• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    CRP熒光免疫層析定量檢測(cè)儀

    2018-10-23 08:30:22楊建鵬高躍明魏建崇陳建國(guó)姜海燕
    電氣技術(shù) 2018年10期
    關(guān)鍵詞:層析檢測(cè)儀灰度

    楊建鵬 高躍明 魏建崇 陳建國(guó) 姜海燕,5

    ?

    CRP熒光免疫層析定量檢測(cè)儀

    楊建鵬1,2高躍明1,2魏建崇2,3陳建國(guó)2,4姜海燕2,4,5

    (1. 福州大學(xué)物理與信息工程學(xué)院,福州 350108; 2. 福建省醫(yī)療器械和醫(yī)藥技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福州 350108; 3. 江夏學(xué)院電子信息科學(xué)學(xué)院,福州 350116; 4. 福州大學(xué)電氣工程與自動(dòng)化學(xué)院,福州 350108; 5. 福建省激光精密加工工程技術(shù)研究中心,福建 莆田 351100)

    本文研制開(kāi)發(fā)一套用于血清C-反應(yīng)蛋白(CRP)定量檢測(cè)的熒光免疫層析試紙檢測(cè)設(shè)備。運(yùn)用CMOS圖像傳感器采集熒光試條圖像信息,使用數(shù)學(xué)形態(tài)學(xué)方法濾除圖像噪聲,使用Otsu圖像閾值分割算法得到圖像有用信息進(jìn)而計(jì)算得到檢測(cè)結(jié)果。本文采用多種不同濃度的熒光免疫層析試紙條進(jìn)行檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,該CRP熒光免疫層析定量檢測(cè)儀的重復(fù)性和線性度良好,<3.4%,擬合優(yōu)度2>99%。結(jié)論:該檢測(cè)儀有著良好的性能,能夠準(zhǔn)確檢測(cè)CRP的數(shù)值。

    CRP;熒光免疫層析;圖像

    C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein, CRP)是由人體體內(nèi)的肝臟在應(yīng)激狀態(tài)下生成的蛋白質(zhì)[1]。當(dāng)人體發(fā)生組織損傷、急性炎癥、細(xì)菌性感染、冠心病、惡性腫瘤等情況時(shí),CRP的含量會(huì)隨著病情的嚴(yán)重而升高[2-5]。由于機(jī)體的CRP濃度與炎癥之間存在相關(guān)性,因此醫(yī)學(xué)上將CRP廣泛應(yīng)用于衡量或監(jiān)測(cè)體內(nèi)感染、組織損傷以及某些炎癥疾病的發(fā)展,尤其是作為心血管疾病預(yù)測(cè)和愈后評(píng)價(jià)的標(biāo)志分子[6]。當(dāng)人體發(fā)生病原菌感染時(shí),由于身體的應(yīng)激反應(yīng)而導(dǎo)致CRP發(fā)生較大的變化,通過(guò)監(jiān)測(cè)CRP的含量,可以達(dá)到診斷感染的作用[8]。

    傳統(tǒng)CRP檢測(cè)采用單向免疫擴(kuò)散法(SRID)[7-8]、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELIS)[9]等方法,但單項(xiàng)免疫擴(kuò)散法的檢測(cè)敏感性較差、在抗原過(guò)量時(shí)容易出現(xiàn)假陰性,準(zhǔn)確性欠佳;酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法采用酶作為標(biāo)記物,缺點(diǎn)是酶標(biāo)記物容易變質(zhì)、檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)[2]。

    熒光免疫層析方法以熒光標(biāo)記物作為示蹤劑標(biāo)記,通過(guò)光學(xué)儀器檢測(cè)待測(cè)樣本,直接或間接獲取待測(cè)物有用信息,實(shí)現(xiàn)對(duì)特定物質(zhì)的定量檢測(cè)。本研究針對(duì)傳統(tǒng)CRP檢測(cè)方法的不足,采用基于圖像處理的熒光免疫層析方法,開(kāi)發(fā)一款用于檢測(cè)CRP的熒光免疫層析定量檢測(cè)儀。

