甘輝群,劉明生*,袁 橙,郝福星,康金龍,張 昊,熊小兵
(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院,江蘇泰州 225300;2.江蘇省泰州市海陵區(qū)成香家禽養(yǎng)殖場(chǎng),江蘇泰州 225318)
當(dāng)前畜禽養(yǎng)殖存在抗生素濫用、疫病頻發(fā)、環(huán)境污染等問(wèn)題。因此,加強(qiáng)生物安全管理,用中草藥添加劑等代替抗生素,實(shí)現(xiàn)無(wú)抗健康養(yǎng)殖,保障畜禽產(chǎn)品安全,是我國(guó)畜牧業(yè)實(shí)現(xiàn)現(xiàn)代化的必然趨勢(shì)。
黃芩解毒散是由黃芩、黃連、白頭翁、地錦草、馬齒莧、鐵莧菜、女貞子、金櫻子、玄參、地榆、老鸛草11 味中藥復(fù)方提取而成,含有黃芩苷、黃連素、白頭翁素等活性成分,可以抑制菌體蛋白質(zhì)和核酸的合成,對(duì)大腸桿菌和沙門(mén)氏菌都有較好的抑制作用,能促進(jìn)有益菌的生長(zhǎng),從而全面調(diào)理腸道,整體提升腸道健康。目前,對(duì)黃芩解毒散的研究主要在仔豬的生產(chǎn)性能和腹瀉病防治[1-2],而對(duì)鴨的生產(chǎn)性能和腸道健康的研究則鮮見(jiàn)報(bào)道。筆者在飼糧中添加一定濃度的黃芩解毒散,通過(guò)測(cè)定番鴨平均體重、平均日增重、料重比、成活率以及番鴨腸道菌群、小腸絨毛高度、隱窩深度、V/C值等,旨在為其在家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
1.1主要藥物和試劑黃芩解毒散,購(gòu)自無(wú)錫正大畜禽有限公司,主要由黃芩、黃連、白頭翁、地錦草、地榆、鐵莧菜、老鸛草、玄參、女貞子和金櫻子11味中藥組成,其中黃芩苷≥3%、槲皮素≥0.01%。20%硫酸新霉素可溶性粉,購(gòu)自無(wú)錫正大畜禽有限公司。
1.2試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理方法1日齡番鴨1 500只,由江蘇省泰州市海陵區(qū)成香家禽養(yǎng)殖場(chǎng)提供,隨機(jī)分成5組,每組設(shè)5個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)60只,公母各半,各處理組之間體重差異不顯著(P>0.05)。Ⅰ組為對(duì)照組,僅飼喂基礎(chǔ)日糧;Ⅱ組,在基礎(chǔ)日糧中添加0.05%硫酸新霉素可溶性粉;Ⅲ組,在基礎(chǔ)日糧中添加0.02%黃芩解毒散;Ⅳ組,在基礎(chǔ)日糧中添加0.03%黃芩解毒散;Ⅴ組,在基礎(chǔ)日糧中添加0.04%黃芩解毒散。試驗(yàn)番鴨網(wǎng)上平養(yǎng),全程自由采食、充足飲水,按照以下免疫程序進(jìn)行免疫接種:1日齡,口服鴨病毒性肝炎活疫苗1羽份;7日齡,每只肌肉注射鴨傳染性漿膜滅活苗0.5 mL;14日齡,每只皮下或肌肉注射重組禽流感(H5、H7)滅活苗0.3 mL;21日齡,皮下或肌肉注射鴨瘟疫苗1羽份。預(yù)飼期7 d,正試期42 d。各階段番鴨基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平分別見(jiàn)表1~2。
1.3樣品采集與指標(biāo)測(cè)定
1.3.1生長(zhǎng)性能的測(cè)定。試驗(yàn)鴨空腹12 h,以重復(fù)為單位分別在試驗(yàn)第14、28和42天,每個(gè)重復(fù)分別隨機(jī)選取番鴨10只,稱(chēng)重并記錄給料量和剩料量,用于計(jì)算平均體重、平均日采食量、平均日增重和料重比;試驗(yàn)結(jié)束后記錄鴨只死亡數(shù),用于計(jì)算成活率。
1.3.2十二指腸、空腸和回腸形態(tài)的測(cè)定。以重復(fù)為單位分別在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)(第42天),番鴨稱(chēng)重后,頸部放血致死,打開(kāi)腹腔,在相同位置分別取長(zhǎng)度約1 cm的十二指腸、空腸和回腸,用生理鹽水沖洗腸道中的內(nèi)容物后,用10%福爾馬林固定液固定24 h,固定樣本經(jīng)洗滌、脫水、透明、浸臘、包埋、修塊等處理后,切成7 μm 厚的蠟片,再進(jìn)行H-E染色、中性樹(shù)膠封片等,在光學(xué)顯微鏡上觀察組織形態(tài)學(xué)變化,測(cè)定其十二指腸、空腸和回腸的絨毛高度(VH)和隱窩深度(CD)值,并計(jì)算絨毛高度與隱窩深度的比值(V/C)。絨毛高度為腸腺開(kāi)口至絨毛頂端的垂直高度;隱窩深度為絨毛根部上皮的凹陷處到固有層的距離。
表1 各階段番鴨基礎(chǔ)日糧的組成
注:預(yù)混料可為1 kg全價(jià)料提供維生素 A 11 000 IU、維生素 D34 000 IU、維生素 E 45 IU、維生素 K34.0 mg、維生素 B12.0 mg、核黃素 6.0 mg、泛酸 20.0 mg、煙酸50.0 mg、葉酸 1.0 mg、生物素 0.2 mg、維生素 B1220 μg、膽堿500.0 mg、銅 10.0 mg、鐵 80.0 mg、鋅 80.0 mg、錳 100.0 mg、碘 0.5 mg、硒 0.3 mg、鈷 0.4 mg
