滄州地區(qū)鴨疫里默氏菌分離鑒定及其藥敏性分析

王春明 王洪芳 穆春雨 盧連水 孫海層

（1.滄州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 河北滄州 061001；2.河北東風(fēng)養(yǎng)殖有限公司 河北肅寧 062351）

鴨傳染性漿膜炎又名鴨疫里默氏菌病、鴨疫巴氏桿菌病，是由鴨疫里默氏菌引起的一種接觸性傳染病。主要侵害雛鴨、雛鵝等多種禽類，以2～7周齡發(fā)病較為多見，發(fā)病率有時(shí)高達(dá)90%，常引起大批死亡，病死率在5%～80%不等?；鉴喅３霈F(xiàn)眼和鼻分泌物增多、腹瀉、共濟(jì)失調(diào)等癥狀，剖檢病變以纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎和腦膜炎為特征[1]。由于該病常常導(dǎo)致大批雛鴨發(fā)病、死亡及生長遲緩、飼料報(bào)酬顯著下降，因此，被認(rèn)為是造成我國養(yǎng)鴨業(yè)經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的細(xì)菌病。

2017年12月至2018年4月，河北滄州地區(qū)多家養(yǎng)殖場肉鴨出現(xiàn)流淚流鼻涕、共濟(jì)失調(diào)，氣囊、心包和肝臟出現(xiàn)纖維素性滲出等臨床癥狀和病理變化的傳染病，無菌采取病死鴨肝、脾、心血等病料，經(jīng)形態(tài)學(xué)檢查、細(xì)菌分離培養(yǎng)、生化試驗(yàn)，確定分離菌株為鴨疫里默氏菌，通過藥敏試驗(yàn)篩選出敏感藥物用于臨床治療[2-4]。

1 材料與方法

1.1 病料來源 河北滄州多家養(yǎng)殖場肉鴨臨床上急性發(fā)?。ㄒ姳?），剖檢可見嚴(yán)重的氣囊炎、心包炎、肝周炎，疑似鴨疫里默氏菌病，無菌采集肝臟、脾臟、心血、腦組織。

表1 肉鴨養(yǎng)殖場發(fā)病情況

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 儀器設(shè)備 電熱恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、電子天平、冰箱、電爐、光學(xué)顯微鏡、電熱鼓風(fēng)干燥箱、打孔器、燭缸等。

1.2.2 培養(yǎng)基 普通營養(yǎng)瓊脂、胰蛋白胨大豆瓊脂、麥康凱瓊脂、馬丁肉湯培養(yǎng)基等購自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2.3 生化反應(yīng)管 吲哚、MR、V-P、枸櫞酸鹽、明膠液化、接觸酶、尿素酶，糖酵解管（葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、果糖）、甘露醇、衛(wèi)矛醇等購自杭州微生物試劑有限公司。

1.2.4 藥敏紙片 青霉素、阿莫西林、氨芐西林、氟苯尼考、硫酸卡那霉素、強(qiáng)力霉素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、磺胺間甲氧嘧啶鈉、黏桿菌素等購自杭州微生物試劑有限公司。

1.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)與形態(tài)觀察 取病理變化較為明顯鴨的肝臟和腦組織，無菌接種于營養(yǎng)瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基和胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基上，三種培養(yǎng)基分別置于37℃燭缸和37℃溫箱中培養(yǎng)24～48 h，觀察菌落生長形態(tài)，并挑取單個(gè)菌落做革蘭染色和瑞氏染色，鏡檢。

1.4 生化試驗(yàn) 將分離的疑似鴨疫里默氏菌，挑取單個(gè)菌落，接種10%血清馬丁肉湯培養(yǎng)基，接種后37℃溫箱振蕩培養(yǎng)24 h，取樣接種于各種微量生化反應(yīng)管，接種后24～48 h觀察記錄結(jié)果。

1.5 血清型鑒定試驗(yàn) 對分離的疑似鴨疫里默氏菌按常規(guī)方法進(jìn)行凝集試驗(yàn)，以鑒定其血清型。

1.6 藥敏試驗(yàn) 挑取胰蛋白胨大豆瓊脂平板上的菌落，使用接種環(huán)挑取菌落在另外一個(gè)胰蛋白胨大豆瓊脂平板上涂布均勻，將各種藥敏片貼于瓊脂上，37℃燭缸放置24～48 h，測定抑菌圈直徑，確定藥物敏感性。

2 結(jié) 果

2.1 分離培養(yǎng)與形態(tài)觀察結(jié)果 病變組織培養(yǎng)24 h后，在普通瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上無細(xì)菌生長，胰蛋白胨大豆瓊脂上長出很多圓形、光滑、半透明、邊緣整齊的小菌落。鏡下觀察為革蘭氏陰性小桿菌，多為單個(gè)，少數(shù)成雙，瑞氏染色呈兩極濃染。將分離得到的7株細(xì)菌分別命名為FJZ、XSB、TSZ、MJP、FLB1、FLB2、DZF。

2.2 生化鑒定結(jié)果 7株分離菌經(jīng)生化培養(yǎng)48 h后發(fā)現(xiàn)，除1株細(xì)菌發(fā)酵麥芽糖外，其他各菌株均不發(fā)酵糖類和醇類，有5株細(xì)菌尿素反應(yīng)陽性，其他呈陰性（見表2），7株細(xì)菌均符合鴨疫里默氏菌的生化特性。

2.3 血清型鑒定 對分離的7株疑似鴨疫里默氏菌 （FJZ、XSB、TSZ、MJP、FLB1、FLB2 和 DZF），按 常規(guī)方法進(jìn)行凝集試驗(yàn)，確定其血清型均為2型。

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 雖然分離的7株細(xì)菌各次試驗(yàn)結(jié)果不完全一致（見表3），但多數(shù)菌株對氟苯尼考、恩諾沙星、硫酸卡那霉素高度敏感；對強(qiáng)力霉素、阿莫西林、氨芐西林中度敏感；對青霉素、環(huán)丙沙星、磺胺間甲氧嘧啶鈉、黏桿菌素不敏感。

3 討 論

從滄州地區(qū)多個(gè)村鎮(zhèn)的肉鴨養(yǎng)殖場出現(xiàn)肝周炎、心包炎、氣囊炎的病死鴨中分離得到7株細(xì)菌，經(jīng)涂片、染色鏡檢、生化試驗(yàn)及血清型鑒定，確定為2型鴨疫里默氏菌，表明該病在河北省滄州地區(qū)鴨群中普遍存在，對進(jìn)一步加強(qiáng)該病防治具有重要意義。

表2 各菌株生化試驗(yàn)結(jié)果

表3 細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果

臨床上，抗生素治療鴨傳染性漿膜炎具有一定的效果，但近年來由于廣泛使用抗生素，使鴨疫里默氏菌產(chǎn)生了不同程度的耐藥性，給該病的防治帶來了很大的困難。對分離的7株鴨疫里默氏菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明分離菌對氟苯尼考、恩諾沙星、硫酸卡那霉素高度敏感。因此，首選高敏成分藥品：氟苯尼考制劑、硫酸卡那霉素制劑或者恩諾沙星制劑來防治該病。

鴨傳染性漿膜炎誘因是飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件差，污染嚴(yán)重；飼養(yǎng)密度過大，空氣不流通；更換飼料，天氣變化，雛鴨出現(xiàn)應(yīng)激等。提醒廣大養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖過程中采取加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和進(jìn)行藥物治療相結(jié)合的措施，不能盲目亂用藥，選擇高敏藥物和早發(fā)現(xiàn)早治療是治愈該病的關(guān)鍵。