埃博拉疫苗臨床試驗(yàn)研究進(jìn)展

張 哲，侯利華

1 埃博拉病毒

埃博拉病毒屬于絲狀病毒科，為單股負(fù)鏈RNA病毒，病毒顆粒直徑約80 nm，外有包膜。埃博拉病毒是引發(fā)埃博拉病毒?。‥bola virus disease, EVD）的主要病原體，主要分為扎伊爾型（Zaire）、蘇丹型（Sudan）、本迪布焦型（Bundibugyo）、塔伊森林型（Tay forest）和萊斯頓型（Reston）5種亞型[1]。該病毒在感染后會(huì)有3～21 d的初始潛伏期，隨后迅速出現(xiàn)發(fā)燒、頭痛、肌肉酸痛、腹瀉、嘔吐等癥狀，絕大多數(shù)患者最終會(huì)因多器官衰竭、出血、休克而死亡，死亡率高達(dá)50%～90%[2]。埃博拉病毒是一種極度危險(xiǎn)的急性出血熱病毒。

2 埃博拉病毒病疫情

EVD疫情首次暴發(fā)于1976年剛果民主共和國(guó)（前扎伊爾），隨后在蘇丹、剛果共和國(guó)、加蓬、烏干達(dá)等非洲國(guó)家均有暴發(fā)，規(guī)模不一[3-4]。2014年，西非EVD疫情大規(guī)模暴發(fā)后，埃博拉病毒成為了全球的關(guān)注重點(diǎn)[5]。2017—2018年，剛果民主共和國(guó)先后又暴發(fā)2次EVD。截至2018年8月30日，該國(guó)EVD疫情仍未解除。

3 埃博拉疫苗

埃博拉疫苗是防止EVD傳播的有效手段。在設(shè)計(jì)疫苗時(shí)，通常以產(chǎn)生足夠保護(hù)效果的體液免疫和細(xì)胞免疫為目標(biāo)，經(jīng)過(guò)動(dòng)物模型的驗(yàn)證后，再進(jìn)行臨床試驗(yàn)。對(duì)于埃博拉病毒而言，包膜糖蛋白（glycoprotein, GP）在其感染和致病中具有關(guān)鍵作用，能被宿主細(xì)胞強(qiáng)烈識(shí)別。因此，現(xiàn)階段埃博拉疫苗的設(shè)計(jì)均是圍繞GP開展的，臨床評(píng)價(jià)中最常用的指標(biāo)為GP特異性抗體水平。1980年，首個(gè)滅活埃博拉疫苗被證明能夠在豚鼠模型中實(shí)現(xiàn)免疫保護(hù)，但是這類疫苗在非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物攻毒實(shí)驗(yàn)中并沒有展現(xiàn)出較好的保護(hù)效果[6]。隨著EVD疫情的頻發(fā)及其規(guī)模的增大，越來(lái)越多的力量投入到埃博拉疫苗的研發(fā)工作中。截至目前，共有幾十余種埃博拉疫苗進(jìn)入臨床前研究或臨床研究階段，主要類型包括DNA疫苗、蛋白疫苗、病毒樣顆粒疫苗、復(fù)制子疫苗、復(fù)制缺陷型疫苗、重組病毒載體疫苗等[7-10]。重組病毒載體疫苗又分復(fù)制型和非復(fù)制型。目前，DNA疫苗、蛋白疫苗和重組病毒載體疫苗均已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

