泰地羅新注射液在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及生物利用度研究

閆超群，黎健業(yè)，張申，謝順，胡浪，顧欣，曹瑩，黃士新，黃顯會(huì)

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泰地羅新注射液在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及生物利用度研究

閆超群1，黎健業(yè)1，張申1，謝順1，胡浪1，顧欣2，曹瑩2，黃士新2，黃顯會(huì)1

（1華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院/廣東省獸藥研制與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510642；2上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103）

【目的】以健康豬為研究對(duì)象，開展泰地羅新注射液在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征及生物利用度的研究，從而為泰地羅新的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā窟x取20頭健康豬，隨機(jī)分為2組，按4 mg·kg-1進(jìn)行單次靜注、肌注泰地羅新注射液，于注射后5 min、10 min、15 min、0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、10 d、11 d、12 d、13 d、14 d、15 d進(jìn)行前腔靜脈采血，采用Phenomenex Luna C18（150 mm×2 mm，5 μm）。以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫程序洗脫，流速0.25 mL·min-1，柱溫為30℃，進(jìn)樣量 5.0 μL。樣品自然解凍，準(zhǔn)確吸取0.5 mL血漿于5 mL離心管內(nèi)，加入2 mL乙腈，渦旋混勻，震蕩10 min，8 000 r/min離心10 min，取上清液35℃下氮?dú)獯蹈桑? mL復(fù)溶液復(fù)溶，過0.22 μm微孔濾膜，LC-MS/MS檢測(cè)分析。泰地羅新在4—1 000 ng·mL-1的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.994—0.998，檢測(cè)限為2 ng·mL-1，定量限為4 ng·mL-1，該方法的相對(duì)回收率為87.91%—104.93%，呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.994—0.998。批內(nèi)變異系數(shù)為2.12%—12.09%，批間變異系數(shù)3.92%—10.65%。該方法靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，可以用于泰地羅新在豬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究。泰地羅新采用電噴霧離子源（ESI）離子化；正離子模式掃描；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），電噴霧電壓（IS）為5500V；霧化氣壓力（GS1）為50psi；輔助氣流速（GS2）為50 L·min-1，氣簾氣壓力（CUR）為25 psi；離子源溫度（TEM）為550 ℃；碰撞室壓力（CAD）為6 psi。m/z→734.6/98.1和m/z→734.6/174.4。HPLC-MS/MS法檢測(cè)豬血漿中泰地羅新的濃度。采用藥動(dòng)學(xué)軟件 Winnonlin5.2.1的非房室模型分析方法，計(jì)算有關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)?！窘Y(jié)果】豬靜脈注射給藥后，AUClast和AUCinf(pred)分別為（18030.30±7560.75） h·ng·mL-1和（18795.31±7455.23） h·ng·mL-1。t1/2為（99.42±22.25） h，MRT為（81.71±12.15） h。肌肉注射給藥后，Cmax為（886.00±155.63） ng·mL-1，Tmax為（0.51±0.30）h，AUClast和AUCinf(pred)分別為（19702.05±6442.36）h·ng·mL-1和（20840.08±6849.76） h·ng·mL-1。t1/2為（100.83±20.23） h，MRT為（81.80±9.44） h。絕對(duì)生物利用度為109.27%?！窘Y(jié)論】泰地羅新肌注后在豬體內(nèi)具有吸收迅速，分布廣泛，達(dá)峰迅速，消除較慢，生物利用度高等特點(diǎn)，可在獸醫(yī)臨床上安全使用。

