高效抑制大腸埃希氏菌的芽孢桿菌的 發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化

張子豪,康建依,謝遠(yuǎn)紅,易欣欣,劉 慧,侯 爽,馬 祎,高秀芝

(北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院,食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室,農(nóng)產(chǎn)品有害微生物 及農(nóng)殘安全檢測(cè)與控制北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,微生態(tài)制劑關(guān)鍵技術(shù)開(kāi)發(fā)北京市工程實(shí)驗(yàn)室,北京 102206)

大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)是人和動(dòng)物腸道的正常寄居菌,但大腸埃希氏菌極易造成食品的污染[1-3],從而能夠引起人和動(dòng)物的疾病,同時(shí),由大腸桿菌 O157感染致病的病例于1982年在美國(guó)首次出現(xiàn)[4],隨后于世界各國(guó)迅速傳播與擴(kuò)散,是危害嚴(yán)重的腸胃疾病之一,近年來(lái),集約化養(yǎng)殖場(chǎng)其他主要疾病已得到基本控制,但大腸桿菌病有明顯的上升趨勢(shì),已成為養(yǎng)禽業(yè)主要的細(xì)菌疾病之一[5]。我國(guó)各個(gè)省份肉制品中檢查出相關(guān)大腸桿菌的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生[6],如史秋梅等[7],檢測(cè)了河北省內(nèi)不同地區(qū)的生活用肉、蛋類等105個(gè)樣品,檢測(cè)到大腸桿菌19株,大腸桿菌陽(yáng)性檢出率為18.1%。陳玲等[8]檢測(cè)200份江蘇地區(qū)食品樣品,大腸桿菌0157的分離率1.5%。

目前由于抗生素廣泛使用,大腸桿菌對(duì)各種抗生素耐藥性已經(jīng)到了很嚴(yán)重的地步[9-10],故需求一種安全可靠、能夠代替抗生素的無(wú)殘留的替代品。研究發(fā)現(xiàn)芽孢桿菌能產(chǎn)生多種抗菌代謝產(chǎn)物,被認(rèn)為能有效防治植物病害,抑制多種病原性微生物[11-14],芽孢桿菌發(fā)酵簡(jiǎn)便,抑菌蛋白性質(zhì)穩(wěn)定,水溶性較好,適合應(yīng)用于微生物制劑[15]。近年來(lái)學(xué)者在解淀粉芽孢桿菌的新發(fā)現(xiàn)與發(fā)酵條件的優(yōu)化方面進(jìn)行了大量探索[16-18],致力于將其代謝產(chǎn)物應(yīng)用于果蔬與冷卻肉的保鮮研究中[19-21],如:孔維佳等[22]研究發(fā)現(xiàn)一株解淀粉芽孢桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)擴(kuò)展青霉有強(qiáng)拮抗作用,可用于果蔬采后青霉病的抑制劑。時(shí)威等[23]研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵液處理組可將冷卻肉的保質(zhì)期延長(zhǎng)6～9 d,而且效果優(yōu)于Nisin。

本試驗(yàn)以大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)為指示菌,從校園土壤中篩選出具有抑菌效果的芽孢桿菌,對(duì)其進(jìn)行菌種鑒定,采用單因素與正交試驗(yàn),對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)ATCC 11775 中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心保藏菌株;菌株G3E 分離自北京農(nóng)學(xué)院校園土壤;營(yíng)養(yǎng)肉湯(nutrient broth,NB)培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂(nutrient agar,NA)培養(yǎng)基 北京陸橋;功能菌發(fā)酵培養(yǎng)基:淀粉10 g/L、氯化鈣4 g/L、酵母浸出物4 g/L、胰蛋白胨4 g/L、尿素2 g/L;氯化鈉 分析純,北京化工廠;葡萄糖 分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;麥芽糖、可溶性淀粉(以下簡(jiǎn)稱淀粉) 分析純,奧博星生物技術(shù)公司;尿素 分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;胰蛋白胨、酵母浸出物 生物試劑,奧博星生物技術(shù)公司;硫酸鎂 分析純，西隴化工廠;氯化鈣 分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