3.1 DNA疫苗 DNA疫苗通常是表達(dá)免疫原性抗原的質(zhì)粒，具有易于開發(fā)，生產(chǎn)成本低，幾乎沒有感染風(fēng)險(xiǎn)的優(yōu)點(diǎn)。美國(guó)國(guó)家過(guò)敏和傳染病研究所研發(fā)的DNA疫苗編碼3種已知亞型的埃博拉病毒的蛋白質(zhì)粒：Sudan型GP、核蛋白（nuclear protein, NP）和Zaire型GP，在2002年底開展I期臨床試驗(yàn)[11]。結(jié)果表明，20名接種疫苗的受試者均產(chǎn)生了至少針對(duì)1種蛋白的特異性抗體，其中有6名受試者產(chǎn)生了GP特異的CD8+T細(xì)胞反應(yīng)。2008—2012年，該團(tuán)隊(duì)又陸續(xù)開展了新改進(jìn)DNA疫苗的I期和Ib期臨床試驗(yàn)，以檢驗(yàn)其安全性和免疫原性[12-13]。在美國(guó)開展的I期臨床試驗(yàn)中，2組受試者分別接受了馬爾堡疫苗和埃博拉疫苗；而在烏干達(dá)開展的Ib期臨床試驗(yàn)則設(shè)置了3個(gè)試驗(yàn)組，分別為馬爾堡疫苗組，埃博拉疫苗組和同時(shí)免疫的二聯(lián)疫苗組。兩個(gè)臨床試驗(yàn)結(jié)果均表明該DNA疫苗具有較好的安全性，并且能使部分疫苗接種者產(chǎn)生抗原特異性的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。2015年，Inovio制藥公司和GeneOne Life Science公司合作開發(fā)的埃博拉疫苗INO-4212（包含編碼先前病毒株序列INO-4201和當(dāng)前病毒株序列INO-4202兩種成分）進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)（NCT02464670），在比較肌肉接種和皮膚接種的免疫效果的同時(shí)，還考察INO-9012（含IL-12 DNA序列）免疫刺激物的作用，但目前尚未見到相關(guān)研究結(jié)果的報(bào)道。盡管如此，DNA疫苗免疫程序復(fù)雜，效率相對(duì)較低，免疫原性弱等缺點(diǎn)，使其難以在大規(guī)模人群緊急預(yù)防接種中充分發(fā)揮作用。

3.2 蛋白疫苗 美國(guó)NOVAVAX公司根據(jù)Makona病毒株序列，研發(fā)了重組埃博拉病毒GP納米疫苗（Ebola GP Vaccine）。2015年7月，該公司公布了I期臨床試驗(yàn)結(jié)果[14]。該試驗(yàn)以遞增劑量使用或不使用Matrix-M佐劑，受試者接受1次或2次肌肉注射，并在免疫后28 d和35 d評(píng)價(jià)免疫反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)果初步證明該疫苗配合Matrix-M佐劑具有較好的免疫原性和耐受性。

3.3 非復(fù)制型病毒載體疫苗 重組病毒載體疫苗的優(yōu)勢(shì)在于能夠快速表達(dá)目的抗原，激發(fā)較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。大部分病毒載體埃博拉疫苗表達(dá)的都是埃博拉病毒的GP。目前，已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的非復(fù)制型病毒載體埃博拉疫苗包括改良安卡拉載體埃博拉疫苗（MVA-BN Filo）、非復(fù)制型人26型腺病毒載體埃博拉疫苗（Ad26-ZEBOV）、復(fù)制缺陷型黑猩猩3型腺病毒載體埃博拉疫苗（ChAd3-EBO-Z）、復(fù)制缺陷型人5型腺病毒載體埃博拉疫苗（Ad5-EBOV）和埃博拉病毒病聯(lián)合載體疫苗（GamEvac-Combi）。其中Ad5-EBOV（中國(guó)）和GamEvac-Combi（俄羅斯）已經(jīng)獲批在本國(guó)注冊(cè)。

3.3.1 MVA-BN Filo MVA-BN Filo由丹麥生物制藥公司Bavarian Nordic與美國(guó)國(guó)家過(guò)敏與傳染病研究所共同研發(fā)生產(chǎn)。該疫苗以改良痘病毒為載體，同時(shí)表達(dá)馬爾堡病毒、Zaire型和Sudan型埃博拉病毒的GP以及Tay forest型埃博拉病毒的NP，被用作其他埃博拉疫苗接種后的異源加強(qiáng)免疫，能夠有效延長(zhǎng)免疫反應(yīng)的持續(xù)性。