Note:The premix could provide for complete feed per kilogram: vitamin A 11 000 IU, vitamin D34 000 IU, Vitamin E 45 IU, vitamin K34.0 mg, Vitamin B12.0 mg, riboflavin 6.0 mg, pantothenic acid 20.0 mg, niacin 50.0 mg, folic acid 1.0 mg, biotin 0.2 mg , vitamin B1220 μg, choline 500.0 mg, copper 10.0 mg, iron 80.0 mg, zinc 80.0 mg, manganese 100.0 mg, iodine 0.5 mg, selenium 0.3 mg, cobalt 0.4 mg
表2 各階段番鴨基礎(chǔ)日糧的營(yíng)養(yǎng)水平
1.3.3盲腸大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和乳酸菌的培養(yǎng)計(jì)數(shù)。上述試驗(yàn)解剖的番鴨,每只取新鮮盲腸內(nèi)容物1 g,用0.85%氯化鈉溶液99 mL稀釋并混合均勻,然后按照10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7等倍數(shù)進(jìn)行梯度稀釋。然后吸取10-3、10-4、10-53個(gè)濃度各100 μL置于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),每個(gè)稀釋度劃3個(gè)重復(fù)板,在37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)18 h,在麥康凱培養(yǎng)基中大腸桿菌菌落呈鮮桃紅色,圓形、扁平,邊緣整齊,表面光滑、濕潤(rùn);沙門(mén)氏菌的菌落呈無(wú)色至淺橙色、透明或半透明;再吸取10-5、10-6、10-7共3個(gè)濃度各100 μL,置于MRS培養(yǎng)基中進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),在37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)48 h,在MRS培養(yǎng)基中平皿底為黃色,乳酸桿菌為淡藍(lán)色或白色、中等大小、凸起、濕潤(rùn)、邊緣整齊,菌落呈圓形,直徑為(3.0±1.0) mm。統(tǒng)計(jì)平板菌落個(gè)數(shù),結(jié)果以腸道內(nèi)容物中細(xì)菌數(shù)量(CFU/g)的對(duì)數(shù)值表示。
1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel軟件進(jìn)行初步處理,應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析,采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較,結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。
2.1黃芩解毒散對(duì)番鴨生長(zhǎng)性能的影響由表3可知,試驗(yàn)組番鴨預(yù)飼7 d后,8日齡平均體重沒(méi)有顯著差異(P>0.05);21日齡,試驗(yàn)組番鴨平均體重均高于對(duì)照組,且Ⅳ和Ⅴ組21日齡平均體重與 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組相比差異顯著(P<0.05);35日齡,Ⅳ和Ⅴ組番鴨平均體重與 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組一比差異極顯著(P<0.01);49日齡,Ⅳ和Ⅴ組番鴨平均體重極顯著高于Ⅰ、Ⅱ 和Ⅲ組(P<0.01),Ⅱ和Ⅲ組番鴨平均體重也極顯著高于 Ⅰ 組(P<0.01);4個(gè)試驗(yàn)組番鴨平均日增重均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),4個(gè)試驗(yàn)組之間差異不顯著(P>0.05);4個(gè)試驗(yàn)組平均日采食量與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05);Ⅳ和Ⅴ組料重比均顯著低于 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.05);Ⅳ和Ⅴ組番鴨成活率均顯著高于 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.05),Ⅱ和Ⅲ組番鴨成活率也顯著高于 Ⅰ 組(P<0.05)。