PHS-3B型酸度計(jì) 上海雷磁儀器廠;TG16-WS高速臺(tái)式離心機(jī) 長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司;牛津杯(內(nèi)徑(6±0.1) mm,外徑(7.8±0.1) mm) 北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開(kāi)發(fā)公司;0.25 μm無(wú)菌濾器 德國(guó)Merck MiLLipore集團(tuán);DHZ-C1全溫振蕩器 太倉(cāng)市試驗(yàn)設(shè)備廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 大腸埃希氏菌指示平板的制備 用接種環(huán)挑取大腸埃希氏菌一環(huán)，接種于50 mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中,37 ℃、150 r/min搖床培養(yǎng)18～24 h,取1 mL菌液梯度稀釋于9 mL生理鹽水中,測(cè)定其菌落總數(shù),使菌液濃度為108CFU/mL。取0.2 mL菌液于200 mL冷卻未凝固的營(yíng)養(yǎng)瓊脂中混勻,倒平板待用。

1.2.6.4 功能菌發(fā)酵培養(yǎng)基正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 以淀粉添加量、酵母浸出物∶胰蛋白胨∶尿素添加量(2∶2∶1)及氯化鈣添加量為因子,抑菌圈直徑為指標(biāo),進(jìn)行L16(43)正交實(shí)驗(yàn),因素水平表見(jiàn)表1。

1.2.2.3 復(fù)篩及菌種鑒定 以得到的對(duì)大腸埃希氏菌有明顯抑制作用的菌株G3E為功能菌株,進(jìn)行功能菌發(fā)酵粗提液制備及抑菌效果測(cè)定實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步確認(rèn)其抑菌活性,并送中國(guó)科學(xué)院微生物研究所進(jìn)行菌種鑒定。

選擇我院中2016年2月至2016年9月中收治得得手術(shù)患者100例作為研究對(duì)象,按照患者的入院順序?qū)⑵浞譃閷?duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,兩組中均包含50例患者。對(duì)照組中包括男性患者21例,女性患者29例,患者年齡為45—68歲,平均年齡為(57.4±3.9)歲;實(shí)驗(yàn)組中包括男性患者26例,女性患者24例,患者年齡為41—65歲,平均年齡為(54.7±4.9)歲。兩組患者均進(jìn)行常規(guī)手術(shù),術(shù)后進(jìn)行護(hù)理,無(wú)相關(guān)手術(shù)禁忌癥和其他器質(zhì)性疾病。兩組患者在一般資料上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,具有可比性。

1.2.2.2 對(duì)大腸埃希氏菌具有抑菌活性的芽孢桿菌的初篩 以接種環(huán)點(diǎn)接種各株芽孢桿菌至大腸埃希氏指示平板表面,37 ℃培養(yǎng)24 h,記錄并保存活性菌株。

1.2.2.1 芽孢桿菌初篩 取校園不同區(qū)域土樣5份,稱取各土壤樣品10 g于90 mL無(wú)菌生理鹽水,200 r/min振蕩5 min,80 ℃水浴30 min[24],制成1∶10的土壤稀釋液,取1 mL涂布于NA平板,37 ℃培養(yǎng)24～48 h,選取具有單菌落的平板,挑取單菌落2次劃線并編號(hào)，接種至NA平板繼續(xù)培養(yǎng)24 h,將鏡檢后產(chǎn)芽孢的菌株保藏備用[25]。實(shí)驗(yàn)室菌庫(kù)芽孢桿菌15株(來(lái)源于發(fā)酵豆醬)活化備用。

2）部分品種抗倒性不強(qiáng)。小麥品種之間抗倒性差異明顯，種植了抗倒性差的品種，會(huì)加大倒伏發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)［7］。

1.2.2 抑制大腸埃希氏菌的芽孢桿菌篩選

1.2.3 功能菌發(fā)酵粗提液制備實(shí)驗(yàn) 將篩選所得菌體G3E以接種環(huán)劃線至營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)12 h,于此平板中取一環(huán)接入50 mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中,35 ℃,150 r/min培養(yǎng)12 h作為種子液,以2%的接種量將種子液接入50 mL營(yíng)養(yǎng)肉湯中,35 ℃,150 r/min培養(yǎng)24 h[26],4 ℃、4000 r/min離心20 min,取上清液過(guò)0.22 μm濾膜,備用。

期刊評(píng)級(jí)主要是通過(guò)引文數(shù)據(jù)庫(kù)，期刊前幾年發(fā)表的文獻(xiàn)在統(tǒng)計(jì)當(dāng)年被引用次數(shù)除以該刊前幾年發(fā)表的文獻(xiàn)數(shù)（有些會(huì)包含新聞等，有些不含）。