3.3.2 Ad26-ZEBOV Ad26-ZEBOV由美國(guó)強(qiáng)生公司旗下制藥公司Janssen研制。在一項(xiàng)臨床前研究中，研究者對(duì)利用MVA-BN Filo與Ad26-ZEBOV以初免-加強(qiáng)免疫的方式進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)了較好的免疫效果，并由此展開合作推進(jìn)疫苗開發(fā)的計(jì)劃。2016年4月，Milligan等[15]在美國(guó)醫(yī)學(xué)會(huì)雜志上發(fā)表了Ad26-ZEBOV首次免疫和MVA-BN Filo加強(qiáng)免疫的I期臨床試驗(yàn)結(jié)果。該臨床試驗(yàn)將87名受試者分為5組：2組分別在免疫Ad26-ZEBOV的28、56 d后進(jìn)行MVA-BN Filo加強(qiáng)免疫；2組分別在免疫M(jìn)VABN Filo的28、56 d后進(jìn)行Ad26-ZEBOV加強(qiáng)免疫；1組為開放組，在免疫M(jìn)VA-BN Filo的14 d后進(jìn)行Ad26-ZEBOV加強(qiáng)免疫。研究結(jié)果表明，采用Ad26-ZEBOV初免和MVA-BN Filo加強(qiáng)免疫的方案能獲得較好的免疫效果。采用該接種方案加強(qiáng)免疫8個(gè)月后，所有接種疫苗的受試者體內(nèi)抗體仍然維持在高水平。

3.3.3 ChAd3-EBO-Z ChAd3-EBO-Z由美國(guó)國(guó)家過(guò)敏與傳染病研究所研制，英國(guó)制藥企業(yè)葛蘭素史克公司合作開發(fā)。目前已經(jīng)完成10余項(xiàng)I、II期臨床試驗(yàn)研究。2014年9—11月，該疫苗陸續(xù)在美國(guó)、英國(guó)、馬里和瑞士開展臨床試驗(yàn)項(xiàng)目[16-19]。在美國(guó)開展的首個(gè)I期臨床試驗(yàn)探究了不同劑量的ChAd3-EBO-Z（2.0×1010vp和2.0×1011vp）的安全性和免疫原性，結(jié)果表明疫苗接種產(chǎn)生的免疫應(yīng)答具有劑量依賴性，且以2×1011vp劑量免疫后產(chǎn)生的GP抗體水平處于已報(bào)道的非人靈長(zhǎng)類實(shí)驗(yàn)中疫苗誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫范圍內(nèi)[16]。在隨后的臨床試驗(yàn)中，研究團(tuán)隊(duì)對(duì)該疫苗的更多劑量以及采用MVA-BN Filo疫苗加強(qiáng)免疫策略的效果進(jìn)行探索[19]。結(jié)果表明，異源加強(qiáng)免疫策略可以提高體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，并且延長(zhǎng)免疫應(yīng)答的持久性。2015年1月，原計(jì)劃在利比里亞開展的III期臨床試驗(yàn)由于招募人數(shù)不足，更改為擴(kuò)大的II期臨床方案。試驗(yàn)結(jié)果表明，疫苗接種12個(gè)月后抗體水平仍能基本維持[20]。

