綿羊瑞香狼毒中毒病理組織學(xué)觀察

王興桂，莫重輝

(1.青海省湟中縣畜牧獸醫(yī)工作站，青海湟中 811600；2.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海西寧 810016)

瑞香狼毒(Stellera chamaejasme)為瑞香科(Thymelaeaceae)狼毒屬(Stellera)有毒植物，在我國廣泛分布于西北、西南、東北、華北各省[1]。由于瑞香狼毒具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力和再生能力，目前已成為天然草原上的優(yōu)勢種，有些草原上瑞香狼毒優(yōu)勢度達(dá)72.77%，對(duì)草地生態(tài)和畜牧業(yè)造成嚴(yán)重危害[2]。許多學(xué)者認(rèn)為，瑞香狼毒主要有毒成分為異狼毒素、狼毒素、新狼毒素、甲基狼毒素等黃酮類化合物[3-7]。由于瑞香狼毒全株有毒，且成株莖葉中含有萜類成分，家畜一般不采食，但在早春放牧?xí)r，家畜由于處于饑餓狀態(tài)或貪青而誤食引起中毒。家畜瑞香狼毒中毒后表現(xiàn)為嘔吐，腹瀉，糞便帶血，臥地不起，全身痙攣，嚴(yán)重時(shí)虛脫或驚厥而死亡，母畜可導(dǎo)致流產(chǎn)[8-9]。陳永輝等[10]報(bào)道了綿羊瑞香狼毒中毒病例，但瑞香狼毒對(duì)羊毒性的研究報(bào)道較少，特別是瑞香狼毒中毒羊病理組織學(xué)觀察尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)進(jìn)行了不同劑量瑞香狼毒對(duì)試驗(yàn)羊病理組織學(xué)觀察，以期為羊瑞香狼毒中毒機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 瑞香狼毒 采集于青海省湟中縣土門關(guān)鄉(xiāng)，正值瑞香狼毒盛花期，陰干粉碎。

1.1.2 試驗(yàn)用動(dòng)物 臨床健康試驗(yàn)羊8 只，購于自由市場，雌雄兼有。臨床觀察1周，確認(rèn)臨床健康后手術(shù)植入永久性瘤胃瘺管，待傷口痊愈后進(jìn)行編號(hào)，隨機(jī)分為瑞香狼毒低劑量組和高劑量組。

1.1 方法

1.2.1 攻毒 試驗(yàn)前所有試驗(yàn)綿羊空腹稱重定為原始體重，每天清晨空腹，高劑量和低劑量組分別按2.5 g/kg體重和5 g/kg體重的劑量經(jīng)瘤胃瘺管一次投服，然后使其自由采食青干草和自由飲水。每天觀察試驗(yàn)羊飲食、精神狀態(tài)、運(yùn)動(dòng)情況、中毒癥狀及中毒癥狀出現(xiàn)的時(shí)間。連續(xù)飼喂32 d停止投服瑞香狼毒粉，

1.2.2 病理組織學(xué)觀察 連續(xù)投服瑞香狼毒粉32 d后，每組挑選2只中毒癥狀明顯的試驗(yàn)羊進(jìn)行剖檢，觀察病理變化，同時(shí)采集心、肝、肺、腎、淋巴結(jié)、大腦、胃腸等組織，HE染色石蠟包埋，光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。

2 結(jié)果

2.1 臨床觀察結(jié)果

所有試驗(yàn)羊在試驗(yàn)期間食欲正常，飲水量增加，試驗(yàn)第18天試驗(yàn)羊出現(xiàn)不同程度的腹瀉癥狀，高劑量組試驗(yàn)羊腹瀉較嚴(yán)重，糞便稀軟不成形，試驗(yàn)第19天和第23天，低劑量組和高劑量組分別死亡1只試驗(yàn)羊，試驗(yàn)第32天停止投服瑞香狼毒粉后，所有試驗(yàn)羊逐漸停止腹瀉，精神好轉(zhuǎn)。

2.2 試驗(yàn)羊剖檢變化

兩組試驗(yàn)羊病理變化基本相同，試驗(yàn)羊極度消瘦，腹腔有清亮腹水；胃腸表面黃染，瘤胃壁薄，真胃黏膜出血，瓣胃黏膜脫落，腸壁充血，腸臌氣；肺氣腫；心包有清亮的積液，心室血凝不良，心房肥大；脾臟稍腫大，邊緣變薄，質(zhì)地柔軟，切面呈淡褐色且有顆粒狀白色突起；肝臟呈土黃色，腫大，邊緣鈍圓，質(zhì)脆易碎；腎臟腫大，皮質(zhì)部較薄。