泰地羅新；藥動(dòng)學(xué)；生物利用度；豬

0 引言

【研究意義】引起豬呼吸道疾?。⊿RD，swine respiratory disease）病原體多樣，具有高的發(fā)病率和死亡率，每年給全球帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。常見的臨床致病菌主要有豬胸膜肺炎放線桿菌（）、多殺性巴氏桿菌（）、支氣管敗血波氏桿菌（）以及副豬嗜血桿菌（）等[2-6]。大環(huán)內(nèi)酯類藥物是臨床上常用的治療SRD感染的藥物。其與原核生物50S核糖體亞基中的23S rRNA結(jié)合，通過阻斷肽鏈的延長(zhǎng)，從而抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成[7]。大環(huán)內(nèi)酯類治療效果通常呈時(shí)間依賴性[8]，但泰地羅新呈濃度依賴性[9]。大環(huán)內(nèi)酯類藥物一般是抑制微生物的生長(zhǎng)，但對(duì)某些病原體可以起到殺菌的作用。替米考星、泰樂菌素等大環(huán)內(nèi)酯類抗生素因?yàn)榫哂休^差的細(xì)胞外膜穿透力，因此很少用來治療具有細(xì)胞壁的陰性菌感染[10]。泰地羅新（tildipirosin）是新型動(dòng)物專用的16元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，是半合成泰樂菌素的衍生物，其分子式為C14H71N3O8，分子量為734.02D，微溶于水中，易溶于有機(jī)溶劑（如甲醇、丙酮等）?；瘜W(xué)式見圖1。較其他大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，泰地羅新獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)是在C20和C30的位點(diǎn)有兩個(gè)哌啶取代基，在大環(huán)內(nèi)酯環(huán)的C5位置上有一個(gè)堿性碳霉糖，由于三個(gè)氮原子可以質(zhì)子化，因此泰地羅新為有機(jī)堿，且脂溶性高，易穿過細(xì)胞壁[11]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】泰地羅新最早由Intervet公司生產(chǎn)，CAS號(hào)為：328898-40-4。泰地羅新為單次給藥，牛的給藥方式為皮下注射（規(guī)格為18%），豬的給藥方式為肌肉注射（規(guī)格為4%），給藥劑量均為4 mg·kg-1[8]。2011年歐盟獸用藥品委員會(huì)（CVMP）準(zhǔn)許了Intervet公司以泰地羅新為主要成分的無(wú)菌注射液（商品名為Zuprevo）的市場(chǎng)許可申請(qǐng)，隨后美國(guó)也相繼批準(zhǔn)上市[12]。在國(guó)內(nèi)已有某些廠家自主研制泰地羅新注射液，而國(guó)產(chǎn)泰地羅新注射液在動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)尚未研究。【本研究切入點(diǎn)】本研究探討了健康豬靜注、肌注泰地羅新注射液的藥動(dòng)力學(xué)過程，并闡明其藥動(dòng)學(xué)特征和肌注給藥的生物利用度，旨在為國(guó)產(chǎn)泰地羅新在國(guó)內(nèi)臨床上的使用制定合理的給藥方案，并提供理論依據(jù)?！緮M解決的關(guān)鍵問題】泰樂菌素和替米考星等大環(huán)內(nèi)酯類藥物在臨床上均具有良好的治療效果，但一般需要多次重復(fù)給藥才能發(fā)揮較好的藥效，大多還以拌料或飲水方式給藥[13]。但是從長(zhǎng)遠(yuǎn)來看藥物大劑量、長(zhǎng)期重復(fù)使用[14]，加速了臨床耐藥菌的出現(xiàn)[15-16]。而新型大環(huán)內(nèi)酯類抗生素泰地羅新，具有給藥后分布廣泛，半衰期長(zhǎng)等特點(diǎn)，以單劑量注射給藥即可有效治療豬SRD、牛的呼吸道疾?。˙RD，bovine respiratory disease），除此之外泰地羅新對(duì)豬布氏桿菌病（）也有好的治療效果[17]。BARTRAM等對(duì)比了泰拉霉素與泰地羅新在感染牛支原體的臨床治療效果上，結(jié)果表明，泰拉霉素的治療效果優(yōu)于泰地羅新[18]。本研究確定了豬血漿中泰地羅新檢測(cè)方法的建立及確證，以及泰地羅新在豬體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)規(guī)律的認(rèn)識(shí)，為泰地羅新注射液臨床合理給藥方案的制定提供參考。

