冷凝集導(dǎo)致血常規(guī)結(jié)果失真的處理方法比較

吉黎

（成都市第六人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 四川 成都 610051）

利用全自動(dòng)血細(xì)胞進(jìn)行血常規(guī)分析是現(xiàn)代醫(yī)院最基本的一項(xiàng)血液檢查[1]，其檢測(cè)具有高效、快速、方便的特點(diǎn)，大大提高了結(jié)果的及時(shí)性和準(zhǔn)確性。但是近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，血常規(guī)分析儀檢測(cè)結(jié)果的影響因素很多，其中冷凝集是很重要的一種干擾因素之一，其標(biāo)本紅細(xì)胞結(jié)果降低，而MCV、MCH、MCHC結(jié)果假性升高。對(duì)此，研究報(bào)道中多偏向采用37℃水浴半小時(shí)來(lái)解決此類問(wèn)題。但當(dāng)遇見(jiàn)高效價(jià)冷素標(biāo)本時(shí)，該方法不一定有效。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，針對(duì)冷凝集標(biāo)本還可使用血漿置換法[2]和標(biāo)本試劑雙重加溫法[3]。因此，本文選取經(jīng)37℃水浴半小時(shí)后血常規(guī)結(jié)果仍不能被糾正的標(biāo)本進(jìn)行血漿置換法和試劑標(biāo)本雙重加溫法，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年2月—2017年12月在我院檢驗(yàn)科進(jìn)行血細(xì)胞分析時(shí)出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象的標(biāo)本，其中采用37℃水浴半小時(shí)后仍出現(xiàn)結(jié)果不能被糾正的標(biāo)本共8例。該類標(biāo)本不常見(jiàn)且不能保留，因此在發(fā)現(xiàn)此類標(biāo)本后立即進(jìn)行了相關(guān)檢查分析，并進(jìn)行結(jié)果記錄。

1.2 儀器與試劑

日本希森美康公司生產(chǎn)的XT-2000i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，配套的原裝試劑和高、中、低三個(gè)水平的質(zhì)控物，LDZ5-2型離心機(jī)，0.9%氯化鈉溶液，移液器及吸頭，Olympus顯微鏡。瑞氏染液購(gòu)于珠海貝索。血常規(guī)儀器每年進(jìn)行兩次校準(zhǔn)，每天進(jìn)行質(zhì)控檢測(cè)，結(jié)果無(wú)失控，提示儀器狀態(tài)正常。

1.3 方法

進(jìn)行冷凝集標(biāo)本的篩選：查看血常規(guī)標(biāo)本結(jié)果時(shí)紅細(xì)胞偏低，血紅蛋白偏高，明顯不成比例，MCV、MCHC偏高，將標(biāo)本顛倒混勻后肉眼觀察到試管管壁有明顯的細(xì)沙樣顆粒。同時(shí)查看儀器是否有報(bào)警信息，如紅細(xì)胞凝集?、混濁/血紅蛋白干擾?等，嗜堿通道的右側(cè)出現(xiàn)長(zhǎng)長(zhǎng)的拖尾現(xiàn)象[4]。手工推片鏡檢，鏡下紅細(xì)胞呈片狀分布，提示篩選。將此類標(biāo)本先進(jìn)行37℃水浴半小時(shí)后進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，若結(jié)果仍未被糾正，則進(jìn)行血漿置換及試劑標(biāo)本雙重加溫法。

1.3.1 試劑標(biāo)本雙重加溫法 取一干凈試管，使用移液器精確吸取160μLSysmex CELLPACK放入37℃水浴箱中孵育30min，再加入經(jīng)37℃水浴后的標(biāo)本40μL，充分混勻后采用Sysmex XT-2000i血細(xì)胞分析儀的毛細(xì)管模式進(jìn)行檢測(cè)分析并其記錄結(jié)果。

1.3.2 血漿置換法 將水浴后的標(biāo)本3000rmp/min離心5min，用移液器慢慢吸去上層血漿，并記錄吸出的量，再加入等量的0.9%氯化鈉溶液，混勻后再次離心，吸取上層液體，反復(fù)洗滌3次后上機(jī)檢測(cè)并記錄其結(jié)果。

