MALDI-TOF MS在臨床微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用

劉鴻麗

（泰興市人民醫(yī)院，江蘇 泰興 225400）

0 引言

微生物檢驗(yàn)是臨床用于診斷感染類疾病的主要手段，對疾病治療有效率的提高，具有重要價(jià)值。臨床微生物檢驗(yàn)方法，包括API法、RapID法，以及MALDI-TOF MS等多種。有研究指出，MALDI-TOF MS用于進(jìn)行臨床微生物檢驗(yàn)，速度快，且準(zhǔn)確度高。本文選取感染類疾病住院患者的體液標(biāo)本100例作為樣本，闡述了MALDI-TOF MS的應(yīng)用方法，并觀察了應(yīng)用效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院感染類疾病住院患者的體液標(biāo)本100例作為樣本，采用MALDI-TOF MS進(jìn)行微生物檢驗(yàn)。標(biāo)本來源：男54例、女46例。標(biāo)本類型：痰液36例（呼吸系統(tǒng)感染）、血液38例（膿毒血癥）、尿液26例（泌尿系統(tǒng)感染）。

1.2 方法

①準(zhǔn)備MALDI-TOF質(zhì)譜儀及Vitek細(xì)菌鑒定儀。需應(yīng)用的試劑，包括Taq酶及PCR反應(yīng)試劑等。②取樣本中的3-5 g細(xì)菌單個(gè)菌落+300 μL超純水+900 μL無水乙醇，離心2 min。③棄上清液，加70%甲酸50 μL、乙腈50 μL，繼續(xù)離心2 min。④取1 μL上清液，干燥后，加1 μL基質(zhì)液，覆蓋加樣區(qū)域。⑤設(shè)置質(zhì)譜儀參數(shù)：PIE為300 ns-500 ns，IS1為20 kV，頻率為20-200 Hz，⑥觀察并記錄檢驗(yàn)結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察100例樣本的檢驗(yàn)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 24.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)采用χ2檢驗(yàn)，以（%）表示。計(jì)量采用t檢驗(yàn)，以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示。P＜0.05視為數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

100例患者中，呼吸系統(tǒng)感染檢出率100%、膿毒血癥檢出率100%、泌尿系統(tǒng)感染檢出率為96.15%，詳見表1。

表1 100例樣本的檢驗(yàn)結(jié)果

3 討論

基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS），本質(zhì)為軟電離生物質(zhì)譜，屬于臨床新型的微生物檢驗(yàn)技術(shù)[1-5]。近些年來，由真菌所導(dǎo)致的感染類疾病的發(fā)病率明顯提升。如患者免疫力低下，病死率將明顯增高。真菌感染的常規(guī)檢驗(yàn)方法，以生化法為主[6]。雖可在一定程度上檢出病原菌，但效率較低。將MALDI-TOF MS法應(yīng)用到真菌檢驗(yàn)過程中，對不同的菌株進(jìn)行鑒定，能夠有效明確真菌種類，進(jìn)而達(dá)到提高疾病診斷準(zhǔn)確率的目的。單獨(dú)采用MALDITOF MS法，對真菌進(jìn)行檢驗(yàn)，效率及準(zhǔn)確率均值得肯定[7]。但如將其與Vitek MS System，以及DNA測序方法，與MALDI-TOF MS法聯(lián)合對真菌進(jìn)行檢驗(yàn)，效果將進(jìn)一步改善。臨床選取1243株菌株作為樣本，采用MALDI-TOF MS法+Vitek MS System+DNA測序法，對真菌進(jìn)行了檢驗(yàn)[8]。檢驗(yàn)結(jié)果顯示，96.7%的真菌，均可鑒定到種。真菌鑒定結(jié)果準(zhǔn)確率，可達(dá)到99%。僅2.4%的菌株，無法被鑒別。通過重復(fù)性檢驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，采用MALDI-TOF MS對真菌感染進(jìn)行檢驗(yàn)，重復(fù)性為97.3%。上述研究結(jié)果表明，MALDI-TOF MS在臨床真菌檢驗(yàn)中，應(yīng)用價(jià)值較高[9]。因此，如患者存在真菌感染的可能，建議臨床采用ALDI-TOF MS法，對真菌進(jìn)行鑒定。進(jìn)而明確是否存在真菌感染，提高疾病檢出率。確診為感染后，需立即給予治療。并視患者的病情，考慮繼續(xù)采用MALDI-TOF MS法，對治療效果進(jìn)行觀察[10]。一旦發(fā)生感染真菌類型有所變化，需對治療方案進(jìn)行調(diào)整，提高治療的針對性。

膿毒血癥，為血液感染的常見疾病。進(jìn)行血培養(yǎng)以及鑒定，為疾病病原菌檢驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)。但該檢驗(yàn)方法所需時(shí)間較長，檢驗(yàn)結(jié)果獲取的及時(shí)性差。將MALDI-TOF MS應(yīng)用到血液標(biāo)本的檢驗(yàn)中，可直接對標(biāo)本中的細(xì)菌，進(jìn)行培養(yǎng)與鑒定。鑒定結(jié)果準(zhǔn)確度，可達(dá)到66%及以上。需注意的是，草綠色鏈球菌，與肺炎鏈球菌，均屬于不易識(shí)別的菌種。因此檢驗(yàn)時(shí)，可能存在假陰性問題。為提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度，建議將細(xì)菌濃度，控制在107/mL以上。尿培養(yǎng)，為臨床用于診斷泌尿系統(tǒng)疾病的金標(biāo)準(zhǔn)。但具有效率低、成本高的缺陷。采用MALDI-TOF MS直接檢驗(yàn)?zāi)蛞簶?biāo)本，可于2次離心后，將白細(xì)胞去除，并收集到病原菌。檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度，以及檢驗(yàn)效率，均能夠得到保證。上述研究成果，進(jìn)一步證實(shí)了MALDI-TOF MS在臨床微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值。臨床可視感染類型，選擇不同標(biāo)本，采用該技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)，提高疾病檢出率。

綜上所述，將MALDI-TOF MS應(yīng)用到臨床微生物檢驗(yàn)中，有助于提高疾病檢出率，明確病原菌，提高治療有效率。