    1 實(shí)現(xiàn)方法

    1.1 系統(tǒng)總體組成結(jié)構(gòu)及工作原理

    在CRP樣本溶液滴入檢測(cè)試條后,其與熒光標(biāo)記物發(fā)生特異性反應(yīng)。經(jīng)反應(yīng)后,熒光試條檢測(cè)窗口上的檢測(cè)帶(T帶)與質(zhì)控帶(C帶)含有較多的熒光標(biāo)記物,因此被激發(fā)出高強(qiáng)度的熒光強(qiáng)度,而其他區(qū)域的熒光標(biāo)記物較少,所以被激發(fā)出的熒光強(qiáng)度較微弱。T帶的熒光強(qiáng)度直接反應(yīng)了CRP樣本溶液的濃度值,C帶則是對(duì)T帶起對(duì)照的作用,消除環(huán)境等因素的影響。

    檢測(cè)儀采用圖像式檢測(cè)方法,將充分反應(yīng)后的熒光免疫層析試條放入儀器檢測(cè),在激發(fā)光源的照射下發(fā)出熒光,通過(guò)圖像傳感器采集熒光試條圖像信息,并將其傳輸給圖像處理設(shè)備,該設(shè)備對(duì)熒光試條圖像信息進(jìn)行處理。

    圖像傳感器采用等間隔均勻量化,圖像的灰度值正比于設(shè)備光敏單元的輸出信號(hào)。因此,將檢測(cè)線的灰度值與控制線的灰度值的比值作為特征值/,特征值與待測(cè)溶液濃度成正比。計(jì)算T帶與C帶灰度值的比值/,將得到的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)刻度曲線進(jìn)行對(duì)比,即可得到CRP樣本溶液的濃度值,達(dá)到定量檢測(cè)的功能。檢測(cè)儀總體組成結(jié)構(gòu)如圖1所示。

    圖1 CRP熒光免疫層析定量檢測(cè)儀總體組成結(jié)構(gòu)

    1.2 硬件系統(tǒng)

    本文選用Eu3+螯合劑作為熒光標(biāo)記物,Eu3+螯合劑熒光光譜中吸收波長(zhǎng)范圍較寬,在波長(zhǎng)為230~370mm的光線激發(fā)下,發(fā)射出610nm的熒光信號(hào)??紤]熒光標(biāo)記物的特性,采用TH-UV365T3WA- 3535-B紫外光LED作為激發(fā)光源,該光源采用貼片式封裝,燈珠呈半球形,具有顯色性高、穩(wěn)定性好、體積小、能耗低的特點(diǎn)。

    圖像傳感器主要分為CCD圖像傳感器和CMOS圖像傳感器,二者均有各自的優(yōu)點(diǎn)。CCD圖像傳感器具有靈敏度高、噪點(diǎn)低的優(yōu)點(diǎn),但是其存在成本高、功耗高的缺點(diǎn);CMOS圖像傳感器具有低成本、低功耗以及高整合度的優(yōu)點(diǎn),但噪聲性能不及CCD圖像傳感器。綜合成本、成像質(zhì)量等因素考慮,檢測(cè)儀選用華谷動(dòng)力公司研發(fā)設(shè)計(jì)UF系列的WP- UF500M型號(hào)的CMOS圖像傳感器采集圖像,傳感器具有500萬(wàn)像素,自帶32MB緩存,具有快速穩(wěn)定的圖像傳輸速度。

    檢測(cè)儀光路結(jié)構(gòu)采用雙邊斜射式檢測(cè)系統(tǒng),保證激發(fā)光源能夠均勻照射熒光免疫層析試條。檢測(cè)裝置如圖2所示。裝置由波長(zhǎng)為365nm的LED激發(fā)光源、CMOS攝像機(jī)和透射波長(zhǎng)分別為365nm與610nm的濾光片組成,濾光片可以濾除無(wú)關(guān)波長(zhǎng)的光線。激發(fā)光源照射在C帶和T帶上,產(chǎn)生波長(zhǎng)為610nm的發(fā)射光,經(jīng)過(guò)濾波片進(jìn)入CMOS圖像傳感器,傳輸?shù)綀D像處理設(shè)備。

    圖2 CRP熒光免疫層析檢測(cè)儀

    1.3 軟件設(shè)計(jì)

    圖像處理設(shè)備接收到從試條圖像獲取設(shè)備傳過(guò)來(lái)的熒光試條圖像,對(duì)圖像進(jìn)行處理,處理過(guò)程如圖3所示。

