腹瀉糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗的價值

周方芳

【摘 要】目的 分析檢驗腹瀉患者糞便中小腸結腸炎耶爾森菌的作用。方法 以2016.8-2017.5期間經(jīng)檢查確診為腹瀉的194例患者為本次觀察對象，所有患者入院后取其新鮮糞便，分別行培養(yǎng)法、PT-PCR法對小腸結腸炎耶爾森菌進行檢驗，并根據(jù)檢驗方法的不同范圍分為觀察組（PT-PCR法）、對照組（培養(yǎng)法），觀察不同檢驗方式患者小腸結腸炎耶爾森菌檢出情況。結果 觀察組病菌檢出陽性率為19.6%高于對照組陽性率10.3%，觀察組用于病菌檢驗價值高，P<0.05。結論 臨床對腹瀉患者糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗使用PT-PCR法，具有較高的檢出率。

【關鍵詞】檢驗；耶爾森菌；糞便；腹瀉

【中圖分類號】R442.2 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-3783（2018）08-03--01

腹瀉是臨床最為常見的腸道疾病，病因較多如著涼、病菌感染、食物中毒等，患者主要表現(xiàn)為排便次數(shù)增加、糞便形態(tài)改變，但對于病菌感染致腹瀉者，通常伴有惡心嘔吐、腹痛、發(fā)熱等癥狀。目前已知的腹瀉致病菌大概上百種，小腸結腸炎耶爾森氏菌是臨床常見感染性疾病，病菌可在肉類、蔬菜、乳制品等多種食物、環(huán)境、動物糞便中存在，傳播途徑多，可造成急性胃腸炎[1]。感染者臨床除了常見的胃腸炎癥狀、發(fā)熱等，部分患者還會出現(xiàn)敗血癥、闌尾炎、反應性關節(jié)炎，由于疾病多發(fā)于嬰幼兒，若不及時治療嚴重者可致患者死亡，因此如何提高臨床對糞便中病菌檢出率得到相關學者關注[2]。本文觀察2016.8-2017.5期間194例腹瀉患者分別以培養(yǎng)法、PT-PCR法進行檢驗糞便中病菌情況，旨在為今后病菌臨床檢測提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2016.8-2017.5期間經(jīng)檢查確診為腹瀉的194例患者為本次觀察對象，所有患者入院時均出現(xiàn)不同程度每日排便次數(shù)增加（大于3次）及糞便形狀改變情況，經(jīng)檢查確診為腹瀉，患者自愿參與。本次入院的194例患者，年齡區(qū)間8個月-75歲，平均（39.5±4.6）歲，男104例、女90例；病程1-6天，平均（3.7±0.5）天，排便次數(shù)3-7次，平均（4.8±0.3）次。

1.2 方法

患者于入院后24小時內(nèi)取大便標本，置于潔凈、干燥的容器內(nèi)保存，注意避免標本中混有水、尿等雜質(zhì)，后取0.5g糞便標本置入增菌液44.5ml0.9%氯化鈉溶液中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境設置溫度16℃，培養(yǎng)時間18小時。

對照組：取培養(yǎng)后的標本5μg 接種于 CIN 平板上，并再次進行培養(yǎng)，條件溫度25℃、時間24小時，后將標本菌株與標準菌株進行比較。

觀察組：取培養(yǎng)后容器內(nèi)混合物200 μg，行DNA 提取，PCR擴增，長度大約為 150 bp，反應體系包括：預混合液、探針、引物、模板、BSA，反應發(fā)生條件溫度95℃，注意檢驗中設對照組。

1.3 觀察指標

觀察不同檢驗方式患者小腸結腸炎耶爾森菌檢出情況。本次培養(yǎng)法陰性、陽性判斷標準：以標準菌株作為陽性對照，若培養(yǎng)的菌株不具備標準菌的生化反應則為陰性，若出現(xiàn)與標準菌相同的反應則為陽性；PT-PCR法陰性、陽性判斷標準：根據(jù)反應前后熒光差值進行判斷，若樣品經(jīng)PCR擴增后未出現(xiàn)與預期相同大小的條帶，則判定為陰性，若擴增后顯現(xiàn)與預期相同大小條帶則為陽性。

1.4 統(tǒng)計學分析

以SPSS19.0系統(tǒng)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析，計數(shù)、計量資料分別以n（%）、（）表示，采用χ2或t檢驗，結果以P<0.05為有顯著差異。

2 結果

不同檢驗方式病菌檢出情況比較，觀察組病菌檢出陽性率為19.6%高于對照組陽性率10.3% ，觀察組用于病菌檢驗價值高，P<0.05，見表1。

3 討論

小腸結腸炎耶爾森菌是臨床病情較重的傳染性疾病，多發(fā)于秋冬季、嬰幼兒，其癥狀與其他腹瀉癥狀相似，難以鑒別易造成忽視，導致治療時臨床使用非敏感性抗菌藥治療，不僅使病情延誤，還致使患者腸道外并發(fā)癥（肝脾疾病、關節(jié)炎等）嚴重，引發(fā)不良預后情況[3]。因此如何有效診斷疾病得到臨床關注，目前臨床主要通過實驗室方法（如培養(yǎng)法）對患者糞便進行檢查來判斷。

本次研究中對照組檢驗陽性率為10.3%，結果表明對糞便中耶爾森菌以培養(yǎng)法檢驗具有一定積極性意義。其采用人工方法使細菌生長繁殖，操作簡便、流程少，可用肉眼觀察結果進行判斷。但觀察組本次檢驗陽性率為19.6%高于對照組，提示PT-PCR法用于病菌檢查檢出率較高。分析原因培養(yǎng)法檢測中需要嚴格執(zhí)行無菌操作，一旦受外界污染便會導致錯誤結果，同時其檢驗耗時較長，可能會延誤疾病治療，引發(fā)不良后果，而PT-PCR法利用生化技術，通過提取RNA，以mRNA為模板、反轉(zhuǎn)錄為cDNA，并對其行PCR擴增，從而檢測病菌基因表達[4]。此種檢查方法能對樣品進行定性、定量分析，臨床檢測特異性強、靈敏性高，且得到結果快速，用于耶爾森菌檢查檢出率高，便于臨床準確掌握患者感染情況，從而及時給予合理治療，促患者康復[5]。但PT-PCR法也存在一定缺點，其對操作者技術、檢測儀器設備要求較高，且有可能得到非目的片段，導致檢測中出現(xiàn)假陽性、假陰性，影響疾病診斷的準確度。

綜上所述， 臨床對腹瀉患者糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗使用PT-PCR法，具有較高的檢出率。

參考文獻

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