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    RNA解旋酶DDX3與轉(zhuǎn)移性乳腺癌預(yù)后關(guān)系的研究

    2018-10-24 09:30:38胡金飛胡望遠(yuǎn)
    中國婦幼健康研究 2018年10期
    關(guān)鍵詞:解旋酶轉(zhuǎn)移性放化療

    胡金飛,胡望遠(yuǎn)

    (金華市中心醫(yī)院放療科,浙江 金華 321000)

    乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一,該病的發(fā)病原因至今尚未明確,可能與患者的遺傳、環(huán)境因素、心理情志因素等有關(guān),近年發(fā)病率呈升高的趨勢,其死亡率占女性腫瘤的第二位,且呈低齡化發(fā)展[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)約10%的患者確診時(shí)已合并有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(TNM分期 Ⅳ期)[2],約30%的轉(zhuǎn)移性乳腺癌(metastatic breast cancer,MBC)患者生存期超過5年,10%的患者生存期超過10年[3]。針對已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者行原發(fā)病灶切除應(yīng)對遠(yuǎn)期療效具有積極影響,因此,本次研究入選的所有患者均進(jìn)行原發(fā)病灶的切除以期觀察預(yù)后情況。RNA解旋酶DDX3是DEAD box家族成員之一,參與mRNA的轉(zhuǎn)錄和翻譯,有研究報(bào)道其與多種惡性腫瘤如乳腺癌、肺癌、肝癌、結(jié)直腸癌等有關(guān),有可能作為潛在的治療靶點(diǎn)[4]。目前關(guān)于DDX3與轉(zhuǎn)移性乳腺癌的預(yù)后關(guān)系研究尚未見報(bào)道,因此,本文研究RNA解旋酶DDX3在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中的表達(dá)情況,為轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的預(yù)后判斷提供依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1一般資料

    本次研究的患者為2010年1月至2012年6月期間就診金華市中心醫(yī)院確診為轉(zhuǎn)移性乳腺癌的83例患者,年齡范圍35~74歲,平均年齡(51.25±2.41)歲,原發(fā)病灶經(jīng)穿刺活檢及病理組織切片檢測確認(rèn),轉(zhuǎn)移病灶經(jīng)計(jì)算機(jī)斷層掃描(computed tomography, CT)、核磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging, MRI)、放射性核素掃描確認(rèn)。所有患者書面簽署知情同意書并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過后開展本次研究。入選標(biāo)準(zhǔn):初次就診經(jīng)穿刺活檢及病理組織切片檢測確認(rèn)為轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者,術(shù)前未進(jìn)行過放化療,預(yù)計(jì)生存期3個(gè)月以上,具備完整的病例和臨床資料包括隨訪資料完整,無其他嚴(yán)重臟器功能及慢性疾病,血液學(xué)檢查各項(xiàng)指標(biāo)基本正常,東部腫瘤協(xié)作組(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG)評分≤3分。排除標(biāo)準(zhǔn):復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者,顱腦轉(zhuǎn)移者,術(shù)前進(jìn)行過放化療者,妊娠或精神病史者,哺乳期婦女,生存期預(yù)計(jì)3月以內(nèi)者,臨床資料和隨訪資料不完整者,不配合完整治療者,合并有其他惡性腫瘤及慢性疾病者。

    1.2 治療方法

    入選的83例轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者,均進(jìn)行原發(fā)病灶組織切除,術(shù)后19例患者僅進(jìn)行放療,其余64例患者均進(jìn)行相應(yīng)個(gè)體化放療+化療。所有入選的患者均采用電話或門診隨訪的方式,截止日期為2017年7月31日,平均隨訪時(shí)間為(47.3±2.7)個(gè)月,隨訪內(nèi)容主要為患者術(shù)后3年的復(fù)發(fā)情況、生活情況等。

    1.3 試驗(yàn)方法

    采用反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法檢測RNA解旋酶DDX3的表達(dá),具體方法為:于術(shù)中取83例患者的癌組織和癌旁組織各30mg,經(jīng)常規(guī)石蠟包埋后供檢測使用,檢測時(shí)經(jīng)液氮吹打成粉末狀,加Trizol試劑提取總RNA,經(jīng)分光光度計(jì)測總RNA后行逆轉(zhuǎn)錄,具體操作步驟按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Prime-ScriptTM,美國)說明書進(jìn)行,經(jīng)30℃10min、55℃35min反應(yīng)后置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?,PCR擴(kuò)增體系及擴(kuò)增條件為:1.5μL濃度為25mmol/L的MgCl2,2μL濃度為2.5mmol/L的dNTP,各1.25μL的PCR引物,2μL的DNA模板,0.5μL Tag DNA合成酶、2.5μL的10倍緩沖液,其余均用雙蒸水加至25μL,先于95℃預(yù)變性3min,再94℃變性30s,55℃退火37s,72℃延伸30s,共33個(gè)循環(huán),最后72℃延伸3min。DDX3的表達(dá)量采用2表示。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2結(jié)果