    圖3 熒光試條圖像處理流程圖

    圖像獲取設(shè)備在采集圖像信號(hào)的過(guò)程中因環(huán)境等因素會(huì)出現(xiàn)噪聲[10],這些噪聲對(duì)檢測(cè)結(jié)果會(huì)造成不利影響,導(dǎo)致出現(xiàn)誤差[11]。因此在圖像分割之前,必須對(duì)原始圖像信號(hào)進(jìn)行濾除噪聲的處理。根據(jù)圖像特性,本文利用數(shù)學(xué)形態(tài)學(xué)方法[12]濾除噪聲,先進(jìn)行開(kāi)運(yùn)算,平滑圖像輪廓,切割細(xì)線,去除邊緣毛刺和異常值,磨光圖像外邊界,再進(jìn)行閉運(yùn)算,在圖像中連接較短的斷點(diǎn),添補(bǔ)小間隙,并對(duì)圖像的內(nèi)部邊沿進(jìn)行平滑。

    鑒于試條C帶和T帶分別在試條的兩側(cè),因此對(duì)圖像的處理分為左右兩部分,分別采用Otsu閾值分割準(zhǔn)則[13]。該算法概述如下:

    設(shè)圖像的灰度級(jí)數(shù)為,每個(gè)灰度值出現(xiàn)的概率為,閾值將不同的灰度值分成目標(biāo)A(灰度值為0~)與背景B(灰度值為+1~-1)。

    則目標(biāo)A和背景B的出現(xiàn)的概率分別為

    目標(biāo)A和背景B的灰度均值分別為

    圖像總的灰度均值為

    目標(biāo)和背景的類間方差:

    因此,最佳判別閾值需滿足

    用Otsu閾值分割算法所得的閾值對(duì)熒光試條圖像進(jìn)行分割,得到檢測(cè)線和控制線的灰度值,分割效果如圖4所示。

    為檢驗(yàn)分割效果,本文分別使用迭代法與Otsu分割算法對(duì)不同濃度的熒光試條圖像進(jìn)行分割,并使用區(qū)域一致性作為分割算法的對(duì)比,比較結(jié)果見(jiàn)表1。

    表1 分割算法的區(qū)域一致性

    分別采用1.95mg/mL、7.81mg/mL、62.5mg/mL三種試條進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比。從表1對(duì)比中看出,Otsu的區(qū)域一致性優(yōu)于迭代分割算法。

    2 實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)分析

    2.1 重復(fù)性

    重復(fù)性原則是科學(xué)研究最重要的標(biāo)準(zhǔn)之一。一般情況下,科學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究應(yīng)當(dāng)是可重復(fù)的,這意味著實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有客觀性[14]。尤其對(duì)于檢測(cè)類儀器來(lái)說(shuō),可重復(fù)性原則是衡量其儀器性能的重要指標(biāo)之一。

    分別選取1.95mg/mL、7.81mg/mL、31.25mg/mL、125mg/mL四種濃度的熒光免疫層析試條作為檢測(cè)試條。將四種不同濃度的熒光免疫層析試條分別送入CRP熒光免疫層析試條檢測(cè)儀檢測(cè)。為保證實(shí)驗(yàn)室的可靠性,由同一測(cè)試人員在相同環(huán)境下用同樣的儀器對(duì)同一根待測(cè)試條進(jìn)行5次重復(fù)檢測(cè),并將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄下來(lái),見(jiàn)表2。

    表中采用變異系數(shù)()作為儀器重復(fù)性的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

    式中,()表示測(cè)試數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)差,()表示測(cè)試數(shù)據(jù)的平均值。從表2可以看出,檢測(cè)儀的檢測(cè)結(jié)果值在0~3.35%之間。

    表2 CRP熒光試條檢測(cè)結(jié)果

    2.2 線性度

    使用最小二乘法對(duì)不同濃度CRP溶液的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行曲線擬合,擬合結(jié)果如圖5所示。

    圖5 儀器的檢測(cè)結(jié)果線性度

    線性關(guān)系為

    =0.0237+0.0572 (9)