“君子懷德”，儒家傳統(tǒng)文化以“君子”命名具備高尚道德節(jié)操的賢哲志士：“所謂君子者，躬行忠信，其心不買(mǎi)； 仁義在己，而不害不志； 聞志廣博，而色不伐； 思慮明達(dá)，而辭不爭(zhēng)； 君子猶然如將可及也，而不可及也。 如此，可謂君子矣?！?《大戴禮記·哀公問(wèn)五義》)儒家君子理想境界所展現(xiàn)的精神實(shí)質(zhì)，強(qiáng)調(diào)具有自強(qiáng)不息的獨(dú)立人格品質(zhì)，奮發(fā)坦蕩的無(wú)畏開(kāi)拓意志，以及為國(guó)家、民族與理想忠誠(chéng)奮斗的奉獻(xiàn)精神。 在儒家文化浸染下，朱熹在《王梅溪文集序》對(duì)君子人格形象進(jìn)行了論述：

1.2.6 功能菌發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化

1.2.5 功能菌發(fā)酵實(shí)驗(yàn)最佳接種量試驗(yàn) 將功能菌分別以1%、2%、5%和8%[35]的接種量進(jìn)行功能菌發(fā)酵粗提液制備實(shí)驗(yàn),并設(shè)置三組平行實(shí)驗(yàn),以所得功能菌發(fā)酵粗提液進(jìn)行抑菌效果測(cè)定實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 抑菌效果測(cè)定實(shí)驗(yàn) 將牛津杯放置于大腸埃希氏菌指示平板表面,向其中加入0.2 mL功能菌發(fā)酵粗提液,37 ℃培養(yǎng)24 h,測(cè)量其抑菌圈直徑。

1.2.6.1 碳源單因素實(shí)驗(yàn) 固定功能菌發(fā)酵培養(yǎng)基氮源為酵母浸出物10 g/L,無(wú)機(jī)鹽為氯化鈣4 g/L,分別考察以蔗糖、葡萄糖、麥芽糖及淀粉各10 g/L為碳源時(shí)抑菌圈直徑的大小。

1.2.6.2 氮源單因素實(shí)驗(yàn) 固定功能菌發(fā)酵培養(yǎng)基碳源為淀粉10 g/L,無(wú)機(jī)鹽為氯化鈣4 g/L,考察分別以酵母浸出物、牛肉膏、酵母浸出物∶胰蛋白胨(1∶1)、酵母浸出物∶胰蛋白胨∶尿素(2∶2∶1)、酵母浸出物∶胰蛋白胨∶氯化銨(2∶2∶1)、尿素及氯化銨各10 g/L為氮源時(shí)抑菌圈直徑的大小。

無(wú)錫金利達(dá)生態(tài)科技有限公司是國(guó)內(nèi)專業(yè)從事水生態(tài)修復(fù)工程技術(shù)研發(fā)及工程材料生產(chǎn)的高新技術(shù)企業(yè)，是水生態(tài)修復(fù)整體解決方案提供商。公司主營(yíng)業(yè)務(wù)包括水生態(tài)修復(fù)、生態(tài)護(hù)岸工程的規(guī)劃、設(shè)計(jì)、咨詢；水生態(tài)修復(fù)工程技術(shù)及產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售；水生態(tài)修復(fù)工程施工技術(shù)的研究、推廣和應(yīng)用等。公司研發(fā)的“生態(tài)格網(wǎng)結(jié)構(gòu)”系列產(chǎn)品銷售額在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)遙遙領(lǐng)先，成為該行業(yè)領(lǐng)軍企業(yè)。

1.2.6.3 無(wú)機(jī)鹽單因素實(shí)驗(yàn) 固定功能菌發(fā)酵培養(yǎng)基碳源為淀粉10 g/L,氮源為酵母浸出物∶胰蛋白胨∶尿素(2∶2∶1)10 g/L,考察分別以硫酸鎂、硫酸亞鐵、氯化鈉、氯化鈣及硫酸錳各4 g/L為無(wú)機(jī)鹽時(shí)抑菌圈直徑的大小[27]。

“我希望我能為我的國(guó)家基礎(chǔ)建設(shè)奉獻(xiàn)力量，雖然我只是大專學(xué)歷，但是努力過(guò)后誰(shuí)又知道我能走到哪一步呢？”也許，信念才是最好的動(dòng)力，從風(fēng)雨里來(lái)，在霜雪中走，經(jīng)過(guò)不斷的磨煉與實(shí)踐，從部員到工程部的領(lǐng)頭人，再到現(xiàn)在的項(xiàng)目總工程師，一步一個(gè)腳印，踏踏實(shí)實(shí)，讓每個(gè)人都看到了這個(gè)帥氣的河北漢子的堅(jiān)毅與剛強(qiáng)。