2.3 病理組織學(xué)變化

兩組試驗(yàn)羊病理組織學(xué)變化基本相似，心肌纖維變性腫脹，結(jié)構(gòu)紊亂，橫紋消失，心肌纖維間有滲出液(圖1A和圖2A)；肝細(xì)胞腫大，竇狀隙狹窄或阻塞，中央靜脈極度擴(kuò)張，無血液充盈，肝細(xì)胞顆粒變性，有色素沉積(圖1B和圖2B)；脾小梁斷裂不完整，皮質(zhì)部淋巴細(xì)胞明顯減少，髓質(zhì)部結(jié)構(gòu)疏松，有漿液性滲出和淋巴細(xì)胞的壞死(圖1C和圖2C)；肺內(nèi)細(xì)支氣管擴(kuò)張，血管充血明顯，肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，肺泡壁增厚，個(gè)別部位肺泡壁斷裂(圖1D和圖2D)；腎小球毛細(xì)血管上皮細(xì)胞增生明顯，腎小球明顯腫大，腎球囊間隙變窄，腎小管上皮細(xì)胞腫脹、變性，腎小管管腔狹窄或阻塞，部分腎小管上皮細(xì)胞破裂崩解，細(xì)胞核消失(圖1E和圖2E)；大腦神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，出現(xiàn)噬神經(jīng)元現(xiàn)象(圖1F和圖2F)。

A.心肌纖維變性腫脹，結(jié)構(gòu)紊亂，橫紋消失，肌纖維間有滲出液；B.肝細(xì)胞腫大，竇狀隙狹窄或阻塞，肝細(xì)胞顆粒變性，有色素沉積；C.脾小梁斷裂，皮質(zhì)部淋巴細(xì)胞減少，髓質(zhì)部結(jié)構(gòu)疏松；D.肺內(nèi)細(xì)支氣管擴(kuò)張，血管充血，肺泡壁毛細(xì)血管充血，肺泡壁增厚；E.腎小球腫大，腎球囊間隙變窄，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，變性；F.大腦神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，出現(xiàn)噬神經(jīng)元現(xiàn)象。

A.Myocardial fibrosis and swelling, disordered structure, disappearance of horizontal lines, and exudation between muscle fibers；B.Hepatocyte swelling, sinus space stenosis or obstruction, hepatocyte granulosis, pigmentation；C.Splenic trabeculae broken, lymphocytes of cortex decreased, and medullary structure loose；D.pulmonary bronchiole dilatation, vascular congestion, pulmonary alveolar capillary congestion, and thickening of alveolar wall；E.Glomerular enlargement, capsule of glomerulus space narrowing, swelling and degeneration of renal tubular epithelial cells；F.Brain nerve cell degeneration and necrosis, the appearance of neuronphagocytosis.

圖1低劑量組病理組織學(xué)變化(HE染色，40×10)

Fig.1 Histopathological lesions of low-dose group (HE,40×10)

3 討論

宋曉平等[11]報(bào)道，將提取的瑞香狼毒總黃酮給家兔按700 mg/kg體重灌胃后出現(xiàn)腹痛、腹瀉和體溫下降等癥狀,認(rèn)為瑞香狼毒中的總黃酮對(duì)家兔腸管運(yùn)動(dòng)具有明顯的抑制作用，說明家畜瑞香狼毒中毒時(shí)出現(xiàn)腹痛、腹瀉等癥狀，是由于瑞香狼毒中的有毒成分直接刺激胃腸道，造成胃腸道功能紊亂。常建軍等[12]報(bào)道，從瑞香狼毒中提取的粗黃酮類化合

A.心肌纖維變性腫脹，結(jié)構(gòu)紊亂，橫紋消失，肌纖維間有滲出液；B.肝細(xì)胞腫大，竇狀隙狹窄或阻塞，肝細(xì)胞顆粒變性，有色素沉積；C.脾小梁斷裂，皮質(zhì)部淋巴細(xì)胞減少，髓質(zhì)部結(jié)構(gòu)疏松；D.肺內(nèi)細(xì)支氣管擴(kuò)張，血管充血，肺泡壁毛細(xì)血管充血，肺泡壁增厚；E.腎小球腫大，腎球囊間隙變窄，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，變性；F.大腦神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，出現(xiàn)噬神經(jīng)元現(xiàn)象。

A.Myocardial fibrosis and swelling, disordered structure, disappearance of horizontal lines, and exudation between muscle fibers；B.Hepatocyte swelling, sinus space stenosis or obstruction, hepatocyte granulosis, pigmentation；C.Splenic trabeculae broken, lymphocytes of cortex decreased, and medullary structure loose；D. Pulmonary bronchiole dilatation, vascular congestion, pulmonary alveolar capillary congestion, and thickening of alveolar wall；E.Glomerular enlargement, capsule of glomerulus space narrowing, swelling and degeneration of renal tubular epithelial cells；F.Brain nerve cell degeneration and necrosis, the appearance of neuronphagocytosis.

