸-甲醇體系作為正離子模式分析獸藥化合物的流動(dòng)相體系，再對(duì)此流動(dòng)相進(jìn)行優(yōu)化，最終選定0.5 mmol/L NH4F+0.1%(v/v)甲酸水和0.1%(v/v)甲酸甲醇為流動(dòng)相。對(duì)負(fù)離子模式下分析的雌激素、氯霉素類等化合物，經(jīng)比較，NH4F水溶液-甲醇體系的靈敏度最高，因此選擇1 mmol/L NH4F水和甲醇為流動(dòng)相。其中，四環(huán)素和萘啶酸在4種流動(dòng)相中的色譜圖見圖2。

2．2 樣品前處理方法的選擇與優(yōu)化

所分析的11類獸藥化合物由于極性不同，在蛋黃和蛋清中分布不同，因此必須將兩者混合均勻。從提取溶劑的優(yōu)化、EDTA緩沖溶液對(duì)四環(huán)素類和喹諾酮類獸藥萃取率的影響、QuEChERS結(jié)合冷凍脂質(zhì)過(guò)濾凈化法對(duì)降低基質(zhì)效應(yīng)的作用等方面進(jìn)行了研究?？疾斓姆绞绞?對(duì)空白雞蛋進(jìn)行獸藥加標(biāo)回收試驗(yàn)，磺胺類加標(biāo)量為25 μg/kg，四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類加標(biāo)量為250 μg/kg，其余喹諾酮類、激素類(雄激素、孕激素、糖皮質(zhì)醇激素、雌激素)、氯霉素類、硝基咪唑類和苯并咪唑類獸藥加標(biāo)量為50 μg/kg，外標(biāo)法計(jì)算加標(biāo)回收率，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)和基質(zhì)效應(yīng)(ME)。

圖2 四環(huán)素和萘啶酸在4種流動(dòng)相體系中的色譜圖Fig．2 Chromatograms of tetracycline and nalidic acid in four mobile phase systems

2．2．1 提取溶劑的選擇

2．2．1．1 提取溶劑的初步優(yōu)化

雞蛋中獸藥多殘留分析所選用的溶劑包括乙腈-水-緩沖液、乙腈-水-酸、甲醇-水-酸等溶劑，根據(jù)文獻(xiàn)［16－19］選取了乙腈-水(70 ∶30，v/v)、乙腈-水-甲酸(70 ∶30∶1，v/v/v)、甲醇-水(70 ∶30，v/v)、甲醇-水-甲酸(70∶30∶1，v/v/v)4種溶劑作為提取溶劑。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，采用甲醇-水(70∶30，v/v)和甲醇-水-甲酸(70 ∶30 ∶1，v/v/v)為提取溶劑時(shí)，雞蛋中的蛋白質(zhì)沉淀物松散，離心后傾出上清液時(shí)，沉淀物極易帶出，且－20℃低溫下冷凍提取液2 h后，脂類物質(zhì)難被析出。因此選擇乙腈-水(70∶30，v/v)和乙腈-水-甲酸(70∶30∶1，v/v/v)作為提取溶劑，計(jì)算空白雞蛋加標(biāo)回收率、RSD和ME。

