胸苷酸合成酶變化與結(jié)直腸癌5-氟尿嘧啶化療敏感性及毒副反應(yīng)的關(guān)系

曹冉華 呼群

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，呼和浩特 010050

結(jié)直腸癌術(shù)后放化療是重要治療手段[1]。臨床常用的5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-Fu）化療方案單藥反應(yīng)率不足20%，且化療藥物對(duì)正常細(xì)胞組織的損傷可導(dǎo)致各類毒副反應(yīng)發(fā)生，影響患者治療依從性[2]。因此，早期評(píng)估結(jié)直腸癌患者化療敏感性與毒副反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)于指導(dǎo)治療方案的制定與調(diào)整有著重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，胸苷酸合成酶（Thymidylate synthetase，TS）與5-Fu敏感性存在一定關(guān)聯(lián)[3]，在此基礎(chǔ)上，本研究選取97例患者，就TS與結(jié)直腸癌患者5-Fu化療敏感性與毒副反應(yīng)的關(guān)系進(jìn)行了前瞻性分析，現(xiàn)將研究過程與結(jié)論報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

患者均為結(jié)直腸癌根治術(shù)后，入組前未接受相關(guān)抗腫瘤治療，排除病灶遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者以及合并其他惡性腫瘤者。97例患者中，男43例，女54例，年齡24～79歲，平均（63.25±10.81）歲，美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）分期[4]：Ⅲ期47例，Ⅳ期50例；分化程度：高分化29例，中分化30例，低分化38例；浸潤深度：T123例，T215例，T337例，T422例。

1.2 TS表達(dá)檢測(cè)

取患者結(jié)直腸癌根治術(shù)后腫瘤組織標(biāo)本，將標(biāo)本蠟塊制成4 μm后切片，室溫下以二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水。使用3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS溶液沖洗2次；使用正常羊血清工作液封閉樣本10 min，加入鼠抗人TS單克隆抗體，PBS溶液沖洗2次；添加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素工作液，于37℃下孵育25 min，PBS溶液沖洗2次；以DAB顯色液染色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固[5]。根據(jù)標(biāo)本染色深度、染色面積判斷染色結(jié)果，以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見棕黃色顆粒為陽性表現(xiàn)，顯色不清或不顯色、土黃色、棕黃色、褐黃色分別計(jì)0分、1分、2分、3分；染色面積0～＜5%、5%～＜35%、35%～＜65%、≥65%分別計(jì)0分、1分、2分、3分。染色深度與染色面積之和的1/2為總分，總分 0分為（-），0.5～1分為（+），1.5～2分為（++），2.5～3.0分為（+++），（++）、（+++）為高表達(dá)，（-）、（+）為低表達(dá)[6]。按照患者TS表達(dá)情況，將其分別納入高表達(dá)組、低表達(dá)組。

1.3 5-Fu敏感性檢測(cè)

取患者結(jié)直腸癌根治術(shù)后腫瘤組織標(biāo)本，以0.9%氯化鈉溶液漂洗2次，剪碎后加入0.25%胰蛋白酶消化液，以200目濾篩過濾，獲取單細(xì)胞懸浮液。使用4,5-二甲基唑-2（MTT）法對(duì)標(biāo)本5-Fu抑制率進(jìn)行檢測(cè)，抑制率≥30%為敏感，抑制率＜30%為不敏感[7]。

1.4 毒副反應(yīng)評(píng)價(jià)

參照世界衛(wèi)生組織（WHO）抗癌藥物常見毒副反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)兩組患者化療期間毒副反應(yīng)發(fā)生率及分級(jí)進(jìn)行評(píng)價(jià)，毒副反應(yīng)分級(jí)包括0級(jí)、Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)，級(jí)別越高則毒副反應(yīng)越嚴(yán)重。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)本臨床研究的所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0進(jìn)行分析，5-Fu敏感率、總有效率、毒副反應(yīng)發(fā)生率等計(jì)數(shù)資料均以（n/%）表示，并采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料（毒副反應(yīng)等級(jí)）以（n）表示，并采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 敏感性結(jié)果

97例患者中，66例（68.04%）腫瘤組織標(biāo)本TS高表達(dá)，其中（++）27例，（+++）39例，其余31例（31.96%）腫瘤組織標(biāo)本TS低表達(dá)，其中（-）24例，（+）7例。