    式中,表示特征值/;表示待測(cè)液濃度,直線擬合優(yōu)度2>0.99,實(shí)驗(yàn)表明,在可測(cè)范圍內(nèi),儀器的線性度良好。

    3 結(jié)論

    CRP作為人體檢測(cè)炎癥的標(biāo)志物,在血液生化檢測(cè)中的作用越來(lái)越大[15]。本研究克服傳統(tǒng)CRP檢測(cè)方法的不足,設(shè)計(jì)基于圖像處理的熒光免疫層析試條檢測(cè)儀。本文詳細(xì)闡述了檢測(cè)儀檢測(cè)裝置的硬件設(shè)計(jì)與軟件設(shè)計(jì)。針對(duì)熒光試條圖像信號(hào),采用數(shù)學(xué)形態(tài)學(xué)濾除噪聲,Otsu閾值分割方法獲取圖像信息,得到定量檢測(cè)結(jié)果。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,本文研制的檢測(cè)儀的檢測(cè)結(jié)果變異系數(shù)值小于3.4%,擬合優(yōu)度大于99%,與德國(guó)Qiagen公司研發(fā)的ESE檢測(cè)儀相比,值無(wú)太大差異,而線性擬合優(yōu)度更高。這表明檢測(cè)儀重復(fù)性高,線性度好。除此之外,為了能進(jìn)一步提高檢測(cè)系統(tǒng)的便攜性,還可研發(fā)一個(gè)檢測(cè)終端系統(tǒng),擺脫檢測(cè)儀對(duì)于PC的依賴,移植檢測(cè)系統(tǒng)到終端上,進(jìn)一步減小儀器的體積。

    [1] Li Y P, Mold C, Du Clos T W. Sublytic complement attack exposes C-reactive protein binding sites on cell membranes[J]. Journal of Immunology (Baltimore, Md.: 1950), 1994, 152(6): 2995-3005.

    [2] 陳俊蕾, 張唯, 李新霞, 等. 背景熒光猝滅-免疫層析法檢測(cè)C-反應(yīng)蛋白[J]. 高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào), 2018, 39(1): 41-47.

    [3] Moutachakkir M, Lamrani Hanchi A, Baraou A, et al. Immunoanalytical characteristics of C-reactive protein and high sensitivity C-reactive protein[J]. Annales de Biologie Clinique, 2017, 75(2): 225-229.

    [4] Dow C A, Templeton D L, Lincenberg G M, et al. Elevations in C-reactive protein and endothelin-1 system activity in humans[J]. Life Sciences, 2016, 159: 66-70.

    [5] 楊善敏, 劉少忠. 冠心病患者C反應(yīng)蛋白測(cè)定的臨床意義[J]. 安徽醫(yī)學(xué), 2009, 30(8): 937-938.

    [6] 姚振宇, 武一, 吉尚戎. CRP變構(gòu)及其促炎機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)科學(xué): 生命科學(xué), 2017(8): 863-870.

    [7] Ghazavi A, Mosayebi G, Solhi H, et al. Serum markers of inflammation and oxidative stress in chronic opium (Taryak) smokers[J]. Immunology Letters, 2013, 153(1/2): 22-26.

    [8] Tagata K, Yokoyama S, Ginbo T, et al. Quantitative capillary reversed passive latex agglutination test for C-reactive protein (CRP) in the dog[J]. Veterinary Research Communications, 1996, 20(1): 21-30.

    [9] Zhang Xiaolu, Liu Juntian, Pang Xiaoming, et al. Eplerenone inhibits aldosterone-induced CRP Gener- ation in rat vascular smooth muscle cells by regulating the MR-ROS-ERK1/2 signal pathway[J]. European Journal of Inflammation, 2017, 15(3): 210- 218.

    [10] 艾建勇, 金立軍. 基于紫外圖像的接觸網(wǎng)棒瓷絕緣子污穢狀態(tài)檢測(cè)[J]. 電工技術(shù)學(xué)報(bào), 2016, 31(10): 112-118.

    [11] 王欣, 孫鵬. 智能變電站中指針式儀表圖像自動(dòng)識(shí)別方法[J]. 電氣技術(shù), 2016, 17(5): 7-10.

    [12] 申洪明, 黃少鋒, 費(fèi)彬, 等. 基于數(shù)學(xué)形態(tài)學(xué)的換相失敗檢測(cè)新方法[J]. 電工技術(shù)學(xué)報(bào), 2016, 31(4): 170-177.