結(jié)果顯示，對(duì)多數(shù)磺胺類獸藥來(lái)說(shuō)，以乙腈-水(70∶30，v/v)為提取溶劑時(shí)的加標(biāo)回收率比乙腈-水-甲酸(70∶30∶1，v/v/v)時(shí)高 10%～20%;6 種苯基咪唑類獸藥中，阿苯達(dá)唑亞砜在乙腈-水(70∶30，v/v)和乙腈-水-甲酸(70∶30∶1，v/v/v)為提取溶劑時(shí)的加標(biāo)回收率分別為98%和80%，其余5種苯基咪唑類獸藥在兩種提取溶劑中的回收率相當(dāng);9種孕激素獸藥中，孕酮在乙腈-水(70∶30，v/v)和乙腈-水-甲酸(70∶30∶1，v/v/v)中的加標(biāo)回收率分別為90.4%和62%，其余8種獸藥在兩種提取溶劑中的回收率差異不大;14種皮質(zhì)醇激素中，除曲安西龍?jiān)谝译?水(70∶30，v/v)和乙腈-水-甲酸(70 ∶30 ∶1，v/v/v)中的加標(biāo)回收率分別為73%和51%外，其余13種獸藥的回收率相當(dāng);7種雌激素以乙腈-水(70∶30，v/v)為提取溶劑時(shí)，雙烯雌酚、己烯雌酚和己烷雌酚的加標(biāo)回收率在61%～69%之間，乙腈-水-甲酸(70∶30∶1，v/v/v)的加標(biāo)回收率在14.7%～44.7%之間，其他4種雌激素在兩種提取溶劑中的回收率在66.4%～104.0%之間;喹諾酮類獸藥以乙腈-水(70∶30，v/v)為提取溶劑時(shí)，6種喹諾酮的加標(biāo)回收率在41%～58%之間，7種喹諾酮的加標(biāo)回收率在66%～83%之間，6種喹諾酮的加標(biāo)回收率在107%～122%之間，而以乙腈-水-甲酸(70∶30∶1，v/v/v)為提取溶劑時(shí)，19種喹諾酮的加標(biāo)回收率在60%～89%之間。采用乙腈:水(70∶30，v/v)為喹諾酮類提取溶劑的最大問(wèn)題是基質(zhì)效應(yīng)明顯增強(qiáng)，有10種喹諾酮類獸藥(洛美沙星、吡哌酸、二氟沙星、培氟沙星、甲磺酸達(dá)氟沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、麻保沙星、氟羅沙星、沙拉沙星)的基質(zhì)效應(yīng)在24.9%～99.7%之間。四環(huán)素類獸藥在兩種提取溶劑中的回收率均較低(＜25%)，且基質(zhì)效應(yīng)較高;其他16種硝基咪唑類、4種氯霉素類、14種雄激素類、8種大環(huán)內(nèi)酯類獸藥在兩種提取溶劑中的加標(biāo)回收率基本相當(dāng);但以乙腈-水(70∶30，v/v)為提取溶劑時(shí)，紅霉素的基質(zhì)效應(yīng)為112%，是乙腈-水-甲酸(70∶30∶1，v/v/v)中基質(zhì)效應(yīng)的3倍。11類獸藥在兩種提取溶劑下的加標(biāo)回收率范圍、RSD和ME范圍見表2。

表2 兩種提取溶劑下11類獸藥的加標(biāo)回收率、RSD(n=3)和基質(zhì)效應(yīng)Table 2 Recoveries，RSDs(n=3)and the matrix effects(MEs)of the 11 veterinary drugs with two extraction solvents

2．2．1．2 EDTA 溶液對(duì)四環(huán)素類、喹諾酮類、紅霉素、雌激素類獸藥提取率的影響

乙腈-水(70 ∶30，v/v)和乙腈-水-甲酸(70 ∶30 ∶1，v/v/v)兩種提取溶劑對(duì)四環(huán)素類獸藥的提取率極低，是由于四環(huán)素類獸藥與雞蛋樣品中含有的金屬離子和蛋白質(zhì)相結(jié)合而造成的。因此，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［16－17］，在兩種提取液中分別加入 0.1 mL 0.1 mol/L EDTA溶液和0.4 mL 0.1 mol/L EDTA溶液，使金屬離子與EDTA溶液結(jié)合，從而使四環(huán)素類獸藥解離，同時(shí)也考察加入0.1 mol/L EDTA溶液對(duì)喹諾酮類、雌激素類獸藥和紅霉素提取率以及基質(zhì)效應(yīng)的影響。

