一例豬瘟病毒感染的診斷

何春

摘要：豬瘟是危害養(yǎng)豬業(yè)的一種重要病毒性傳染病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失?，F(xiàn)對一起疑似豬瘟病毒感染病例從發(fā)病豬的臨床癥狀、病理剖檢及實驗室分子生物學(xué)PCR診斷，最終確定該豬場發(fā)生了豬瘟病毒感染，并且討論分析了豬瘟診斷與綜合防控方面的體會，以期為廣大養(yǎng)殖戶提供參考。

關(guān)鍵詞：豬瘟病毒；感染；診斷

中圖分類號：S858. 28

文獻標(biāo)識碼：B

文章編號：2095-9737（2018）06-0013-02

豬瘟（CSF）俗稱“爛腸瘟”，是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病，世界動物衛(wèi)生組織（ OIE）將其列為必須報告的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病，該病具有高度傳染性和致死性，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，是威脅我國養(yǎng)豬業(yè)的最重要的傳染病之-[1]。豬瘟是一種高度接觸性傳染病，急性型豬瘟以敗血性變化為主，實質(zhì)器官出血，慢性型豬瘟主要是纖維素性壞死性腸炎變化。豬瘟可以引起免疫抑制，導(dǎo)致豬群繼發(fā)或混合感染其他疾病，給豬場帶來嚴(yán)重經(jīng)濟損失。豬瘟的防治以疫苗免疫為主，我國自主研制的豬瘟兔化弱毒疫苗（C株）是一種安全和有效的弱毒疫苗，對豬瘟的防控起到了關(guān)鍵的作用，有效控制了我國豬瘟的暴發(fā)與流行，但豬場由于免疫不及時或者疫苗質(zhì)量不佳，日常養(yǎng)殖飼養(yǎng)管理方式不當(dāng)，藥物使用不當(dāng)?shù)仍驅(qū)е乱呙缑庖呤?，豬瘟病毒的感染仍時有發(fā)生[2]?，F(xiàn)通過對一起豬瘟病毒感染的診斷，借以提高廣大養(yǎng)殖戶對豬瘟疾病的認(rèn)識和重視，現(xiàn)將整個診斷過程介紹如下。

1 材料和方法

1.1 試劑、載體及試劑盒

一步法RT- PCR擴增試劑盒、克隆載體pMD18 - T為TaKaRa公司產(chǎn)品；基因組RNA提取試劑盒、膠回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒均購自天根生化科技（北京）有限公司。

1.2 臨床癥狀觀察

觀察發(fā)病仔豬的臨床癥狀。

1.3 病料剖檢觀察

對病死仔豬剖檢，根據(jù)臨床癥狀及病料剖檢結(jié)果，對病例進行初步診斷。

1.4 實驗室PCR檢測

取淋巴結(jié)、肺臟、脾臟、腎臟等病變組織搗碎、研磨，研磨后反復(fù)凍融3次，離心取上清，利用病毒基因組RNA提取試劑盒提取病毒基因組。根據(jù)參考文獻[3]合成1對豬瘟病毒特異性檢測引物（Pl： 5'- TACACGATTGGACAAAT-CAAA-3；P2：5'- AACTC CATGTGCCATGTACAG-3'）。PCR擴增程序為：50℃60 min；94℃5 min； 94℃45 s，56℃45 s，72℃1 min，30個循環(huán)；72℃10 min，4℃終止反應(yīng)。取PCR擴增產(chǎn)物10 μL進行瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.5 測序鑒定

PCR擴增產(chǎn)物利用膠回收試劑盒回收后連接至pMD18T載體，利用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒，將陽性質(zhì)粒送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進行測序，將測序結(jié)果與豬瘟病毒特異性序列進行比對。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀

發(fā)病仔豬15日齡，發(fā)病初期排黃綠色稀便，體溫升高，在39.5℃左右，厭食，逐漸消瘦，最后衰竭至死亡，曾經(jīng)使用青霉素類、磺胺類藥物治療，均無效。