    [13] 喬玲玲. 圖像分割算法研究及實(shí)現(xiàn)[D]. 武漢: 武漢理工大學(xué), 2009.

    [14] 周莉. 單相電能表自動(dòng)檢定流水線系統(tǒng)的應(yīng)用研究[J]. 電氣技術(shù), 2014, 15(2): 59-63.

    [15] 林婉媚, 彭成豐. 血液生化指標(biāo)CRP在臨床上的檢測(cè)意義[J]. 中國(guó)社區(qū)醫(yī)師: 醫(yī)學(xué)專業(yè), 2010(20): 181.

    The CRP fluorescence immunochromatography quantitative detector

    Yang Jianpeng1,2Gao Yueming1,2Wei Jianchong2,3Chen Jianguo2,4Jiang Haiyan2,4,5

    (1. College of Physics and Telecommunication Engineering, Fuzhou University, Fuzhou 350108; 2. Key Laboratory of Medical Instrumentation and Pharmaceutical Technology of Fujian Province, Fuzhou 350108; 3. College of electrics and information science, Fujian Jiangxia University, Fuzhou 350116; 4. College of Electrical Engineering and Automation, Fuzhou University, Fuzhou 350108; 5. Precision Machining Engineering Technology Research Center, Putian, Fujian 351100)

    In this study, a set of fluorescence immunochromatographic quantitative detector for serum c-reactive protein (CRP) is developed. The image information of fluorescent strips is collected by using CMOS image sensor, and the image noise is filtered out by the method of mathematical morphology. The Otsu threshold segmentation algorithm is used to obtain the information of the image and to calculate the results. In this study, a number of different concentrations of fluorescence immunochromatographic strips are used to detect. The result shows that the CRP fluorescence immunochromatographic detector has good repeatability, and linearity.<3.4% and fit2>99%. The detector has good performance and can accurately detect CRP value.

    CRP; fluorescence immunochromatography; image

    2018-03-07

    楊建鵬(1991-),福建省漳州市人,碩士研究生,主要從事醫(yī)學(xué)檢測(cè)與處理的研究工作。

    福建省科技重大專項(xiàng)(2014YZ0001)