3.3.4 Ad5-EBOV Ad5-EBOV由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)研究院生物工程研究所和康希諾生物股份公司共同研發(fā)。疫苗的載體為復(fù)制缺陷型人5型腺病毒，表達(dá)2014型Zaire-Makona GP，疫苗劑型為凍干粉劑，其首個(gè)臨床試驗(yàn)于2014年在江蘇泰州開展[21]。120名受試者按照1∶1∶1的比例隨機(jī)分至低劑量組（4.0×1010vp）、高劑量組（1.6×1011vp）及安慰劑組，接種后半年進(jìn)行同源加強(qiáng)免疫，并繼續(xù)觀察1年[22]。研究結(jié)果表明，1.6×1011vp Ad5-EBOV單針接種能在免疫后14 d激發(fā)水平較高的特異性體液和細(xì)胞免疫。加強(qiáng)免疫后誘導(dǎo)產(chǎn)生的體液免疫反應(yīng)，其水平要高于初次免疫，這種差異在高劑量組中更加明顯。加強(qiáng)免疫12個(gè)月后，高、低劑量組的抗體水平仍然維持在相對(duì)較高的水平。2015年3月，該團(tuán)隊(duì)開展了針對(duì)在華非洲人群的I期臨床試驗(yàn)，設(shè)置8.0×1010vp 和1.6×1011vp 2個(gè)劑量組，該劑量下疫苗在非洲人群中表現(xiàn)出較好的安全性和免疫原性[23]。同年10月，Ad5-EBOV塞拉利昂II期臨床試驗(yàn)正式開展，共招募受試者500名，按一定比例隨機(jī)分至低劑量組（8.0×1010vp）、高劑量組（1.6×1011vp）和安慰劑組[24]。臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，Ad5-EBOV對(duì)于塞拉利昂健康成年人不僅安全，而且具有高度的免疫原性。同時(shí)，8.0×1010vp也是免疫的最佳劑量。

3.3.5 GamEvac-Combi 由俄羅斯研制的GamEvac-Combi是一種聯(lián)合疫苗，表達(dá)埃博拉病毒Makona GP的重組水皰性口炎病毒減毒株（VSV-GP）和復(fù)制缺陷型人5型腺病毒（Ad5-GP）。該疫苗目前完成一項(xiàng)I/II期合并進(jìn)行的臨床試驗(yàn)[25]。在I期方案中，各有12名受試者接受VSV-GP或Ad5-GP的免疫，評(píng)價(jià)疫苗的安全性；在II期方案中，將60名受試者均分至半劑量組和全劑量組中，每組受試者在免疫VSV-GP 21 d后，進(jìn)行Ad5-GP免疫。臨床試驗(yàn)為GamEvac-Combi的安全性和免疫原性提供了較好的數(shù)據(jù)支持。該疫苗目前在幾內(nèi)亞和俄羅斯開展IV期臨床試驗(yàn)，預(yù)計(jì)招募受試者人數(shù)為2000名。

3.4 復(fù)制型病毒載體疫苗 美國(guó)Profectus公司和Merck公司均開發(fā)了以水皰性口炎病毒為載體的埃博拉疫苗。前者（Rvsv N4CT1 EBOVGP1 vaccine）在2016年完成了I期臨床試驗(yàn)（NCT02718469），而后者（rVSV-ZEBOV）則是目前為止臨床試驗(yàn)進(jìn)度最快，研究數(shù)據(jù)最豐富的埃博拉疫苗，臨床試驗(yàn)情況見表1。rVSV-ZEBOV由加拿大公共衛(wèi)生署開發(fā)，授權(quán)給NewLink Genetics公司（產(chǎn)品名BPSC-1001），后者開始疫苗的初期臨床試驗(yàn)和GMP車間生產(chǎn)。隨后，又轉(zhuǎn)讓給Merck公司（產(chǎn)品名V920），從事疫苗的后期開發(fā)工作。2015年，該疫苗率先在幾內(nèi)亞完成III期臨床試驗(yàn)。2018年5月，剛果民主共和國(guó)新發(fā)EVD疫情，Merck公司先后向WHO提供疫苗共計(jì)15 000余份，實(shí)施環(huán)形接種，防止疫情進(jìn)一步擴(kuò)散。下面將從安全性、免疫原性、長(zhǎng)期有效性和整合免疫學(xué)研究方面對(duì)此疫苗展開介紹。