TS高表達(dá)組44例腫瘤組織標(biāo)本對(duì)5-Fu敏感，敏感性為66.67%，高于低表達(dá)組的38.71%（12/31），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 毒副反應(yīng)

TS高表達(dá)組患者均發(fā)生不同程度惡心嘔吐、骨髓抑制、腹瀉、口腔黏膜炎，其毒副反應(yīng)發(fā)生率及毒副反應(yīng)分級(jí)均高于低表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者化療期間毒副反應(yīng)發(fā)生率及分級(jí)比較（n）

3 討論

全球范圍內(nèi)，結(jié)直腸癌發(fā)病率、死亡率分別為10.56%、7.80%，分別居第三位、第五位[8]。文獻(xiàn)報(bào)道，以TS為代表的5-Fu代謝相關(guān)酶也與患者近遠(yuǎn)期預(yù)后密切相關(guān)[9-10]。

作為一種胸苷酸合成限速酶，TS主要在分裂和代謝活躍的細(xì)胞內(nèi)保持活性狀態(tài)，并在DNA的生物合成與細(xì)胞生長、增殖中扮演著重要角色[11]。而TS也是5-Fu的中心靶酶，5-Fu及其衍生物抑制TS生成，是發(fā)揮抗癌活性的重要機(jī)制[12]。因此，此次研究的97例患者中，68.04%的患者腫瘤組織標(biāo)本TS高表達(dá)，且其對(duì)5-Fu的敏感性為66.67%，說明TS高表達(dá)可上調(diào)腫瘤組織對(duì)5-Fu化療的敏感性，其機(jī)制一方面與TS是5-Fu的中心靶酶有關(guān)。另一方面，5-Fu在組織細(xì)胞內(nèi)被磷酸化后才可轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚源x物并發(fā)揮抑制細(xì)胞合成、誘導(dǎo)RNA功能障礙作用，而TS高表達(dá)往往伴隨著乳清酸磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（OPRT）高表達(dá)，故可促進(jìn)5-Fu磷酸化，上調(diào)腫瘤組織對(duì)5-Fu的化療敏感性[13-14]。與高表達(dá)組相比，低表達(dá)組臨床總有效率僅為29.03%，其原因與TS低表達(dá)所致5-Fu敏感性不佳有關(guān)，此外，腫瘤組織TS低表達(dá)者往往存在其他誘發(fā)腫瘤細(xì)胞增殖、加速病情進(jìn)展的因素，5-Fu難以消除上述因素可能也是導(dǎo)致患者近期預(yù)后不佳的重要原因[15]。

在毒副反應(yīng)的對(duì)比中，高表達(dá)組表現(xiàn)出了更高的毒副反應(yīng)發(fā)生率以及毒副反應(yīng)等級(jí)，且全部患者均發(fā)生不同程度的不良反應(yīng)，其原因考慮為：TS與血小板內(nèi)皮細(xì)胞生長因子屬于同一類物質(zhì)，也有著促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞趨化移動(dòng)、刺激新生血管生成等作用，故TS高表達(dá)意味著更強(qiáng)的表面血管生長與侵襲能力，此時(shí)患者病情進(jìn)展更快、腫瘤惡性程度更高，化療方案中需要更高的5-Fu劑量，可能影響治療安全性[16-17]。同時(shí)，體內(nèi)二氫胸腺嘧啶脫氫酶（DPD）是5-Fu轉(zhuǎn)化為5-氟二氫尿嘧啶的關(guān)鍵酶，而TS高表達(dá)可抑制DPD表達(dá)，故高表達(dá)組更低的DPD活性常使得血漿內(nèi)5-Fu難以轉(zhuǎn)化并排出體外[18]，機(jī)體5-Fu大量蓄積也是引發(fā)胃腸道毒性、血液毒性并誘發(fā)相關(guān)毒副反應(yīng)的重要原因。

綜上所述，結(jié)直腸癌腫瘤組織中TS高表達(dá)可使5-Fu化療敏感性上升，但也伴隨著化療期間患者毒副反應(yīng)發(fā)生率、毒副反應(yīng)等級(jí)的上升，在今后的臨床實(shí)踐中，對(duì)于TS高表達(dá)患者而言，可采取5-Fu化療方案并對(duì)用藥劑量予以合理調(diào)整，以保證治療效果與安全性；對(duì)于TS低表達(dá)患者而言，需探索其他治療方案以確保其預(yù)后質(zhì)量與生存質(zhì)量的改善。