1.4 處理有效的判斷

儀器報(bào)警無(wú)提示，細(xì)胞散點(diǎn)圖無(wú)異常，紅細(xì)胞與血紅蛋白比例趨于合理。推片鏡檢時(shí)，鏡下紅細(xì)胞未見(jiàn)聚集。肉眼觀察標(biāo)本管壁未見(jiàn)凝集顆粒出現(xiàn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

檢測(cè)后的結(jié)果表明，經(jīng)血漿置換法和試劑標(biāo)本雙重加溫法處理后的紅細(xì)胞（RBC）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩種方法處理后的血紅蛋白（HGB）、白細(xì)胞（WBC）、血小板（PLT）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。血漿置換法處理后的血小板低于處理前和試劑標(biāo)本雙重加溫法。見(jiàn)表。

表8 例標(biāo)本處理后結(jié)果比較

3.討論

冷凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)主要是因?yàn)榛颊叩难逯写嬖诶淠?。它是一種針對(duì)紅細(xì)胞（RBC）膜抗原的IgM型自身抗體[5]。在溫度較低時(shí)可誘導(dǎo)自身紅細(xì)胞聚集，導(dǎo)致紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果假性降低，同時(shí)紅細(xì)胞的相關(guān)參數(shù)，如平均紅細(xì)胞容積（MCV）、平均血紅蛋白含量（MCH）及平均血紅蛋白濃度（MCHC）水平也異常升高。部分健康人體內(nèi)也會(huì)存在這種抗體，但效價(jià)低，一般不會(huì)引起紅細(xì)胞聚集。對(duì)于冷凝集現(xiàn)象出現(xiàn)的原因機(jī)制還不明確，但有文獻(xiàn)[6]報(bào)道，肺炎支原體感染可能會(huì)導(dǎo)致標(biāo)本出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象。

在日常血常規(guī)檢測(cè)中，冷凝集現(xiàn)象是影響其結(jié)果準(zhǔn)確性的主要因素之一。血細(xì)胞分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞的原理主要為電阻抗法。在檢測(cè)冷凝集標(biāo)本時(shí)，由于紅細(xì)胞聚集在一起，不能單個(gè)通過(guò)細(xì)胞通道，因此導(dǎo)致紅細(xì)胞計(jì)數(shù)偏低，紅細(xì)胞體積偏大。而白細(xì)胞使用熒光染料進(jìn)行染色，流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，檢測(cè)原理與紅細(xì)胞不用，因此結(jié)果影響沒(méi)有紅細(xì)胞那么大。

目前，關(guān)于如何消除冷凝集標(biāo)本的檢測(cè)方法研究結(jié)果不一。對(duì)于冷凝集的標(biāo)本，可以首先采用37℃水浴半小時(shí)的方法進(jìn)行糾正。但遇到嚴(yán)重凝集的標(biāo)本，采用血漿置換法或試劑標(biāo)本雙重加溫的方法，能有效的去除冷凝集素的干擾。由本文表1可以看出，冷凝集標(biāo)本經(jīng)兩種方法處理后與37℃水浴法比較，MCV結(jié)果低于水浴法，紅細(xì)胞（RBC）結(jié)果高于水浴法，血紅蛋白（HGB）、血小板（PLT）、白細(xì)胞（WBC）這三個(gè)結(jié)果無(wú)明顯差異。但是血漿置換過(guò)程有可能引起PLT丟失，導(dǎo)致PLT檢測(cè)結(jié)果均明顯降低，造成PLT結(jié)果不可信，并且操作繁瑣，手工造成的誤差大。試劑標(biāo)本雙重加溫法使整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中血液溫度接近37℃，基本消除冷凝集現(xiàn)象，使得結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。

綜上所述，冷凝集主要影響紅細(xì)胞檢及其參數(shù)的檢測(cè)，對(duì)白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板基本無(wú)影響。為保證檢驗(yàn)質(zhì)量，避免冷凝集標(biāo)本對(duì)血常規(guī)檢查的干擾，對(duì)經(jīng)37℃水浴后冷凝集現(xiàn)象不能改善的標(biāo)本，采用試劑標(biāo)本雙重加溫法及時(shí)檢測(cè)，能保證血常規(guī)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。