3.4.1 安全性 作為減毒活疫苗，rVSV-ZEBOV的安全性一直是人們關(guān)注的重點(diǎn)。2014年10—11月，該疫苗I期臨床試驗(yàn)在美國(guó)、非洲和歐洲開展，免疫劑量從3.0×103～1.0×108PFU不等[26-27]。在美國(guó)開展的臨床試驗(yàn)中，最常見的不良事件為注射部位疼痛、肌肉酸痛以及疲勞。在非洲和歐洲臨床試驗(yàn)中，免疫劑量在3.0×106PFU以上的110名受試者中有103名（94%）在免疫后3 d仍存在疫苗的病毒血癥。免疫后第2周，瑞士51名受試者中有11名（22%）發(fā)生關(guān)節(jié)炎，平均疼痛持續(xù)時(shí)間為8 d。因?yàn)檫@些不良事件，該臨床試驗(yàn)于2014年12月暫停，研究團(tuán)隊(duì)重新評(píng)估安全性。1個(gè)月后該臨床試驗(yàn)重新啟動(dòng)，招募部分受試者并將免疫劑量調(diào)整為3.0×105PFU。結(jié)果表明，降低疫苗劑量可顯著降低急性反應(yīng)，但不能避免關(guān)節(jié)炎等癥狀，且會(huì)導(dǎo)致抗體反應(yīng)水平下降[28]。同時(shí)，德國(guó)和肯尼亞臨床試驗(yàn)的40名受試者中有2名（5%）出現(xiàn)自限性疾病，并且分別在另外2名受試者的滑膜液和皮膚水泡中檢出病毒，這也證實(shí)了水皰性口炎病毒在外周組織中的傳播和復(fù)制。在另外兩項(xiàng)I期臨床試驗(yàn)中，大多數(shù)不良事件發(fā)生在接種疫苗后的第1 d，強(qiáng)度為輕度至中度，持續(xù)時(shí)間較短，并且也都在疫苗接種后觀察到了短暫、低水平、劑量依賴性的病毒血癥，沒有與疫苗或受試者退出相關(guān)的嚴(yán)重不良事件報(bào)告[30-31]。由于在所有I期臨床試驗(yàn)中均沒有與疫苗相關(guān)的嚴(yán)重不良事件報(bào)告，最終將2.0×107PFU確定為該疫苗的合適免疫劑量，隨后開展的II期和III期臨床試驗(yàn)均采用該劑量。

2015年7月，評(píng)價(jià)rVSV-ZEBOV安全性的III期臨床試驗(yàn)在美國(guó)開展[35]。1197名受試者按照2∶2∶2∶2∶1的比例隨機(jī)分至聯(lián)合批次組（3組）、高劑量組（1組）或安慰劑組（1組），分別用3批同劑量疫苗（2.0×107PFU），單批高劑量（1.0×108PFU）或安慰劑進(jìn)行接種。在接種后第1～42 d記錄每日體溫和不良事件，在接種后6個(gè)月記錄嚴(yán)重不良事件。結(jié)果表明各組觀察到發(fā)熱的比例分別為20.2%（聯(lián)合批次組）、32.2%（高劑量組）和0.8%（安慰劑組）。免疫后第1～42 d各組不良事件發(fā)生率為關(guān)節(jié)痛17.1%、20.4%和3.0%，關(guān)節(jié)炎5.1%、4.2%和0.0%，皮疹3.8%、3.8%和1.5%。共報(bào)告21例嚴(yán)重不良事件和2例死亡，經(jīng)評(píng)估均與疫苗無(wú)關(guān)。該臨床試驗(yàn)進(jìn)一步為rVSVZEBOV提供了安全性數(shù)據(jù)支持。

表1 rVSV-ZEBOV埃博拉疫苗的臨床試驗(yàn)情況Table 1 Clinical trials on rVSV-ZEBOV

3.4.2 免疫原性 美國(guó)I期臨床試驗(yàn)中，2.0×107PFU與1.0×108PFU的rVSV-EBOV免疫效果相當(dāng)，均顯著優(yōu)于3.0×106PFU[24]。利比里亞II期臨床試驗(yàn)比 較 了 2.0×107PFU rVSV-ZEBOV與2.0×1011vp Ad26-ZEBOV的免疫效果[20]。免疫后1個(gè)月，rVSVZEBOV組GP抗體幾何平均值為1000 EU/ml，陽(yáng)性率為83.7%；Ad26-ZEBOV組GP抗體幾何平均值為627 EU/ml，陽(yáng)性率為70.8%。免疫后12個(gè)月，rVSV-ZEBOV組GP抗體幾何平均值為818 EU/ml，陽(yáng)性率為79.5%；Ad26-ZEBOV組GP抗體幾何平均值為474 EU/ml，陽(yáng)性率為63.5%。這些結(jié)果表明rVSV-ZEBOV在免疫后1個(gè)月至1年均能保持較高的抗體水平，其免疫效果要優(yōu)于Ad26-ZEBOV。