    猜你喜歡
    層析檢測(cè)儀灰度
    采用改進(jìn)導(dǎo)重法的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)灰度單元過(guò)濾技術(shù)
    犬細(xì)小病毒量子點(diǎn)免疫層析試紙條的研制
    基于灰度拉伸的圖像水位識(shí)別方法研究
    一種防雷接地裝置的便攜式檢測(cè)儀電路
    電子制作(2019年7期)2019-04-25 13:16:56
    基于最大加權(quán)投影求解的彩色圖像灰度化對(duì)比度保留算法
    基于555振蕩器的地溝油頻率檢測(cè)儀
    電子制作(2017年20期)2017-04-26 06:57:32
    基于灰度線性建模的亞像素圖像抖動(dòng)量計(jì)算
    A族鏈球菌膠體金免疫層析試紙條的制備及應(yīng)用
    巧用故障檢測(cè)儀中的Reset功能
    新型B族鏈球菌膠體金免疫層析試紙條的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)
    精品国产亚洲在线| 色吧在线观看| 激情在线观看视频在线高清| 欧美最新免费一区二区三区 | 日韩免费av在线播放| 嫩草影视91久久| 日本一本二区三区精品| 免费在线观看成人毛片| 国产一区二区在线av高清观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 一级毛片久久久久久久久女| 女同久久另类99精品国产91| 人妻久久中文字幕网| 欧美成人a在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产av麻豆久久久久久久| 欧美成人a在线观看| 在线免费观看的www视频| 男女之事视频高清在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美色欧美亚洲另类二区| 一夜夜www| 免费高清视频大片| 国产黄a三级三级三级人| 床上黄色一级片| 亚洲国产欧美人成| 国产黄a三级三级三级人| avwww免费| 亚洲精品在线美女| 午夜福利欧美成人| 国产成人福利小说| 成年女人永久免费观看视频| 最近中文字幕高清免费大全6 | 精品一区二区免费观看| avwww免费| 色在线成人网| 国产精品,欧美在线| 日本黄大片高清| 国产亚洲欧美98| 亚洲成av人片在线播放无| 哪里可以看免费的av片| 丁香欧美五月| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| av在线蜜桃| 欧美激情久久久久久爽电影| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品99久久久久久久久| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产一区二区激情短视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 五月玫瑰六月丁香| 久久久久久久久久成人| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美黑人巨大hd| 在线免费观看的www视频| 日韩欧美三级三区| 亚洲最大成人中文| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲精品一区av在线观看| 久久国产乱子免费精品| www.色视频.com| 日韩欧美 国产精品| av在线蜜桃| 波多野结衣高清无吗| 此物有八面人人有两片| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲精品亚洲一区二区| 免费在线观看影片大全网站| 女同久久另类99精品国产91| 国产精品久久久久久久电影| 精品福利观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 99久久九九国产精品国产免费| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲午夜理论影院| 91在线观看av| 亚洲激情在线av| 久久人人爽人人爽人人片va | 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 热99re8久久精品国产| 国产三级在线视频| 久久精品国产亚洲av天美| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲av电影在线进入| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品久久久久久精品电影| 丁香欧美五月| 国产三级中文精品| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 精品一区二区三区人妻视频| 内地一区二区视频在线| 国产黄色小视频在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产一级毛片七仙女欲春2| 婷婷色综合大香蕉| 我要看日韩黄色一级片| 日本 欧美在线| 99热6这里只有精品| 国产精品永久免费网站| 美女被艹到高潮喷水动态| 高清在线国产一区| 级片在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看 | av在线观看视频网站免费| 18+在线观看网站| 夜夜爽天天搞| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产69精品久久久久777片| 欧美成人免费av一区二区三区| 老司机福利观看| 可以在线观看的亚洲视频| 毛片女人毛片| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 51午夜福利影视在线观看| 久久精品影院6| 久9热在线精品视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 精品久久国产蜜桃| 亚洲欧美日韩高清专用| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 看十八女毛片水多多多| 国产色爽女视频免费观看| 99热6这里只有精品| 丰满乱子伦码专区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 丰满乱子伦码专区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久国产乱子免费精品| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久精品91蜜桃| 动漫黄色视频在线观看| 热99re8久久精品国产| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 老鸭窝网址在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| aaaaa片日本免费| 国产成人aa在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 级片在线观看| 国产综合懂色| 色精品久久人妻99蜜桃| 免费大片18禁| 午夜精品一区二区三区免费看| 99久久成人亚洲精品观看| 内地一区二区视频在线| 亚洲天堂国产精品一区在线| 成人无遮挡网站| 色吧在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久热精品热| 久久中文看片网| 国产伦精品一区二区三区四那| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久久久国内视频| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲五月婷婷丁香| 69av精品久久久久久| 精品午夜福利在线看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲成av人片在线播放无| 极品教师在线视频| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲av不卡在线观看| 在线看三级毛片| 深爱激情五月婷婷| 欧美乱妇无乱码| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲人成伊人成综合网2020| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 