結(jié)果表明，對(duì)于乙腈-水(70∶30，v/v)提取液，隨著EDTA的增加，四環(huán)素類和喹諾酮類獸藥回收率明顯提高，四環(huán)素類獸藥的回收率＞60%，RSD＜10%，但基質(zhì)效應(yīng)仍很高，在284%～723%之間;喹諾酮類獸藥的回收率＞70%，RSD＜10%，基質(zhì)效應(yīng)有不同程度的下降，如氟羅沙星從添加EDTA溶液前的99.7%降至58.9%;雙烯雌酚、己烯雌酚和己烷雌酚加入EDTA溶液后，加標(biāo)回收率無(wú)明顯變化;紅霉素的基質(zhì)效應(yīng)在加入EDTA溶液后沒(méi)有任何改善。

對(duì)于乙腈-水-甲酸(70 ∶30 ∶1，v/v/v)提取液，加入0.1 mL和0.4 mL的0.1 mol/L EDTA溶液后，四環(huán)素類獸藥的回收率與乙腈-水(70∶30，v/v)時(shí)相當(dāng)，且隨著0.1 mol/L EDTA溶液量的增加，基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)明顯提高到＞200%;喹諾酮類獸藥隨著EDTA溶液量的增加，回收率無(wú)明顯變化;雙烯雌酚在加入EDTA溶液后的回收率由17%提升到44%;己烯雌酚的回收率由15%提升到30%，但己烷雌酚的加標(biāo)回收率沒(méi)有改善，仍為44%左右。

綜合比較兩種提取溶劑及加入EDTA溶液后11類125種獸藥的加標(biāo)回收率、RSD和ME，選定乙腈-水(70∶30，v/v)加入 0.4 mL 0.1 mol/L EDTA溶液為最優(yōu)的提取溶劑。喹諾酮類獸藥、四環(huán)素類獸藥、紅霉素的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)較高，說(shuō)明提取液中仍含有脂肪酸、磷脂等干擾物質(zhì)，需進(jìn)一步凈化。加入EDTA溶液后四環(huán)素類(250 μg/kg)的加標(biāo)回收率、RSD(n=3)、ME 見表3。在乙腈-水(70 ∶30，v/v)提取液中，喹諾酮類獸藥在加入EDTA溶液后加標(biāo)回收率的變化情況見圖3。

表3 兩種提取溶劑中加入EDTA溶液(0.1 mol/L)后四環(huán)素類獸藥(250 μg/kg)的加標(biāo)回收率、RSD(n=3)和基質(zhì)效應(yīng)Table 3 Recoveries，RSDs(n=3)and MEs of tetracycline(250 μg/kg)after EDTA solution(0.1 mol/L)added in two extraction solvents

圖3 提取液中加入不同體積0.1 mol/L EDTA溶液對(duì)喹諾酮類獸藥(50 μg/kg)回收率的影響Fig．3 Effect of added volume of 0.1 mol/L EDTA solution on the recoveries of quinolones(50 μg/kg)

2．2．2 QuEChERS 方法的優(yōu)化

乙腈-水(70∶30，v/v)提取液經(jīng) QuEChERS 凈化之前，在－20℃下冷凍2 h，可明顯觀察到底層溶液有沉淀析出(冷凍脂質(zhì)過(guò)濾凈化)，離心后將上層溶液再經(jīng)DSPE方法凈化，能顯著降低基質(zhì)效應(yīng)的影響。本研究比較了C18粉和DSPE混合凈化劑(50 mg PSA+50 mg C18+250 mg NA2SO4)對(duì)降低四環(huán)素類、喹諾酮類、紅霉素等獸藥基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)的影響。結(jié)果顯示，采用混合凈化劑凈化后，喹諾酮類獸藥的基質(zhì)效應(yīng)＜15%，紅霉素基質(zhì)效應(yīng)由112%降至38%，四環(huán)素類獸藥基質(zhì)效應(yīng)＜20%。11類125種獸藥中，吡哌酸的回收率為65%，17b-羥基雄烷-3-酮回收率為61%，美雄諾龍回收率為65%，四環(huán)素類獸藥回收率在60%～76%之間，其他類獸藥回收率在86%～119%之間，基質(zhì)效應(yīng)在－14.1%～20%之間，RSD在0.3%～14%之間。