2015年4月，在塞拉利昂開展了一項(xiàng)單劑量的rVSV-ZEBOV II/III期臨床試驗(yàn)，實(shí)際接種人數(shù)8016人，其中有539名受試者參加了免疫原性研究[33]。同年，rVSV-ZEBOV的III期臨床試驗(yàn)在幾內(nèi)亞開展[32]。該試驗(yàn)采用了“環(huán)形接種”策略：圍繞每個(gè)新發(fā)EVD病例的密接者及其接觸者形成環(huán)形人群，設(shè)置立即接種組和延遲接種組（延遲21 d接種）。中期臨床分析結(jié)果表明，在接種10 d后，立即接種組未出現(xiàn)感染病例，而延遲接種組則出現(xiàn)16例感染病例，2組結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.045）。這表明rVSV-ZEBOV具有較好的保護(hù)性。

加強(qiáng)免疫能夠有效提高疫苗免疫效果，增加免疫反應(yīng)的持續(xù)性。Ad26-ZEBOV的異源加強(qiáng)免疫和Ad5-EBOV的同源加強(qiáng)免疫策略都獲得了較好的免疫效果。在I期臨床試驗(yàn)中，部分受試者在接種rVSV-ZEBOV 28 d后接受同源加強(qiáng)免疫[26]。盡管在隨后的28 d內(nèi)加強(qiáng)免疫組受試者的體液免疫反應(yīng)水平有所上升，但在初免180 d后2組受試者的體液免疫反應(yīng)水平已經(jīng)沒有顯著性差異。這表明同源加強(qiáng)會(huì)在短期內(nèi)提高體液免疫反應(yīng)水平，但無(wú)法改變免疫反應(yīng)的持久性。此外，另一項(xiàng)臨床試驗(yàn)（NCT02876328）正在考察免疫180 d后進(jìn)行同源加強(qiáng)免疫的免疫效果和免疫持久性。

3.4.3 長(zhǎng)期有效性 目前已經(jīng)完成rVSV-ZEBOV最長(zhǎng)時(shí)間為2年以上的免疫反應(yīng)觀察。這些受試者來(lái)自于2014年非洲和歐洲I期臨床試驗(yàn)，分別接種過(guò)3.0×105PFU、1.0×107PFU和5.0×107PFU劑量的rVSV-ZEBOV，其中瑞士受試者觀察至2年，肯尼亞和加蓬受試者觀察至1年[27，29，32]。初免2年后，參與隨訪的95名瑞士受試者（共102名）中，曾接種1.0×107PFU或5.0×107PFU劑量疫苗且初免28 d時(shí)血清反應(yīng)陽(yáng)性的44名受試者體內(nèi)血清反應(yīng)陽(yáng)性率為100%（44/44），接種3.0×105PFU劑量疫苗的則為89%（33/37），這些受試者的抗體滴度水平與初免180 d后的水平相當(dāng)。參與隨訪的肯尼亞和加蓬各劑量組受試者初免后1年的抗體滴度水平也與初免90 d后的水平相當(dāng)。此外，利用多變量方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，初免6個(gè)月以后的抗體水平可以通過(guò)疫苗劑量和疫苗相關(guān)性關(guān)節(jié)炎來(lái)預(yù)測(cè)[32]。研究結(jié)果表明一定劑量rVSV-ZEBOV接種可以產(chǎn)生持續(xù)性抗體反應(yīng)，疫苗在無(wú)法進(jìn)行加強(qiáng)免疫時(shí)也能發(fā)揮保護(hù)效果。美國(guó)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)庫(kù)顯示，有多項(xiàng)rVSV-ZEBOV臨床試驗(yàn)（NCT02788227，NCT03140774）正在開展中，旨在探索該疫苗的長(zhǎng)期免疫反應(yīng)。