在城市中進(jìn)行市政工程建設(shè)的核心目的就是提高人們的生活質(zhì)量，提高城市中的生產(chǎn)效率，因此，要加強(qiáng)對(duì)市政工程建設(shè)的重視。市政工程有許多部分共同工程，給排水工程是其中最為重要的一部分，工程建設(shè)期間，施工操作與城市的正常運(yùn)行會(huì)產(chǎn)生直接聯(lián)系，由此可見(jiàn)，高質(zhì)量的市政工程，對(duì)于提高城市中生活人們質(zhì)量，以及維護(hù)社會(huì)穩(wěn)定性來(lái)說(shuō)都有著重要作用，同時(shí)，也可以確保社會(huì)的健康發(fā)展。

表1 發(fā)酵培養(yǎng)基正交試驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors levels of fermentation medium orthogonal experiment

1.2.7 功能菌發(fā)酵條件的優(yōu)化 以培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間及培養(yǎng)基pH為因子,結(jié)合解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)條件相關(guān)研究[28-31],選取正交因子水平范圍,以抑菌圈直徑為指標(biāo),進(jìn)行L16(43)正交實(shí)驗(yàn),因素水平表見(jiàn)表2。

3)直流側(cè)單極故障時(shí)高接地阻值有利于故障穿越及系統(tǒng)恢復(fù)，直流電壓不平衡保護(hù)作為該類故障的主保護(hù)并動(dòng)作于報(bào)警，系統(tǒng)可帶故障運(yùn)行；由故障選線定位策略實(shí)現(xiàn)該故障類型的隔離。

表2 發(fā)酵條件正交試驗(yàn)因素水平表Table 2 Factors and levels of culture condition orthogonal experiment

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2007和SPSS 18分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,并結(jié)合Duncan氏法做多重比較,所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 功能菌篩選與鑒定

經(jīng)過(guò)初篩、復(fù)篩及大腸埃希氏菌抑菌效果驗(yàn)證試驗(yàn),得到2株對(duì)大腸埃希氏菌有明顯抑制作用的菌體,選取抑菌效果最好的芽孢桿菌G3E作為功能菌株,其在大腸埃希氏菌指示平板上抑菌圈可達(dá)到15.0 mm。根據(jù)菌種的細(xì)胞形態(tài)、生理生化特征、16S rRNA基因序列、gyrB基因序列等實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)綜合分析,經(jīng)鑒定G3E菌種為解淀粉芽孢桿菌植物亞種Bacillusamyloliquefacienssubsp.plantarum(同種異名:貝萊斯芽孢桿菌Bacillusvelezensis),NCBI登錄號(hào)為:KY621478.1。

2.2 不同接種量對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌效果的影響

不同接種量對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌效果的影響結(jié)果如圖1所示,當(dāng)接種量為2%時(shí),發(fā)酵上清液的抑菌活性最高,抑菌圈直徑達(dá)到(17.2±0.10) mm,確定2%為最佳接種量。

圖1 接種量對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E的抑菌效果的影響Fig.1 Effect of different inoculation amount on Bacillus amyloliquefaciens G3E antibacterial activity注:字母不同表示差異顯著(p<0.05);圖2～圖4同。

2.3 解淀粉芽孢桿菌G3E發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化試驗(yàn)

2.3.1 不同碳源對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌效果的影響 不同碳源對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E活性影響如圖2所示,麥芽糖與其它碳源有顯著性差異(p<0.05),其它三種碳源對(duì)抑菌活性物質(zhì)表達(dá)的影響差異不顯著。碳源為淀粉時(shí),發(fā)酵上清液抑菌活性最大,其抑菌圈直徑達(dá)到(16.7±0.30) mm。結(jié)合趙延存等[32]的研究結(jié)果,選擇淀粉為解淀粉芽孢桿菌G3E發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳碳源。

圖2 碳源種類對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌活性的影響Fig.2 Effect of different carbon sources on Bacillus amyloliquefaciens G3E antibacterial activity

2.3.2 不同氮源對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌效果的影響 不同氮源對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌活性的影響如圖3所示,氮源的改變對(duì)抑菌活性影響顯著(p<0.05),當(dāng)?shù)礊?號(hào)與7號(hào)時(shí),抑菌活性消失,3號(hào)與其它氮源有顯著性差異(p<0.05),發(fā)酵上清液抑菌活性較低。以4號(hào)氮源進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)時(shí),發(fā)酵上清液抑菌活性最大,優(yōu)于其它6種氮源,其抑菌圈直徑達(dá)到(18±0.10) mm,故選擇4號(hào),即酵母浸出物∶胰蛋白胨∶尿素(2∶2∶1)為解淀粉芽孢桿菌G3E發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳氮源。