2.2 病料剖檢

剖檢可見全身出血嚴(yán)重，胸腔、腹腔、內(nèi)臟都出血，喉頭和扁桃體出血，腎臟呈土黃色，表面有大量出血點，腸道、膀胱出血，淋巴結(jié)出血，有“大理石樣”病變。

2.3

PCR檢測結(jié)果

如圖1所示，臨床病料RT- PCR擴增產(chǎn)物在355 bp處有特異性擴增條帶，與試驗預(yù)期設(shè)計的大小相符。

2.4 測序鑒定

經(jīng)過序列比對，擴增的序列為豬瘟病毒的特異性序列，說明該豬場發(fā)生了豬瘟病毒感染，應(yīng)該加強免疫防控。

3 討論

近幾年來，隨著豬瘟兔化弱毒疫苗在我國的廣泛接種，該病在我國已經(jīng)得到有效的控制，但是散發(fā)病例仍有發(fā)生，我國豬瘟的持續(xù)性感染、隱性感染依然存在，給豬瘟的綜合防治帶來了一定的困難，也造成了巨大的經(jīng)濟損失，嚴(yán)重阻礙了養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展[4]。豬瘟是傳染性極強的疾病，一旦發(fā)生就會傳染整個豬場的豬，給養(yǎng)殖戶帶來災(zāi)難。引起豬瘟發(fā)病的主要原因是免疫程序不合理，免疫效果不確實。豬瘟的防控應(yīng)堅持以預(yù)防為主，采取綜合防控措施，確保疫苗的質(zhì)量合格，在疫苗的使用過程中，嚴(yán)格按照免疫規(guī)程，制定免疫程序的關(guān)鍵是排除母源抗體干擾，確定合適的首免日齡，適當(dāng)加大疫苗注射劑量。定期對豬場進行免疫檢測，這樣不僅能了解豬群的免疫水平，指導(dǎo)豬場合理科學(xué)免疫，而且還能檢查免疫的效果，通過監(jiān)測母源抗體以及豬群殘留抗體水平，適時開展補充免疫接種[5]。豬場引種時要選擇沒有豬瘟流行地區(qū)的種豬場，引種后要隔離飼養(yǎng)一段時間，經(jīng)過常規(guī)免疫后再轉(zhuǎn)入本場區(qū)飼養(yǎng)，最好是自繁自養(yǎng)，建立無特定病原體豬群。同時，對于豬瘟的防控還應(yīng)將豬場患病豬、隱性感染豬、陽性豬堅決淘汰，病死豬要進行無害化處理，搞好豬舍環(huán)境衛(wèi)生，定期消毒，做好豬舍的驅(qū)蟲、滅鼠工作，進出的人員、車輛、物品要徹底消毒，加強飼料質(zhì)量管理，加強疫苗監(jiān)管，提高防疫人員素質(zhì)，做好每個環(huán)節(jié)的工作，確保防疫工作的有效性。目前，有條件的豬場可以實行豬瘟凈化措施，通過引進無特定疫病的種群，培育健康動物，加強檢疫等方式可以實現(xiàn)豬場的豬瘟病毒凈化[6]。通過建立健康豬群，制定合理的免疫程序，加強生物安全等措施，盡快實現(xiàn)豬瘟的凈化。

參考文獻：

[1]高順，淺談豬瘟病毒[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2015（10）：89.

[2]盧開森，豬瘟免疫失敗原因分析及對策[J].農(nóng)技服務(wù)，2017，34（6）：129.

[3]李晶梅，劉丹，薛霜，等，豬瘟病毒和牛病毒性腹瀉病毒雙重RT- PCR鑒別檢測方法的建立及應(yīng)用[J].動物醫(yī)學(xué)進展，2014，35（4）：66-71.

[4]楊光，于江，鹿胡剛，等，我國豬瘟的流行現(xiàn)狀及防控策略[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2017，33（5）：153-154.

[5]賀俊暢，張建遠，謝有福，等，規(guī)?；i場豬瘟免疫程序制定的探索[J].中國獸醫(yī)雜志，2017，53（1）：43-44.

[6]李沛麗，董保豫，猶銀俊，等，豬瘟凈化的基本要求和方法探討[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2017，41（1）：22- 23.