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    克癀膠囊對小鼠急性濕疹模型的作用觀察

    2018-10-29 09:23:38謝英華章明敏
    中國現(xiàn)代藥物應用 2018年19期
    關鍵詞:濕疹膠囊厚度

    謝英華 章明敏

    濕疹是由多種內外致病因素引起的一種具有滲出傾向的皮膚炎癥反應[1]。濕疹屬于中醫(yī)“濕瘡”范疇, 是皮膚科常見難治性疾?。?]。中藥治療濕疹不但毒副作用小, 且可以從多途徑抗炎、抑菌、消腫、止癢, 調節(jié)免疫失衡??笋ツz囊由三七、黃連、黃芩等多味中藥組成, 具有清熱解毒、化瘀散結的功效。故因新擬定適應證設計了對小鼠急性濕疹模型的影響試驗, 目的為考察克癀膠囊新的適應證, 初步評價對急性濕疹是否具有治療作用, 以研究克癀膠囊新的應用價值。現(xiàn)報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 藥物及試劑 供試藥:克癀膠囊(深圳市同安藥業(yè)有限公司, 國藥準字Z10960065);陽性對照藥1:皮敏消膠囊(沈陽澳華制藥股份有限公司, 國藥準字Z10950057);陽性對照藥2:復方甘草酸苷膠囊(濰坊中獅制藥有限公司, 國藥準字H20080677);2, 4-二硝基氯苯(DNCB)(廣州市丹安儀器儀表有限公司, 批號201604191);丙酮(衡陽市凱信化工試劑股份有限公司, 批號2016011400)。

    1.2 儀器 電子天平[德國賽多利斯公司(Sartorius), 型號BP211D]。電子天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公司,型號GL224-1SCN]。電子天平[上海舜宇恒平科學儀器有限公司, 型號MP12001]。普通冰箱[青島海爾股份有限公司,型號BCD-290W]。

    1.3 動物 檢疫合格SPF級KM小鼠79只, 雄性45只, 雌性34只,體重19.9~28.2 g。實驗動物質量合格證號No.44007200046862。生產單位:廣東省醫(yī)學實驗動物中心, 實驗動物生產許可證號:SCXK(粵)2013-0002。動物接收后進行檢疫及適應性觀察,1次/d, 連續(xù)觀察4 d, 內容包括一般精神狀態(tài)、皮毛、活動情況等。

    1.4 動物模型制作 取10只小鼠為正常對照組。其余69只小鼠試驗前1 d于小鼠背部選2 cm×2 cm大小區(qū)域用剃毛刀去毛。第1天, 以7% DNCB 100 μl外涂小鼠去毛背部致敏;第2天, 同法強化涂抹1次, 再次致敏;第7天, 在小鼠右耳雙側用移液槍外涂1% DNCB 20 μl激發(fā)。激發(fā)后肉眼觀察小鼠右耳明顯腫脹, 局部毛細血管擴張, 或有少許滲出物,提示急性濕疹模型成功建立。

    1.5 分組及給藥 造模動物因體重、造模制作成功程度淘汰9只小鼠, 其余造模成功的動物按體重分層隨機法隨機分為6組, 每組10只, 分別為模型對照組、皮敏消膠囊組(0.96 g/kg)、復方甘草酸苷膠囊組(0.045 g/kg)、克癀膠囊高劑量組(2.90 g/kg)、克癀膠囊中劑量組(1.45 g/kg)、克癀膠囊低劑量組(0.73 g/kg), 克癀膠囊高、中、低劑量分別相當于臨床等效劑量的2、1、0.5倍。激發(fā)后24 h, 各組小鼠每日分別灌胃給予相應藥物0.1 ml/10 g, 連續(xù)給藥3 d, 1次/d, 正常對照組和模型對照組給予純化水, 給藥期間用正常飼料喂養(yǎng)。給藥方案見表1。

    表1 各組小鼠急性濕疹模型給藥方案

    1.6 觀察指標 試驗期間, 觀察每組小鼠背部皮膚的濕疹情況(皮膚上明顯的紅腫、斑疹、糜爛和滲出), 每3天測量一次體重。末次給藥后24 h, 用游標卡尺測量雙耳厚度(取3個點測量后取均值), 計算厚度差;小鼠脫頸椎處死, 剪下雙耳, 用6 mm打孔器打下左右耳相同部位, 稱雙耳片重, 計算兩耳片重量之差。計算厚度差=右耳厚度-左耳厚度, 重量差=右耳重量-左耳重量。