    2.1 RNA解旋酶DDX3在轉(zhuǎn)移性乳腺癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系

    通過RT-PCR檢測結(jié)果顯示,RNA解旋酶DDX3在轉(zhuǎn)移性乳腺癌組織中的表達(dá)(0.49±0.06)顯著高于癌旁組織的表達(dá)量(0.23±0.02)(P<0.05)。同時(shí),RNA解旋酶DDX3在轉(zhuǎn)移部位、轉(zhuǎn)移部位數(shù)、雌激素受體/孕激素受體(estrogen receptor/progesterone receptor,ER/PR)狀態(tài)臨床因素中表達(dá)存在明顯差異(均P<0.05),而在年齡、是否絕經(jīng)、癌組織類型臨床因素中不存在明顯差異(均P>0.05),見圖1和表1。

    圖1 RNA解旋酶DDX3在轉(zhuǎn)移性乳腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況

    Fig.1 Expression of RNA helicase DDX3 in metastatic breast cancer tissues and adjacent tissues

    因素例數(shù)(n)DDX3表達(dá)量t/FP年齡(歲)1.4320.149 <50310.49±0.04 ≥50520.43±0.04是否絕經(jīng)0.9140.206 是630.49±0.06 否200.47±0.03癌組織類型1.1070.163 浸潤性導(dǎo)管癌450.50±0.04 浸潤性小葉癌270.49±0.03 其他110.49±0.02轉(zhuǎn)移部位8.0130.003 軟組織170.40±0.03 淋巴結(jié)230.54±0.04 內(nèi)臟轉(zhuǎn)移210.39±0.03 骨轉(zhuǎn)移220.37±0.03轉(zhuǎn)移部位數(shù)9.2270.001 1~2510.37±0.04 ≥3320.52±0.04ER/PR狀態(tài)8.2460.002 陰性340.39±0.03 陽性490.52±0.04

    2.2 DDX3的表達(dá)水平與轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

    DDX3的表達(dá)水平≥0.45在術(shù)后3年的復(fù)發(fā)率明顯高于其表達(dá)水平<0.45者(P<0.05)。同時(shí),DDX3的表達(dá)水平≥0.45者的平均復(fù)發(fā)時(shí)間也短于其表達(dá)水平<0.45者,兩組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    2.3 ROC曲線分析DDX3的表達(dá)水平與轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者復(fù)發(fā)診斷的預(yù)測價(jià)值

    根據(jù)ROC曲線分析得到:RNA解旋酶DDX3的表達(dá)對轉(zhuǎn)移性乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)診斷的曲線下面積AUC為0.813(95%CI:0.702~0.906),靈敏度為0.787,特異度為0.869,具體見圖2。

    圖2 ROC曲線分析DDX3的表達(dá)水平與轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者復(fù)發(fā)診斷的預(yù)測價(jià)值研究

    Fig.2 Predictive value of DDX3 expression on recurrence of metastatic breast cancer analyzed by ROC curve

    2.4轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者臨床病理資料與生存率關(guān)系的單因素分析

    轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者術(shù)后3年、5年的生存率分別為45.85%、25.37%,將患者臨床資料與生存率進(jìn)行單因素分析結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)移部位、轉(zhuǎn)移部位數(shù)、術(shù)后輔助放化療、DDX3表達(dá)量是影響患者3年、5年生存率的影響因素(P<0.05),具體見表3、圖3。

    Table 2 The relationship between DDX3 expression level and recurrence rate and recurrence time of metastatic breast cancer

    表3 轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者臨床病理資料與生存率關(guān)系的單因素分析[n(%)]

    (轉(zhuǎn)下表)

    (續(xù)上表)

    因素例數(shù)(n) 3年生存情況(n=38) 5年生存情況(n=21) 生存率χ2P生存率χ2P癌組織類型1.2180.1161.1030.205 浸潤性導(dǎo)管癌4520(44.44)15(33.33) 浸潤性小葉癌2712(44.44)5(18.52) 其他116(54.55)1(9.09)轉(zhuǎn)移部位8.4330.0049.2160.002 軟組織177(41.17)2(11.76) 淋巴結(jié)2311(47.83)9(39.13) 內(nèi)臟轉(zhuǎn)移2113(61.90)8(38.09) 骨轉(zhuǎn)移227(31.82)2(9.09)轉(zhuǎn)移部位數(shù)5.8730.0255.7970.028 1~25127(52.94)18(35.29) ≥33211(34.38)3(9.38)ER/PR狀態(tài)3.1120.0652.5320.074 陰性3418(52.94)11(32.35) 陽性4920(40.82)10(20.41)術(shù)后輔助放化療6.1140.0215.8400.032 放療+化療6429(45.31)19(29.69) 放療199(47.37)2(10.53)DDX3的表達(dá)量8.7740.0036.8930.011 ≥0.455119(37.25)9(17.65) <0.453219(59.38)12(37.50)