2.2黃芩解毒散對(duì)番鴨十二指腸、空腸和回腸腸道形態(tài)的影響由表4可知,Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組十二指腸絨毛高度極顯著高于Ⅰ和Ⅱ組(P<0.01),而Ⅳ和Ⅴ組絨毛高度也顯著高于Ⅲ組(P<0.05);Ⅳ和Ⅴ組十二指腸隱窩深度顯著小于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.05);Ⅳ和Ⅴ組V/C值極顯著高于Ⅲ組(P<0.01),Ⅲ組V/C值也極顯著高于Ⅰ和Ⅱ 組(P<0.01)。
表3 黃芩解毒散對(duì)番鴨生長(zhǎng)性能的影響
注:同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05),同列不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)
Note:Different small letters in the same column indicated significant difference(P<0.05);different capital letters in the same column indicated extremely significant difference(P<0.01)
表4黃芩解毒散對(duì)番鴨十二指腸腸道形態(tài)的影響
Table4TheeffectsofScutellariadetoxificationpowderontheduodenummorphologyofmuscovyducks
組別Group絨毛高度Villus heightμm隱窩深度Crypt depthμmV/C值V/C valueⅠ985.45±19.62 cB121.85±2.15 a8.09±0.22 CⅡ983.11±22.56 cB122.73±3.06 a8.01±0.28 CⅢ1 017.26±25.23 bA116.59±1.88 a8.72±0.36 BⅣ1 029.41±20.78 aA109.45±2.77 b9.40±0.45 AⅤ1 035.01±24.48 aA108.16±3.36 b9.57±0.19 A
注:同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05),同列不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)
Note:Different small letters in the same column indicated significant difference(P<0.05);different capital letters in the same column indicated extremely significant difference(P<0.01)
從表5可以看出,Ⅳ和Ⅴ組空腸絨毛高度極顯著高于 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組 (P<0.01),而Ⅲ組空腸絨毛高度也顯著高于 Ⅰ和Ⅱ 組 (P<0.01),Ⅰ和Ⅱ 組間差異不顯著(P>0.05);Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組空腸隱窩深度小于Ⅰ和Ⅱ 組,但差異不顯著(P>0.05);Ⅳ和Ⅴ組V/C值極顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組 (P<0.01),Ⅲ組V/C值也極顯著高于Ⅰ和Ⅱ 組 (P<0.01)。
表5黃芩解毒散對(duì)番鴨空腸腸道形態(tài)的影響
Table5TheeffectsofScutellariadetoxificationpowderonthejejunummorphologyofmuscovyducks
組別Group絨毛高度Villus heightμm隱窩深度Crypt depthμmV/C值V/C valueⅠ753.46±17.43 C103.45±2.637.28±0.38 CⅡ742.76±19.85 C103.68±3.127.16±0.57 CⅢ862.08±20.26 B101.67±1.358.48±0.23 BⅣ897.68±26.12 A98.28±2.559.13±0.32 AⅤ905.10±23.25 A97.89±3.239.25±0.26 A
注:同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05),同列不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)
Note:Different small letters in the same column indicated significant difference(P<0.05);different capital letters in the same column indicated extremely significant difference(P<0.01)