嫩草影院新地址| 我要搜黄色片| 精品久久国产蜜桃| 精品国产三级普通话版| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲熟妇熟女久久| 国产高清激情床上av| 国产高清视频在线观看网站| 少妇丰满av| 国产精品影院久久| 日本成人三级电影网站| 国产精品久久久久久久久免 | 嫩草影院入口| 婷婷亚洲欧美| 黄片小视频在线播放| 色5月婷婷丁香| 国产精品伦人一区二区| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产私拍福利视频在线观看| 好男人电影高清在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲第一电影网av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久久久国内视频| 免费观看人在逋| 俺也久久电影网| 男人的好看免费观看在线视频| 午夜影院日韩av| 一本综合久久免费| 日韩国内少妇激情av| 国产伦一二天堂av在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久久久免费精品人妻一区二区| 赤兔流量卡办理| 国产激情偷乱视频一区二区| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 一级av片app| 一级av片app| 久久久国产成人精品二区| 成人亚洲精品av一区二区| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 国产私拍福利视频在线观看| 日本五十路高清| 黄色日韩在线| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 脱女人内裤的视频| 女人被狂操c到高潮| 男女视频在线观看网站免费| 久久久久久久精品吃奶| 欧美成人一区二区免费高清观看| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲av免费高清在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 久久久国产成人免费| 国产单亲对白刺激| 天堂影院成人在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 少妇高潮的动态图| 我的老师免费观看完整版| 午夜福利18| 午夜a级毛片| 亚洲自拍偷在线| 午夜两性在线视频| 欧美最新免费一区二区三区 | 色综合婷婷激情| 搞女人的毛片| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 757午夜福利合集在线观看| 国产精品一区二区性色av| www日本黄色视频网| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 精品人妻1区二区| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲美女视频黄频| 床上黄色一级片| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 成年人黄色毛片网站| 一级黄片播放器| 国产精品一区二区免费欧美| 91狼人影院| 黄色日韩在线| 欧美bdsm另类| 美女黄网站色视频| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲国产色片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 美女被艹到高潮喷水动态| 少妇熟女aⅴ在线视频| 悠悠久久av| 一a级毛片在线观看| 床上黄色一级片| 一级作爱视频免费观看| 丝袜美腿在线中文| 一本一本综合久久| 欧美成人免费av一区二区三区| 成人欧美大片| 黄色日韩在线| 国产欧美日韩精品一区二区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 午夜福利在线在线| 精品人妻视频免费看| 麻豆成人av在线观看| 在线天堂最新版资源| 国内揄拍国产精品人妻在线| 男女之事视频高清在线观看| 一个人免费在线观看电影| 亚洲成人久久爱视频| 精品久久久久久久末码| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久久久久大精品| 一区二区三区四区激情视频 | 日本成人三级电影网站| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久这里只有精品中国| 国产精品日韩av在线免费观看| 久99久视频精品免费| 天天躁日日操中文字幕| 美女 人体艺术 gogo| 99久国产av精品| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| 窝窝影院91人妻| 91九色精品人成在线观看| 美女高潮的动态| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产精品一及| 最好的美女福利视频网| 色噜噜av男人的天堂激情| 久久精品影院6| 日本 av在线| www.999成人在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 少妇人妻精品综合一区二区 | 嫁个100分男人电影在线观看| 日本黄色片子视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品亚洲av一区麻豆| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲成人久久性| 欧美一区二区国产精品久久精品| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产精品影院久久| 深夜精品福利| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产免费男女视频| 动漫黄色视频在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 精品国内亚洲2022精品成人| 在线观看免费视频日本深夜| 欧美乱色亚洲激情| 国产高潮美女av| 亚洲自偷自拍三级| 欧美成人性av电影在线观看| 51国产日韩欧美| 直男gayav资源| 亚洲成av人片在线播放无| 波多野结衣巨乳人妻| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美xxxx性猛交bbbb| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产精品久久久久久久电影| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲国产精品成人综合色| 毛片女人毛片| 观看免费一级毛片| 亚洲经典国产精华液单 | 欧美黑人欧美精品刺激| 成人无遮挡网站| 成人鲁丝片一二三区免费| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 少妇丰满av| 青草久久国产| 欧美潮喷喷水| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 特级一级黄色大片| 国产熟女xx| 人妻制服诱惑在线中文字幕| www日本黄色视频网| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产精品久久久久久久久免 | 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲av免费高清在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲欧美日韩东京热| 啦啦啦韩国在线观看视频| 在线观看av片永久免费下载| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| av福利片在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲自拍偷在线| 亚洲最大成人av| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美日韩福利视频一区二区| 最后的刺客免费高清国语| 日韩欧美在线乱码| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲精品日韩av片在线观看| 97超视频在线观看视频| 男女视频在线观看网站免费| 免费黄网站久久成人精品 | 91字幕亚洲| 欧美激情在线99| 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久久久久九九精品二区国产| 久久久久久久久久黄片| 欧美日韩福利视频一区二区| 日韩大尺度精品在线看网址| 日本与韩国留学比较| 舔av片在线| 亚洲不卡免费看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久中文看片网| 十八禁人妻一区二区| 国产 一区 欧美 日韩| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品1区2区在线观看.