高效液相色譜法在多種食品添加劑同時(shí)檢測(cè)中的應(yīng)用研究

郭京華

摘要：當(dāng)前我國不斷加大對(duì)食品安全的重視，對(duì)食品添加劑的使用和檢測(cè)要求也趨于嚴(yán)格。本研究依托實(shí)驗(yàn)，建立一種應(yīng)用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定11種食品添加劑的分析方法，并就實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。

關(guān)鍵詞：食品添加劑檢測(cè)；線性關(guān)系；最小檢出量；回收率；精密度

食品添加劑是現(xiàn)代食品在制造的過程中重要的組成部分，它不僅能夠調(diào)節(jié)食品的味道及口感，還能夠起到防腐的作用。隨著食品加工業(yè)的不斷發(fā)展，食品添加劑的運(yùn)用日趨增多。但食品添加劑如果添加過量，會(huì)對(duì)人體健康帶來一定的損害，因此，當(dāng)前食品添加劑的檢驗(yàn)備受關(guān)注。

1.實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

UltiMate3000高效液相色譜儀：配DAD-3000光電二極管陣列檢測(cè)器及ChromeleonTM色譜作站，美國戴安公司；超聲波清洗器，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；超純水系統(tǒng)，美國Milipore公司；電子分析天平，日本島津公司。

甲醇，Merck公司，色譜純；乙酸銨，北京中西泰安技術(shù)服務(wù)有限公司，優(yōu)級(jí)純；0.5mg/mL安賽蜜、1.0mg/mL苯甲酸、糖精鈉、山梨酸、檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、誘惑紅、亮藍(lán)、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

1.2 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各5mL，于100mL的容量瓶中，用Milipore水稀釋至刻度，搖勻，即配成安賽蜜的濃度為25.0mg/L，其余10種食品添加劑的濃度均為50.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.3 供試品溶液的制備

將樣品剪碎或放入搗碎機(jī)搗碎，精密稱取5.0g于50mL的具塞比色管中，加35mL1%的氨水-乙醇溶液，超聲提取30min，用水定容至50mL，搖勻，3000r/min離心15min，取上清液，調(diào)pH值至中性，用微孔濾膜過濾后備用。

1.4 色譜條件

色譜柱：DIONEXAcclaim120C18（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇和20mmol/L乙酸銨，梯度洗脫程序見表1，流速為1mL/min，柱溫為30°C，進(jìn)樣量為5μL，采用保留時(shí)間和光譜圖定性，峰面積外標(biāo)法定量。

2.結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相及pH的選擇

本實(shí)驗(yàn)考察了乙腈-20mmol/L乙酸銨和甲醇-20mmol/L乙酸銨兩種流動(dòng)相系統(tǒng)，經(jīng)過不同的梯度洗脫程序，11種添加劑均能實(shí)現(xiàn)基線的分離。但乙腈的毒性較大，故本實(shí)驗(yàn)采用甲醇-20mmol/L乙酸銨作為流動(dòng)相。用冰乙酸將20mmol/L乙酸銨緩沖溶液的pH值分別調(diào)至3.0、4.0、5.0、6.0和7.0，然后考察不同pH值的流動(dòng)相分別對(duì)11種食品添加劑分離的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，pH值的改變對(duì)色素的分離影響較小，但對(duì)苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的分離有較大的影響。當(dāng)pH為3.0、4.0和5.0時(shí)，個(gè)別色譜峰嚴(yán)重拖尾，11種添加劑不能被完全分開；當(dāng)pH為6.0和7.0時(shí)，峰形較好，所有添加劑均能實(shí)現(xiàn)基線的分離。由于20mmol/L乙酸銨緩沖溶液的原始pH值在6.0～7.0之間，故本實(shí)驗(yàn)不對(duì)流動(dòng)相的pH值進(jìn)行調(diào)節(jié)[1]。