由表6可知,Ⅳ和Ⅴ組回腸絨毛高度極顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.01),而Ⅲ組回腸絨毛高度也顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組(P<0.05);Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組回腸隱窩深度小于Ⅰ組和Ⅱ組,但差異不顯著(P>0.05);Ⅳ和Ⅴ組V/C值顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.05),而Ⅲ組V/C值也顯著高于Ⅰ和Ⅱ 組 (P<0.05)。
表6黃芩解毒散對(duì)番鴨回腸腸道形態(tài)的影響
Table6TheeffectsofScutellariadetoxificationpowderontheileummorphologyofmuscovyducks
組別Group絨毛高度Villus heightμm隱窩深度Crypt depthμmV/C值V/C valueⅠ504.30±15.62 cB94.24±2.155.35±0.21 bⅡ508.23±20.72 cB94.73±4.235.37±0.34 bⅢ525.24±16.54 bB92.56±3.655.67±0.56 bⅣ543.99±17.58 aA91.31±4.125.96±0.75 aⅤ548.82±26.67 aA89.75±3.286.11±0.62 a
注:同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05),同列不同大寫(xiě)字母表示差異極顯著(P<0.01)
Note:Different small letters in the same column indicated significant difference(P<0.05);different capital letters in the same column indicated extremely significant difference(P<0.01)
2.3黃芩解毒散對(duì)番鴨盲腸有害菌數(shù)量的影響由表7可知,49日齡, 4個(gè)試驗(yàn)組大腸桿菌數(shù)量均極顯著低于對(duì)照組(P<0.01),且Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ組大腸桿菌數(shù)量均顯著低于Ⅲ組(P<0.05);Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ組沙門(mén)氏菌數(shù)量均極顯著低于Ⅰ、Ⅲ組(P<0.01),Ⅲ組沙門(mén)氏菌數(shù)量顯著低于Ⅰ組(P<0.05);Ⅳ和Ⅴ組乳酸菌數(shù)量極顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組 (P<0.01),且Ⅲ組乳酸菌數(shù)量也顯著高于Ⅰ和 Ⅱ 組 (P<0.05),而 Ⅰ 和 Ⅱ 組差異不顯著(P>0.05)。
表7黃芩解毒散對(duì)番鴨盲腸微生物菌群的影響
Table7TheeffectsofScutellariadetoxificationpowderonthececumfloraofmuscovyducks
組別Group大腸桿菌E. coli 沙門(mén)氏菌Salmonella sp.乳酸菌Lactobacilli sp.Ⅰ7.32±0.27 aA7.65±0.48 aA7.65±0.19 cBⅡ6.15±0.26 cB6.26±0.34 bB7.89±0.32 cBⅢ6.65±0.18 bB7.13±0.25 bA8.37±0.41 bBⅣ6.28±0.19 cB6.44±0.29 bB9.15±0.37 aAⅤ6.17±0.32 cB6.32±0.16 bB9.36±0.45 aA
注:同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05),同列不同大寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.01)
Note:Different small letters in the same column indicated significant difference(P<0.05);different capital letters in the same column indicated extremely significant difference(P<0.01)