| 91九色精品人成在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲真实伦在线观看| 色5月婷婷丁香| 国产乱人视频| 亚洲内射少妇av| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲精品一区av在线观看| 最好的美女福利视频网| 美女黄网站色视频| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲三级黄色毛片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲一区高清亚洲精品| 免费看日本二区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 成人特级av手机在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 日本黄大片高清| 啪啪无遮挡十八禁网站| 天堂网av新在线| 午夜福利欧美成人| 亚洲最大成人av| 观看免费一级毛片| 亚洲中文字幕日韩| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产亚洲欧美98| 国产精品久久久久久久电影| www.色视频.com| 精品久久久久久久末码| 中文字幕av在线有码专区| 国产三级在线视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品永久免费网站| 免费在线观看影片大全网站| 精品免费久久久久久久清纯| 国产成人aa在线观看| 国产精品不卡视频一区二区 | 五月玫瑰六月丁香| 99视频精品全部免费 在线| 岛国在线免费视频观看| 最近在线观看免费完整版| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产av不卡久久| 色播亚洲综合网| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲五月婷婷丁香| 男女那种视频在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 少妇丰满av| 麻豆成人av在线观看| 69人妻影院| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| av福利片在线观看| 怎么达到女性高潮| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产久久久一区二区三区| 精品久久久久久久久久免费视频| 午夜两性在线视频| 亚洲美女黄片视频| 18禁在线播放成人免费| 免费在线观看成人毛片| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 欧美bdsm另类| 天堂√8在线中文| 欧美成人a在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 国产成年人精品一区二区| 国产淫片久久久久久久久 | www日本黄色视频网| 偷拍熟女少妇极品色| 美女高潮的动态| 丁香欧美五月| 亚洲自偷自拍三级| 99久久精品热视频| 午夜日韩欧美国产| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 麻豆国产97在线/欧美| 日本 欧美在线| 制服丝袜大香蕉在线| 热99re8久久精品国产| 少妇的逼水好多| 国产免费一级a男人的天堂| 久久久久久久久久黄片| 亚洲内射少妇av| 久久久久国内视频| 久久99热6这里只有精品| 成人欧美大片| 国内精品一区二区在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 丰满的人妻完整版| 国产主播在线观看一区二区| 99国产极品粉嫩在线观看| 日本 av在线| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美3d第一页| 久久久国产成人精品二区| 在线国产一区二区在线| 97碰自拍视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 九九在线视频观看精品| 精品久久久久久久久av| 人妻久久中文字幕网| 亚洲成人免费电影在线观看| 一个人免费在线观看电影| 如何舔出高潮| 亚洲经典国产精华液单 | 国产亚洲精品久久久久久毛片| 他把我摸到了高潮在线观看| 露出奶头的视频| 欧美极品一区二区三区四区| 国产精品一区二区性色av| 最近视频中文字幕2019在线8| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久草成人影院| 久久久精品大字幕| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲国产高清在线一区二区三| av国产免费在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产av一区在线观看免费| 亚洲经典国产精华液单 | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美激情久久久久久爽电影| 男人舔女人下体高潮全视频| 97热精品久久久久久| 欧美性猛交黑人性爽| 一二三四社区在线视频社区8| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久精品大字幕| 日本五十路高清| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品野战在线观看| www.色视频.com| 精品一区二区三区视频在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 91字幕亚洲| 伊人久久精品亚洲午夜| 久久国产乱子免费精品| 国产主播在线观看一区二区| 51国产日韩欧美| 黄色日韩在线| 18禁在线播放成人免费| 欧美黄色淫秽网站| 国产熟女xx| 亚洲精品亚洲一区二区| 身体一侧抽搐| 免费看美女性在线毛片视频| 国产v大片淫在线免费观看| 日韩欧美精品免费久久 | ponron亚洲| 中文字幕av成人在线电影| 可以在线观看的亚洲视频| 色5月婷婷丁香| 亚洲av第一区精品v没综合| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精华一区二区三区| 亚洲国产精品sss在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲av成人av| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 能在线免费观看的黄片| 欧美+亚洲+日韩+国产| av黄色大香蕉| 亚洲av一区综合| 91九色精品人成在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产一区二区激情短视频| 日本成人三级电影网站| 亚洲av免费高清在线观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美一级a爱片免费观看看| 日本与韩国留学比较| 国产成人啪精品午夜网站| 午夜福利免费观看在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 成年人黄色毛片网站| 一区福利在线观看| 国产亚洲精品av在线| 欧美成人性av电影在线观看| 好男人电影高清在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 亚洲天堂国产精品一区在线| 天堂动漫精品| 少妇的逼水好多| 精品免费久久久久久久清纯| 少妇熟女aⅴ在线视频| 一进一出抽搐动态| 免费看a级黄色片| 别揉我奶头 嗯啊视频| 免费大片18禁|