因此，本方法最終選擇乙腈-水(70∶30，v/v)為提取溶劑，加入0.4 mL 0.1 mol/L EDTA溶液，渦旋提取5 min，離心后上清液在－20℃下冷凍2 h，上清液再用DSPE混合凈化劑(50 mg PSA+50 mg C18+250 mg Na2SO4)凈化，將凈化液稀釋3倍后用UHPLC-MS/MS分析，125種獸藥的回收率、RSD、基質(zhì)效應(yīng)均獲得滿意的結(jié)果。

2．3 方法的線性關(guān)系、定量限、準(zhǔn)確度和精密度

125種獸藥在各自的線性范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.993～0.999。以信噪比≥10確定方法的定量限(LOQ)，硝基咪唑類和苯基咪唑類的LOQ在2～5 μg/kg之間;除磺胺氯噠嗪的LOQ為5 μg/kg外，其余磺胺類的LOQ均為2 μg/kg;喹諾酮類的LOQ在5～25 μg/kg之間;大環(huán)內(nèi)酯類除水合白霉素的LOQ為60 μg/kg、紅霉素的 LOQ 為 20 μg/kg，其他大環(huán)內(nèi)酯類獸藥的LOQ均為10 μg/kg;四環(huán)素類的LOQ在10～20 μg/kg之間;氯霉素類除氟苯尼考的LOQ為10 μg/kg，其他3種獸藥的 LOQ 均為5 μg/kg;雄激素類和糖皮質(zhì)醇激素類的LOQ在5～20 μg/kg之間;孕激素類和雌激素類的LOQ在5～10 μg/kg之間。

按獸藥在LOQ、2倍LOQ、5倍LOQ 3個(gè)水平做加標(biāo)回收率試驗(yàn)，每個(gè)水平做5個(gè)平行樣品，125種獸藥在雞蛋中的平均回收率和RSD見表4。由表4可以看出，125種獸藥在雞蛋中的平均回收率在60.4%～119.3%之間，RSD在0.3%～16.1%之間，符合多殘留分析的要求。

表4 (續(xù))Table 4 (Continued)

表4 (續(xù))Table 4 (Continued)

2．4 實(shí)際樣品的測(cè)定

于天津和北京的超市和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采集83份雞蛋、9份鴨蛋、6份鵝蛋，用構(gòu)建的方法測(cè)定98份蛋類樣品中的125種獸藥。檢測(cè)結(jié)果顯示，3份樣品中檢出氟苯尼考和氟苯尼考胺，殘留量分別在34.4～112.4 μg/kg和 6.5～30.9 μg/kg 之間;4 份樣品中檢出甲硝唑(6.5～60.5 μg/kg);9份樣品中檢出甲硝唑代謝產(chǎn)物(10.3～368.3 μg/kg);4份樣品中檢出甲氧芐啶(5.0～33.4 μg/kg);3份樣品中檢出磺胺氯吡嗪(3.8～91.0 μg/kg);1份樣品中檢出林可霉素(16.5 μg/kg);1份樣品中檢出氧氟沙星(76.9 μg/kg)。

3 結(jié)論

本研究建立了11類共125種獸藥的冷凍脂質(zhì)過(guò)濾結(jié)合QuEChERS凈化的樣品前處理和UHPLCMS/MS高通量檢測(cè)方法，與國(guó)標(biāo)方法相比，縮短了檢測(cè)周期，節(jié)約了檢測(cè)成本。該方法操作簡(jiǎn)便、快速，凈化效果好，靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均符合多殘留檢測(cè)技術(shù)的要求，為各食品檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供了雞蛋樣品中禁限用獸藥日常監(jiān)控的篩選方法。