圖2高劑量組病理組織學(xué)變化(HE染色，40×10)

Fig.2 Histopathological lesions of high-dose group (HE,40×10)

物，給試驗(yàn)家兔灌服后，表現(xiàn)精神沉郁，不愿運(yùn)動(dòng)，喜臥，腹瀉等癥狀，最后因呼吸衰竭而死亡。沈明華等[13]研究了狼毒對(duì)試驗(yàn)綿羊的毒性，結(jié)果表明瑞香狼毒對(duì)綿羊具有一定的毒性作用。從本研究試驗(yàn)羊臨床表現(xiàn)來看，每天分別按2.5 g/kg體重和5 g/kg體重的劑量給試驗(yàn)羊投服瑞香狼毒后，所有試驗(yàn)羊在試驗(yàn)期間出現(xiàn)飲水量增加和腹瀉等癥狀，且高劑量組試驗(yàn)羊腹瀉較為嚴(yán)重，最后出現(xiàn)神經(jīng)癥狀而死亡，與上述學(xué)者報(bào)道的臨床癥狀相似，說明瑞香狼毒總黃酮是引起試驗(yàn)羊瑞香狼毒中毒的主要有毒成分，而且隨著劑量的增加而中毒癥狀加重。

常建軍等[12]報(bào)道，給家兔灌服瑞香狼毒粗黃酮類化合物后，胃腸、心、肝、脾、腎等實(shí)質(zhì)器官均有不同程度的損傷。本試驗(yàn)中試驗(yàn)羊剖檢變化主要表現(xiàn)為極度消瘦，腸壁充血，胃壁薄，黏膜脫落、出血，肺氣腫，心室血凝不良，肝邊緣變鈍，質(zhì)脆易碎，腎腫大，皮質(zhì)部變薄等病理變化，與常建軍等報(bào)道的試驗(yàn)家兔病理變化相似，說明瑞香狼毒主要有毒成分對(duì)試驗(yàn)羊胃腸、心、肝、脾、肺、腎等臟器也具有一定的毒性作用。

當(dāng)心肌受損時(shí)，心肌收縮力減弱或心力衰竭，全身血液回流受阻，各組織器官內(nèi)的血管擴(kuò)張，造成胃腸道、肝、肺、腎等臟器淤血。特別是肺淤血，使肺泡擴(kuò)張，導(dǎo)致呼吸功能障礙，各組織器官缺氧，加劇血管擴(kuò)張和淤血，促進(jìn)心力衰竭[14]。肝臟是動(dòng)物機(jī)體的主要解毒器官，動(dòng)物機(jī)體在代謝過程中產(chǎn)生的氨在肝臟內(nèi)代謝成尿素排出體外[15]。因此，當(dāng)瑞香狼毒中有毒成分進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后，對(duì)心肌具有一定的損傷作用，導(dǎo)致各臟器淤血，同時(shí)在肝臟解毒和腎臟排泄時(shí)，對(duì)肝臟和腎臟也有一定的損傷作用。病理組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，兩組試驗(yàn)羊心肌纖維均出現(xiàn)腫脹、變性，結(jié)構(gòu)紊亂，橫紋消失等變化；肺主要表現(xiàn)為細(xì)支氣管擴(kuò)張，肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張充血等現(xiàn)象；腎小球明顯腫大，腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生明顯，腎球囊間隙變窄，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，變性，腎小管管腔狹窄或阻塞，部分腎小管上皮細(xì)胞破裂崩解，細(xì)胞核消失；肝細(xì)胞腫大，竇狀隙狹窄或阻塞，中央靜脈極度擴(kuò)張，肝細(xì)胞顆粒變性，有色素沉積；大腦血管充血明顯，局部有出血，神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，出現(xiàn)噬神經(jīng)元現(xiàn)象，說明給試驗(yàn)羊投服瑞香狼毒時(shí)，瑞香狼毒中有毒成分對(duì)心、肺、肝、腎和神經(jīng)系統(tǒng)具有明顯的損傷作用，從而在臨床上出現(xiàn)瑞香狼毒中毒癥狀，這與宋曉平等[11]的報(bào)道相似。