    圖3利用Kaplan-Meier法分析影響轉(zhuǎn)移性乳腺癌生存率的影響因素

    Fig. 3 Influencing factors of survival rate for metastatic breast cancer analyzed by Kaplan-Meier

    2.5轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者預(yù)后多因素分析

    將患者臨床病理資料與患者5年生存情況單因素分析中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素作為因變量,預(yù)后5年生存情況為自變量進(jìn)行Cox風(fēng)險(xiǎn)比例回歸模型分析,分析結(jié)果得到轉(zhuǎn)移部位、轉(zhuǎn)移部位數(shù)、DDX3表達(dá)量升高是轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,術(shù)后進(jìn)行輔助放化療是患者預(yù)后的保護(hù)因素(P<0.05),見表4。

    表4 轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者預(yù)后多因素分析

    3討論

    3.1乳腺癌治療和預(yù)后判斷進(jìn)展

    乳腺癌是女性中常見的惡性腫瘤,在我國每年有近17萬女性罹患乳腺癌,近年該病的發(fā)病率和死亡率均明顯上升[5]。據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì),乳腺癌易發(fā)在45歲以上的患者尤以絕經(jīng)后女性為多見,70%以上組織學(xué)類型為浸潤性導(dǎo)管癌[6],本次入選的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中絕大多數(shù)以浸潤性導(dǎo)管癌為主且以絕經(jīng)后女性為主,部分符合既往的主流報(bào)道。但有研究指出[7],年輕患者易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,經(jīng)治療后極易出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,但是我們本次研究通過對入選患者的分析發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者仍以50歲以上患者居多,這與既往的報(bào)道不一致。Puig-Vives等[8]和Elkablawy等[9]報(bào)道指出疾病的分子分型是預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,本次研究中DDX3的表達(dá)水平在ER/PR陰性與陽性組間表達(dá)存在差異,但是患者3年、5年生存率在ER/PR陰性與陽性組間無明顯差異,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者主要以淋巴轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移及內(nèi)臟轉(zhuǎn)移為主,轉(zhuǎn)移部位數(shù)較多者預(yù)后明顯較差。

    3.2 DDX3對乳腺癌臨床預(yù)后的判斷作用

    DDX3是DEAD盒蛋白RNA解旋酶家族一員,參與RNA代謝的重要過程,已有研究顯示它與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),參與細(xì)胞周期及凋亡的調(diào)控,在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯高于癌旁組織[4,10]。本研究顯示DDX3在轉(zhuǎn)移性乳腺癌的癌組織中表達(dá)明顯高于癌旁組織(P<0.05),可能的機(jī)制是乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí),癌細(xì)胞的細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡過程失常,導(dǎo)致參與細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡調(diào)控的DDX3表達(dá)上調(diào)。此外,DDX3的表達(dá)水平≥0.45在術(shù)后3年的復(fù)發(fā)率明顯高于其表達(dá)水平<0.45者,同時(shí),DDX3的表達(dá)水平≥0.45者的平均復(fù)發(fā)時(shí)間也短于其表達(dá)水平<0.45者,提示DDX3的高表達(dá)預(yù)示轉(zhuǎn)移性乳腺癌的預(yù)后較差。臨床病理資料與3年、5年生存率的單因素分析結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)移部位、轉(zhuǎn)移部位數(shù)、術(shù)后輔助放化療、DDX3表達(dá)量是影響患者3年、5年生存率的影響因素(P<0.05),但Cox多因素分析結(jié)果得到術(shù)后輔助放化療是患者預(yù)后的保護(hù)因素,而轉(zhuǎn)移部位、轉(zhuǎn)移部位數(shù)、DDX3表達(dá)量是患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。 已有報(bào)道證實(shí),疾病的臨床分期每增加一期,患者死亡的風(fēng)險(xiǎn)便增加數(shù)倍[2,11]。本次研究中轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者已處于晚期,DXX3的診斷效果依然明顯。利用ROC曲線分析得到DDX3對轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者術(shù)后3年復(fù)發(fā)的診斷具有良好的靈敏度和特異度。

    綜合以上分析結(jié)果,對于轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者檢測其DDX3的表達(dá)對患者預(yù)后的評估具有重要的意義,可為臨床醫(yī)生選擇更優(yōu)的治療方案提供參考依據(jù),也為臨床開發(fā)靶向治療藥物提供一定的方向。

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