3.4.4 整合免疫學(xué)研究 臨床試驗(yàn)中，研究者通常利用血清學(xué)和細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)獲取疫苗免疫反應(yīng)信息。rVSV-ZEBOV是目前惟一將常規(guī)免疫學(xué)數(shù)據(jù)和不同層次的組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行整合分析的埃博拉疫苗[36]。在美國(guó)I期臨床試驗(yàn)中，F(xiàn)ouzia團(tuán)隊(duì)檢測(cè)了ZEBOV-GP特異的循環(huán)濾泡輔助T細(xì)胞，并發(fā)現(xiàn)其與抗體滴度以及濾泡T輔助細(xì)胞亞群水平顯著相關(guān)[37]。德國(guó)完成的I期臨床試驗(yàn)中，Dahlke 等[38]發(fā)現(xiàn)相比其他2組受試者，2.0×107PFU劑量組受試者能引發(fā)更強(qiáng)大的細(xì)胞因子互鎖網(wǎng)絡(luò)，這也是rVSV-ZEBOV的首個(gè)細(xì)胞介導(dǎo)免疫譜；而Rechtien等[39]則針對(duì)2組高劑量受試者的樣本，利用系統(tǒng)疫苗學(xué)來(lái)尋找rVSV-ZEBOV的早期先天免疫反應(yīng)信息，通過(guò)多細(xì)胞因子水平、天然免疫細(xì)胞亞群和基因表達(dá)的整合分析，發(fā)現(xiàn)IP-10與rVSV-ZEBOV誘導(dǎo)的天然免疫反應(yīng)密切相關(guān)。在另外2項(xiàng)臨床試驗(yàn)中，Angela團(tuán)隊(duì)通過(guò)分析受試者血漿樣本中細(xì)胞因子水平變化的特征，揭示了單核細(xì)胞可能在rVSV-ZEBOV安全性和免疫原性方面發(fā)揮重要作用[40]。這些研究表明，通過(guò)整合多方面數(shù)據(jù)進(jìn)行免疫學(xué)研究，可以更好地理解疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的機(jī)制和關(guān)鍵因素，有利于鑒定和預(yù)測(cè)疫苗誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的水平。

4 結(jié) 語(yǔ)

2014年西非大規(guī)模暴發(fā)的EVD疫情將多個(gè)埃博拉疫苗快速推向臨床研究階段（見表2）。目前看來(lái)，病毒載體埃博拉疫苗具有較好的前景。該類疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)具有響應(yīng)快、水平高、持續(xù)較久的優(yōu)點(diǎn)，尤其是rVSV-ZEBOV，已經(jīng)成功在西非人群中證明了其較好的保護(hù)效果?？紤]到非洲大部分地區(qū)經(jīng)濟(jì)水平相對(duì)落后，電力系統(tǒng)難以保障，液體制劑疫苗的冷鏈運(yùn)輸和保存是其須要重點(diǎn)解決的問題之一。此外，未來(lái)埃博拉疫苗的臨床研究可能須要關(guān)注以下幾個(gè)方面。①根據(jù)免疫需求，進(jìn)一步探索疫苗預(yù)防性接種和暴露后接種的保護(hù)效力；②針對(duì)不同人群，調(diào)整免疫策略以實(shí)現(xiàn)的免疫反應(yīng)的快速性和持久性；③利用系統(tǒng)疫苗學(xué)，對(duì)臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行充分挖掘，解讀疫苗免疫標(biāo)志物，以指導(dǎo)疫苗的設(shè)計(jì)優(yōu)化和免疫反應(yīng)的預(yù)測(cè)。

表2 各類埃博拉疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)Table 2 Advantages and shortages of different Ebola vaccines