2.2 檢測(cè)波長的選擇

盡管各組分均有紫外吸收，但最大吸收波長各不相同。二極管陣列檢測(cè)器的特點(diǎn)是可以同時(shí)檢測(cè)和處理多個(gè)波長的色譜圖，本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了210、230、254、420、520、628nm六種檢測(cè)波長下各組分的響應(yīng)值。通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)：除亮藍(lán)外，在230nm處各組分的靈敏度相對(duì)較高。因此，本實(shí)驗(yàn)在230nm處對(duì)安賽蜜、苯甲酸、糖精鈉、山梨酸、檸檬黃、日落黃、胭脂紅、莧菜紅、誘惑紅和咖啡因進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，色譜圖見圖1a；在628nm處對(duì)亮藍(lán)進(jìn)行檢測(cè)，色譜圖見圖1b。結(jié)果表明，各組分間無干擾，一次進(jìn)樣可以同時(shí)測(cè)定11種食品添加劑[2]。

2.3 線性關(guān)系和最小檢出量的考察

將11種食品添加劑分別配制成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，測(cè)得的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以樣品峰高為基線噪音峰高的3倍為準(zhǔn)計(jì)算最小檢出量。結(jié)果表明，11種食品添加劑的相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999，線性范圍為0.5～800mg/L，最低檢出限在0.1～0.5mg/L之間[3]。

2.4 實(shí)際樣品的測(cè)定

按照1.3所述處理方法處理樣品，在優(yōu)化的色譜條件下，對(duì)話梅及青豆中的食品添加劑進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品平行測(cè)定三次，得到的色譜圖如圖2、3所示。表2對(duì)比了同一個(gè)樣品中，用水直接提取和用堿性有機(jī)溶劑提取的方法所測(cè)得的結(jié)果。結(jié)果表明，該方法對(duì)食品中低含量的色素的提取效果較好，一次進(jìn)樣可以同時(shí)檢測(cè)食品中的11種添加劑。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn)

采用堿性有機(jī)溶劑提取的方法對(duì)話梅在二個(gè)不同的添加水平進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，其分析結(jié)果見表3。結(jié)果表明該方法的加標(biāo)回收率為93.5%～104.0%。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)對(duì)加標(biāo)0.2g/kg的青豆樣品平行測(cè)定6次，根據(jù)峰面積外標(biāo)法對(duì)其定量，計(jì)算安賽蜜、檸檬黃、苯甲酸、糖精鈉、山梨酸、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、咖啡因、誘惑紅和亮藍(lán)的RSD分別為0.467%、0.685%、0.974%、0.519%、0.436%、0.808%、0.208%、0.451%、0.665%、0.814%和0.627%，結(jié)果表明該方法的重現(xiàn)性較好[4]。

3.結(jié)論

總的來說，食品工業(yè)的快速發(fā)展，食品添加劑的種類也逐漸增多，因而食品添加劑的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)及檢驗(yàn)過程都會(huì)有很大程度的提升，食品添加劑的檢驗(yàn)工作將面臨新的挑戰(zhàn)和機(jī)遇。檢驗(yàn)工作人員要在實(shí)踐中檢驗(yàn)各種檢測(cè)技術(shù)的效用，不斷提高食品安全檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，以提高我國食品添加劑的檢驗(yàn)水平和監(jiān)管力度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表明，該方法快速、準(zhǔn)確、提取效果好、毒性小、精密度和準(zhǔn)確度較高，能夠同時(shí)測(cè)定11種常見的添加劑，不失為一種有效的同時(shí)檢測(cè)方法，可用于多種常規(guī)食品中的快速檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

[1]趙笑虹，劉浩，李秀敏. 高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)飲料中十二種食品添加劑[J]. 食品工業(yè)科技，2009，30（11）：294-295.

[2]李婷，區(qū)碩俊，王強(qiáng)，等. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中15種食品添加劑的含量[J]. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2016（9）：3788-3793.

[3]曹若明，趙恒利，張瑛，等. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定多種食品添加劑方法研究[J]. 預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇，2009（2）：147-149.

[4]余倩. 食品添加劑檢測(cè)中高效液相色譜法的應(yīng)用研究[J]. 食品界，2017（9）：68-68.