圖3 氮源種類對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌活性的影響Fig.3 Effect of different nitrogen sources on Bacillus amyloliquefaciens G3E antibacterial activity

2.3.3 不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌效果的影響 不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)解淀粉芽孢桿菌抑菌活性的影響如圖4所示,無(wú)機(jī)鹽的改變對(duì)抑菌活性影響顯著(p<0.05),當(dāng)無(wú)機(jī)鹽為硫酸錳時(shí),抑菌活性消失。其它四種無(wú)機(jī)鹽相互之間差異顯著(p<0.05),當(dāng)無(wú)機(jī)鹽為氯化鈣時(shí),發(fā)酵上清液抑菌活性最大,其抑菌圈直徑達(dá)到(20±0.10) mm,故選擇氯化鈣作為解淀粉芽孢桿菌G3E發(fā)酵培養(yǎng)基無(wú)機(jī)鹽。有研究表明,鈣離子可提高細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)物產(chǎn)量,提高其催化及代謝功能,增強(qiáng)抑菌活性,與本文結(jié)果一致[33]。

圖4 無(wú)機(jī)鹽種類對(duì)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌活性的影響Fig.4 Effects of different inorganic salts on Bacillus amyloliquefaciens G3E antibacterial activity

2.3.4 發(fā)酵培養(yǎng)基正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 解淀粉芽孢桿菌G3E發(fā)酵培養(yǎng)基正交優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果如表3所示,從抑菌圈直徑指標(biāo)來(lái)看,影響抑菌活性的影響因素順序?yàn)?碳源>氮源>無(wú)機(jī)鹽,抑菌能力表達(dá)最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為A2B2C2,即碳源10 g/L、氮源10 g/L、無(wú)機(jī)鹽4 g/L。

表3 發(fā)酵培養(yǎng)基 L16(43)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 3 L16(43)orthogonal array design and results of fermentation medium

優(yōu)化解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基可有效提高抑菌活性物質(zhì)的產(chǎn)量及防效[34]。以淀粉10 g/L、氯化鈣4 g/L、酵母浸出物4 g/L、胰蛋白胨4 g/L、尿素2 g/L為發(fā)酵培養(yǎng)基，進(jìn)行抑菌效果驗(yàn)證試驗(yàn),所得抑菌圈平均直徑為(22.5±0.50) mm,此時(shí)解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌物質(zhì)表達(dá)能力優(yōu)于培養(yǎng)基正交試驗(yàn)中各試驗(yàn)組。

2.4 解淀粉芽孢桿菌G3E發(fā)酵條件正交試驗(yàn)

解淀粉芽孢桿菌G3E抑菌物質(zhì)發(fā)酵條件正交優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果如表4所示,從抑菌圈直徑指標(biāo)來(lái)看,影響抑菌活性的影響因素順序?yàn)?培養(yǎng)溫度>培養(yǎng)時(shí)間>pH,抑菌能力表達(dá)最優(yōu)發(fā)酵條件為A4B4C1,即40 ℃、40 h、pH7.0,恰為正交試驗(yàn)第16組,此時(shí)解淀粉芽孢桿菌G3E發(fā)酵上清液抑菌圈直徑為可達(dá)(23.6±0.4) mm。顯著大于以普通細(xì)菌發(fā)酵條件(35 ℃、24 h、pH7.0[35])的(15.0±0.3) mm(p<0.05)。

表4 發(fā)酵條件L16(43)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 4 L16(43)orthogonal array design and results of fermentation conditions

3 結(jié)論

本研究從土壤中篩選對(duì)大腸埃希氏菌具有高抑菌活性的芽孢桿菌,采用單因素與正交試驗(yàn),對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,解淀粉芽孢桿菌植物亞種G3E發(fā)酵培養(yǎng)基正交實(shí)驗(yàn)表明,影響抑菌活性的因素順序?yàn)?碳源>氮源>無(wú)機(jī)鹽,最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為淀粉10 g/L、氯化鈣4 g/L、酵母浸出物4 g/L、胰蛋白胨4 g/L、尿素2 g/L。

解淀粉芽孢桿菌植物亞種G3E發(fā)酵條件正交實(shí)驗(yàn)表明,影響抑菌活性的因素順序?yàn)?培養(yǎng)溫度>培養(yǎng)時(shí)間>pH,最佳發(fā)酵條件為40 ℃、40 h、pH7.0,以2%接種量進(jìn)行菌體發(fā)酵,發(fā)酵液上清的抑菌圈直徑可以達(dá)到(25.5±0.5) mm。