二妙散免煎顆粒與傳統(tǒng)飲片中有效成分含量對比分析

劉德志，張世亮，章飛霞，林 君

(蒼南縣中醫(yī)院，浙江 蒼南 325800)

“二妙散”出自《丹溪心法》卷4，是由黃柏和蒼術(shù)組成的藥方，其中，黃柏擅清下焦?jié)駸幔n術(shù)擅燥濕健脾助運(yùn)，兩者相輔相成。中藥免煎顆粒作為一種新劑型，其有效成分含量測定是臨床應(yīng)用的關(guān)鍵。本研究旨在通過分析二妙散免煎顆粒與傳統(tǒng)飲片中有效成分的含量差異，為二妙散的臨床應(yīng)用提供參考。

一、材料

(一)儀器。

LC-2010A型高效液相色譜儀，HS6150型超聲波清洗器，CP225D分析天平。

(二)藥品與試劑。

黃柏飲片、麩炒蒼術(shù)飲片、二妙散免煎顆粒劑、鹽酸小檗堿對照品、蒼術(shù)素對照品、乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

二、方法與結(jié)果

(一)色譜條件。

1.鹽酸小檗堿。以十八烷基硅烷鍵合硅膠(ODS)為填充劑，乙腈-0.1%磷酸溶液(50：50)為流動相，檢測波長265 nm，柱溫25℃，流速1 ml/L，進(jìn)樣量10 μL，理論塔板數(shù)≥4000。

2.蒼術(shù)素。以O(shè)DS為填充劑，甲醇-水(79：21)為流動相，檢測波長340 nm，柱溫25 ℃，流速1 ml/L，進(jìn)樣量10 μL，理論塔板數(shù)≥5000。

(二)溶液的制備。

1.對照品溶液的制備。取鹽酸小檗堿和蒼術(shù)素適量，精密稱定，加甲醇溶液溶解，制成1.17 mg/ml的鹽酸小檗堿混合溶液和21.65 μg/ml的蒼術(shù)素混合溶液，二者在2.1色譜條件下均可完全出峰，且對稱性較好(見圖1、圖2)。

2.供試品溶液制備。①二妙散湯劑：取黃柏飲片、麩炒蒼術(shù)飲片各50 g，浸泡30 min，頭煎加水500 ml煎汁約200 ml，二煎加水300 ml煎汁約200 ml，洗滌藥渣，兩煎混合后，定容至500 ml，既得。②二妙散免煎顆粒劑：取等效劑量免煎顆粒(黃柏的飲片與免煎顆粒比為12∶1，麩炒蒼術(shù)的飲片與免煎顆粒比為4.5∶1)，兩者混合，加入40-50℃溫水溶解，并溫水定容至500 ml，既得。

圖1 鹽酸小檗堿對照品色譜圖

(三)方法學(xué)考察。

1.線性關(guān)系考察。精密吸取適量對照品溶液進(jìn)樣5次，鹽酸小檗堿的進(jìn)樣量依次為1μL、2μL、4μL、6μL、10μL，蒼術(shù)素的進(jìn)樣量依次為1μL、2μL、5μL、10μL、15μL，以各對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，鹽酸小檗堿的回歸方程為Y=7132.5X+676.89(R=0.999)，蒼術(shù)素的回歸方程為Y=215751X-9672.7(R=0.999)。結(jié)果顯示，鹽酸小檗堿為1.021 mg-10.21 mg時(shí)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，蒼術(shù)素為0.53μg-10.68μg時(shí)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.精密度試驗(yàn)。精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果顯示，鹽酸小檗堿峰面積的RSD為1.14%，蒼術(shù)素峰面積的RSD為0.973%，二者均小于3%，表明該方法的精密度良好。

3.穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取供試品溶液適量，分別于0h、2h、6h、8h、12h時(shí)進(jìn)行測定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，二妙散湯劑中鹽酸小檗堿和蒼術(shù)素峰面積的RSD分別為0.532%和1.157%，二妙散免蒸顆粒劑中鹽酸小檗堿和蒼術(shù)素峰面積的RSD為0.639%和1.113%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

4.重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取二妙散傳統(tǒng)飲片5份，每份2 g，測定并得到峰面積。結(jié)果顯示，鹽酸小檗堿和蒼術(shù)素峰面積的RSD分別為0.450%和1.322%，二者均小于3%，表明該方法的重復(fù)性較好。

5．加樣回收試驗(yàn)。精密稱取黃柏和蒼術(shù)飲片各50 g及同等劑量二妙散免煎顆粒，蒸煮后各取1 ml，加入等量的鹽酸小檗堿對照品和蒼術(shù)素對照品，按要求制成供試品溶液，測定6次，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，二妙散湯劑中鹽酸小檗堿和蒼術(shù)素的平均回收率分別為98.96%和99.03%，RSD分別為0.210%和1.523%，二妙散免煎顆粒劑中鹽酸小檗堿和蒼術(shù)素的平均回收率分別為98.73%和99.11%，RSD分別為0.131%和1.148%。

(四)樣品含量測定。

取黃柏飲片、蒼術(shù)飲片及二妙散免煎顆粒各4批，制成供試品溶液，測定二妙散免煎顆粒及傳統(tǒng)飲片中的鹽酸小檗堿和蒼術(shù)素含量(見附表)。

三、討 論

(一)色譜條件的選擇。

2015版《中國藥典》中對鹽酸小檗堿的紫外掃描采用265 nm或345 nm波長測定，蒼術(shù)中的蒼術(shù)素為340 nm。本研究前期對鹽酸小檗堿進(jìn)行紫外掃描發(fā)現(xiàn)，當(dāng)波長為265 nm時(shí)，鹽酸小檗堿吸收良好且峰形對稱性較好，故選擇265 nm作為鹽酸小檗堿的測定波長，340 nm作為蒼術(shù)素的測定波長。同時(shí)，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1]，初步選擇鹽酸小檗堿和蒼術(shù)素的流動相，通過對比出峰情況發(fā)現(xiàn)，以乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50)為鹽酸小檗堿流動相，以甲醇-水(79∶21)為蒼術(shù)素流動相，可較好分離樣品中的主峰與雜峰，靈敏度高且保留時(shí)間短，因此，本法可作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

附表 含量測定結(jié)果(mg/g)

(二)研究意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，二妙散免煎顆粒中的鹽酸小檗堿和蒼術(shù)素含量雖略高于傳統(tǒng)飲片，但無明顯差異。因此，研究者推測，二妙散免煎顆粒與傳統(tǒng)飲片具有同等療效[2]。但由于中藥成分相對復(fù)雜，傳統(tǒng)飲片共煎過程中有效成分會發(fā)生一系列絡(luò)合作用，可減毒增效，而免煎顆粒只是單味中藥的提取濃縮，因此，僅靠有效含量的檢測并不能完全肯定其藥效優(yōu)劣。