3.1中草藥制劑對(duì)家禽生產(chǎn)性能的影響中草藥含有的生理活性物質(zhì)能夠有效抑菌,有的甚至能促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)的消化與吸收,提高飼料的利用率,加速畜禽的生長(zhǎng)發(fā)育,提高生產(chǎn)性能等。張橋等[3]將黃芪、肉桂、山楂等中草藥添加到基礎(chǔ)日糧中,試驗(yàn)組艾維茵肉仔雞的日增重和育成率較對(duì)照組分別提高 15.75%和12.04%(P<0.05),料重比下降 9.57%(P<0.05);于輝等[4]在 0~49 日齡仙湖肉鴨的基礎(chǔ)日糧中添加白術(shù)、當(dāng)歸等組成的中草藥添加劑,研究發(fā)現(xiàn)仙湖肉鴨的飼料轉(zhuǎn)化率提高了3.8%;賀永康[5]在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加一定比例的中草藥添加劑,結(jié)果發(fā)現(xiàn)1.0%和 1.5%的添加組在 22~42 d取得了較好的 ADG 和 F/G,與對(duì)照組相比 ADG分別提高了7.67%(P<0.05)和 13.55%(P<0.05),F(xiàn)/G 降低了 8.48%(P<0.05)和15.25%(P<0.05)。姜賀等[6]將一定比例的黃芪粉、刺五加粉、松針?lè)厶砑拥交A(chǔ)日糧中,結(jié)果發(fā)現(xiàn)各試驗(yàn)組平均日增重均高于對(duì)照組,其中試驗(yàn)Ⅱ組比對(duì)照組提高了16.03%,差異顯著(P<0.05);試驗(yàn)Ⅳ組平均采食量比對(duì)照組提高了10.44%,各試驗(yàn)組料重比均低于對(duì)照組,且隨著中草藥添加量的增多呈下降趨勢(shì)。高艷敏等[7]在桂香雞的基礎(chǔ)日糧中添加黃芪、神曲、山楂等中草藥制劑,結(jié)果發(fā)現(xiàn)1.0%中草藥組對(duì)桂香雞的增重和飼料增重比的作用比較明顯,與空白組相比差異極顯著(P<0.01),1.5%中草藥組與空白組的料重比差異顯著(P<0.05),各組間平均日采食量差異不顯著(P>0.05)。該研究在雛番鴨基礎(chǔ)日糧中添加一定比例的黃芩解毒散,結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.3%中藥添加組(Ⅳ組)和0.4%中藥添加組(Ⅴ組)番鴨平均體重、平均日增重和成活率均顯著或極顯著高于對(duì)照組(Ⅰ 組),料重比顯著低于對(duì)照組(P<0.05),成活率均顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.05)。
3.2中草藥制劑對(duì)家禽腸道健康的影響小腸的正常結(jié)構(gòu)尤其是絨毛高度、隱窩深度以及V/C值等是評(píng)價(jià)小腸消化吸收功能的重要指標(biāo)。腸絨毛高度越大,小腸吸收面積就越大;隱窩越淺,消化吸收能力就越強(qiáng);腸絨毛高度/隱窩越深比值越大,消化吸收功能就越高。王強(qiáng)等[8]在高郵鴨的基礎(chǔ)日糧中添加丹參、玄參、杜仲、石斛等中草藥飼料添加劑,結(jié)果表明0.12%添加組對(duì)絨毛高度的影響比對(duì)照組高,0.12%和0.14%添加組V/C值高于對(duì)照組。賀永康[5]在肉雞基礎(chǔ)日糧中添加一定比例的中草藥添加劑,結(jié)果發(fā)現(xiàn)1.0%和 1.5%的添加組21和 42 d 十二指腸和空腸的絨毛高度以及 V/C值顯著提高;1.5%添加組 42 d 十二指腸和空腸的隱窩深度顯著降低;42 d 1.5%添加組十二指腸腸絨毛上皮結(jié)構(gòu)完整,層次清晰,腸黏膜上皮的微絨毛紋狀緣排列緊密,大小均勻、結(jié)構(gòu)清晰。該試驗(yàn)在雛番鴨的基礎(chǔ)日糧中添加一定比例的黃芩解毒散,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其能很好地增長(zhǎng)十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度,縮短隱窩深度,提高V/C值,增強(qiáng)了番鴨的消化和吸收能力。
家禽腸道內(nèi)有多種菌群,主要有大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌等,菌群平衡與家禽腹瀉有著密切的關(guān)系。于輝等[9]在仙湖肉鴨日糧中添加一定比例的中草藥飼料添加劑,結(jié)果發(fā)現(xiàn)中草藥添加組均能顯著降低腸道內(nèi)大腸桿菌菌群的數(shù)量,提高乳酸菌菌群的數(shù)量, 尤其是以白術(shù)、柴胡、當(dāng)歸、大蒜、紅辣椒、丹參、生姜等組成的中草藥飼料添加劑Ⅰ效果最為明顯。張利娟等[10]在蛋雞日糧中添加黃芪多糖和小檗堿復(fù)合制劑,結(jié)果發(fā)現(xiàn)各處理組盲腸大腸桿菌數(shù)量顯著或極顯著低于對(duì)照組,而乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量顯著高于對(duì)照組,表明中草藥能有效改善腸道微生態(tài)區(qū)系的平衡提高機(jī)體的消化力。該研究結(jié)果表明,黃芩解毒散0.03%和0.04%添加組能顯著降低盲腸中大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量,極顯著增加乳酸菌數(shù)量,有利于調(diào)節(jié)腸道菌群健康。
綜上所述,建議在基礎(chǔ)日糧中添加0.03%或0.04%的黃芩解毒散,能很好地促進(jìn)家禽的生長(zhǎng)和生產(chǎn)性能,維護(hù)腸道健康。