    1.7 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù) ± 標準差()表示, 多組比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA), 兩兩比較采用LSD檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    模型對照組小鼠造模側耳部發(fā)紅、腫脹, 正常對照組小鼠兩耳色澤及厚度相近, 其余各給藥組右耳紅腫程度狀況不一。模型對照組小鼠左右耳厚度差大于正常對照組, 差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05), 說明KM小鼠急性濕疹模型成立??笋ツz囊高劑量組、皮敏消膠囊組、復方甘草酸苷膠囊組小鼠左右耳厚度差低于模型對照組, 差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。模型對照組小鼠的左右耳重量差大于正常對照組, 差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05), 說明KM小鼠急性濕疹模型成立??笋ツz囊高劑量組、皮敏消膠囊組、復方甘草酸苷膠囊組小鼠的左右耳厚度差低于模型對照組, 差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。注:與正常對照組比較,aP<0.05;與模型對照組比較,bP<0.05

    表2 各組小鼠左右耳厚度差和左右耳重量差比較( )

    表2 各組小鼠左右耳厚度差和左右耳重量差比較( )

    組別 只數(shù) 左右耳厚度差(mm) 左右耳重量差(mg)正常對照組 10 0.004±0.010 0.152±0.397模型對照組 10 0.059±0.011a 1.290±0.372a克癀膠囊高劑量組 10 0.045±0.019b 0.825±0.459b克癀膠囊中劑量組 10 0.051±0.014 0.908±0.515克癀膠囊低劑量組 10 0.056±0.014 1.016±0.727皮敏消膠囊組 10 0.017±0.011b 0.576±0.427b復方甘草酸苷膠囊組 10 0.022±0.011b 0.673±0.452b

    3 討論

    濕疹屬于中醫(yī)的“濕瘡”或“浸淫瘡”等范疇, 目前多認為是由于內外因素相互作用引起的炎癥反應, 類似于變應性接觸性皮炎, 屬于Ⅳ型超敏反應[3,4]。Ⅳ型超敏反應是由T細胞介導的免疫應答, 效應Th1細胞識別抗原后活化, 釋放多種細胞因子和趨化因子。其中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和淋巴毒素α(LTα)使局部血管內皮細胞黏附分子的表達增加, 促進單個核細胞至抗原存在部位聚集, 引起組織損傷;γ-干擾素(IFN-γ)和TNF-α可使巨噬細胞活化, 進一步釋放促炎癥細胞因子白細胞介素(IL)-1和IL-6等加重炎癥反應[5]。

    克癀膠囊由三七、黃芩、人工牛黃、人工麝香等多種中藥組成?,F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)三七總皂苷(PNS)可抑制INF-γ的分泌, 抑制TNF-α、IL-1β的表達, 并減少其信號傳遞[6], 促進Th2型細胞因子IL-4的分泌, 對Th1/Th2型細胞因子網(wǎng)絡失衡狀態(tài)有一定的調節(jié)作用[7], 能緩和緩激肽、組胺、5-羥色胺等導致的血管通透性增加等癥狀[8,9]。黃芩中黃芩苷能抑制TNF-α和IL-6的表達[10], 能夠抑制體內熱源物質生成[11], 提高細胞膜通透性, 增加膜的穩(wěn)定性, 對肥大細胞的細胞膜有保護作用, 從而阻止其脫顆粒, 減輕過敏反應[12]。因此, 克癀膠囊可能是通過以上機制來調節(jié)免疫系統(tǒng), 促進炎癥的轉歸。

    傳統(tǒng)中醫(yī)將急性和亞急性濕疹一般辨證為濕熱蘊結型和脾虛濕蘊型[2]。克癀膠囊由多種中藥配方組成, 適用于濕、熱、瘀所致各種疾病, 其中三七等功能活血化瘀, 黃芩、黃連、黃柏等功能清熱燥濕, 紅曲等功能健脾祛濕。目前使用抗組胺藥和皮質激素類藥物治療濕疹療效不令人滿意, 治療濕疹優(yōu)效的制劑較缺乏[13]??笋ツz囊高、中、低劑量組(2.90、1.45、0.73 g/kg)對小鼠急性濕疹模型引起的耳廓腫脹均有不同程度的改善作用, 其中以克癀膠囊高劑量組表現(xiàn)最好。本研究初步提示克癀膠囊對小鼠急性濕疹有一定的藥效學基礎, 實際對濕疹患者治療效果有待進一步臨床驗證。

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