辣椒堿母藥氣相色譜分析方法研究

昝宏強，武 鵬，姜宜飛＊

（1.貴州省流通環(huán)節(jié)食品安全檢驗中心，貴州 貴陽550002；2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所，北京100125）

1 前言

辣椒堿英文名稱：Capsaicin，CAS號：404-86-4，分子式：C18H27NO3，化學(xué)名稱：［（4-羥基-3-甲氧基苯基）-甲基］-8-甲基-（反）-6-壬烯酰胺。辣椒堿屬生物堿類的新型生物農(nóng)藥。辣椒堿對害蟲的作用主要體現(xiàn)在干擾新陳代謝，膜損傷，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，主要作用方式為觸殺與驅(qū)避作用［1］。

目前國內(nèi)有關(guān)辣椒堿母藥的分析方法未見公開報道。本文所分析辣椒堿母藥是從辣椒干果中提取得到的產(chǎn)品。本文采用氣相色譜法，對辣椒堿母藥進行定量分析，該方法操作簡便、快速、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求。

2 試驗部分

2.1 試劑和溶液 丙酮（色譜純）；辣椒堿標(biāo)樣，已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.5％（由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供）；試樣：辣椒堿母藥（由某公司提供）；內(nèi)標(biāo)物：鄰苯二甲酸二戊酯，已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.01％，不應(yīng)含有干擾分析的雜質(zhì)。

2.2 主要儀器 氣相色譜儀：Agilent 7890A，具有氫火焰離子檢測器和自動進樣器；Agilent色譜工作站；色譜柱：30m×0.25mm（id）×0.25μm DB-1701毛細(xì)管色譜柱。

2.3 氣相色譜操作條件 柱室：50℃，保留1min，以15℃／min升至270℃保留11min；氣化室溫度：250℃，檢測室溫度：250℃，載氣（N2）：1.0mL／min；氫氣：30mL／min，空氣：300mL／min，進樣體積：1μL，分流比：5∶1，保留時間：鄰苯二甲酸二戊酯約：15.2，辣椒堿約20.1min。

辣椒堿標(biāo)樣和母藥的氣相色譜圖（圖1、2）。

圖1 辣椒堿標(biāo)樣氣相色譜圖

圖2 辣椒堿母藥氣相色譜圖

2.4 測定步驟

2.4.1 內(nèi)標(biāo)溶液的配制 稱取鄰苯二甲酸二戊酯標(biāo)樣0.025g（精確至0.000 2g），置于250mL容量瓶中，加入丙酮溶解，超聲10min，恢復(fù)至室溫后用丙酮稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 標(biāo)樣溶液的配制 稱取辣椒堿標(biāo)樣0.02g（精確至0.000 2g），置于25mL容量瓶中，用移液管準(zhǔn)確加入5mL內(nèi)標(biāo)溶液，加入丙酮溶解，超聲10min，恢復(fù)至室溫后用丙酮稀釋至刻度，搖勻。

2.4.3 試樣溶液的配制 稱取含辣椒堿0.02g的試樣（精確至0.000 2g），置于25mL容量瓶中，用移液管準(zhǔn)確加入5mL內(nèi)標(biāo)溶液，加入丙酮溶解，超聲10min，恢復(fù)至室溫后用丙酮稀釋至刻度，搖勻。

2.4.4 測定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對變化＜1.5％后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進行測定。

2.4.5 計算 此辣椒堿標(biāo)樣中含有辣椒堿與二氫辣椒堿，含量計算時將二者加和，以辣椒堿計。辣椒堿保留時間為19.9min，二氫辣椒堿約20.2min。將測得的2針試樣溶液和試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的辣椒堿與內(nèi)標(biāo)物峰高之比，分別進行平均。試樣中辣椒堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω（％），按下式計算：

式中：

r1──標(biāo)準(zhǔn)溶液中辣椒堿與內(nèi)標(biāo)物峰高比的平均值；

r2──試樣溶液中辣椒堿與內(nèi)標(biāo)物峰高比的平均值；

m1──辣椒堿標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2──試樣的質(zhì)量，g；

P──標(biāo)準(zhǔn)品中辣椒堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，％。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇 辣椒堿為脂溶性物質(zhì)，故選擇丙酮作為樣品溶劑。當(dāng)選擇弱極性的HP-5毛細(xì)管色譜柱進行分離時色譜峰形較差，改為中等極性DB-1701毛細(xì)管色譜柱進行分離后峰形改善。為了得到更好的分離效果和峰形，在DB-1701色譜柱上最終確定使用如下程序升溫條件：柱室：50℃，保留1min，以15℃／min升至270℃，保留11min。在此條件下有效成分與雜質(zhì)能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，能在短時間能得到滿意的分析結(jié)果。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性試驗 稱取辣椒堿標(biāo)樣0.26g（精確至0.000 2g），置于250mL容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液待用。用移液管分別移取該儲備液1.25、2.50、3.75、5.00、12.5mL于25mL容量瓶中，用移液管分別準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)溶液5mL，用丙酮稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜操作條件下進行分析，以辣椒堿與內(nèi)標(biāo)溶液質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰高比為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線。試驗測得辣椒堿線性方程為y＝0.186 9x-0.056 9，相關(guān)系數(shù)為0.999 1。結(jié)果表明辣椒堿在測試的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.3 分析方法的精密度試驗 從同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5個試樣，在上述色譜操作條件下進行分析，測得辣椒堿的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21，變異系數(shù)為2.44％（表1）。

表1 分析方法的精密度試驗結(jié)果

3.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗 從已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的辣椒堿（8.6％）中稱取5個試樣，從3.2中配制的儲備液各取5mL于5個樣品中，在上述色譜操作條件下進行分析，測得辣椒堿的平均回收率為100.83％（表2）。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗結(jié)果

4 結(jié)論

試驗建立了氣相色譜法檢測辣椒堿中有效成分的分析方法。試驗結(jié)果表明，辣椒堿在測試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確度和精密度較高，具有操作簡便、快速的特點，是產(chǎn)品質(zhì)量控制和應(yīng)用研究中較為理想的分析方法。