圖1 泰地羅新化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

20頭健康的杜洛克、長(zhǎng)白、約克夏雜交豬，雌、雄各半，8周齡左右，體重20 kg左右。按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食，飼料為全價(jià)日糧，不含抗菌藥物。臨床觀察兩周表現(xiàn)健康。20頭豬隨機(jī)分為2組，每組10頭，雌、雄各半，分別靜脈注射、肌肉注射給藥進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)，給藥劑量均為4 mg·kg-1體重。試驗(yàn)前16 h起及給藥后4 h期間禁食，僅自由飲水。

1.2 藥品和試劑

受試藥物：泰地羅新注射液，含量4%（100 mL：4 g），批號(hào)：20150401。泰地羅新標(biāo)準(zhǔn)品，批號(hào)：20150209，含量：99.26%，均由上海同仁藥業(yè)有限公司提供。

1.3 儀器設(shè)備

美國(guó)Agilent公司1200型高效液相色譜儀（配四元泵、脫氣泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱等），美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司API 4000 電噴霧—串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀（配Analyst1.5 軟件），美國(guó)BECKMAN COULTER公司Avanti J-26 高速冷凍離心機(jī)，上海青浦滬西儀器廠XW—80A 旋渦混合儀。美國(guó)Beckman-Coulter公司Avanti J-26 XP型高速冷凍離心機(jī)。Milli-Q公司Milli-Q去離子水發(fā)生器。德國(guó)eppendorf公司Research型可調(diào)微量移液器。瑞士Mettler公司生產(chǎn)AT-261型電子分析天平。

1.4 分組、給藥及采樣

豬只仰臥保定，從前腔靜脈采血，給藥前所有試驗(yàn)動(dòng)物采集一次空白血。靜脈（耳緣靜脈）、肌肉注射給藥后分別于5 min、10 min、15 min、0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、10 d、11 d、12 d、13 d、14 d、15 d采集血樣。每次采血5 mL左右，置于含肝素的離心管中，離心分離血漿，-80℃冰箱保存，待測(cè)。

1.5 血漿中泰地羅新含量測(cè)定

采用Phenomenex Luna C18（150 mm×2 mm，5 μm）。流動(dòng)相為0.1%的甲酸水和乙腈；梯度洗脫程序洗脫，流速為0.25 mL·min-1；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為5.0 μL。

泰地羅新采用電噴霧離子源（ESI）離子化；正離子模式掃描；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），電噴霧電壓（IS）為5 500 V；霧化氣壓力（GS1）為50 psi；輔助氣流速（GS2）為50 L·min-1，氣簾氣壓力（CUR）為25 psi；離子源溫度（TEM）為550℃；碰撞室壓力（CAD）為6 psi。泰地羅新用于定量和定性的離子分別為：m/z→734.6/98.1和m/z→734.6/174.4。

在上述條件下，泰地羅新的檢測(cè)限和定量限分別為2 g·mL-1和4 ng·mL-1。血漿中的泰地羅新在4— 1 000 ng·mL-1的范圍內(nèi)，泰地羅新的相對(duì)回收率為87.91%—104.93%，呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.994—0.998。批內(nèi)變異系數(shù)為2.12%—12.09%，批間變異系數(shù)為3.92%—10.65%。

1.6 樣品處理

血漿樣品自然解凍，混勻。準(zhǔn)確吸取0.5 mL血漿于5 mL離心管內(nèi)，加入2 mL乙腈，渦旋混勻，震蕩10 min，8 000 r/min離心10 min，取上清液35℃下氮?dú)獯蹈桑? mL復(fù)溶液復(fù)溶，過0.22 μm微孔濾膜，LC-MS/MS檢測(cè)分析。

1.7 數(shù)據(jù)分析處理

采用美國(guó)Pharsight公司藥動(dòng)學(xué)軟件Winnonlin 5.2.1的非房室模型來處理藥動(dòng)數(shù)據(jù)，計(jì)算出每頭試驗(yàn)豬的關(guān)鍵藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（F、AUC、Tmax、Cmax等），然后計(jì)算平均值（）及標(biāo)準(zhǔn)差（S.D.），同時(shí)以血藥濃度平均值對(duì)時(shí)間作藥-時(shí)曲線圖（圖2）。

2 結(jié)果

2.1 靜注泰地羅新在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征

本試驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)經(jīng)Winnonlin5.2.1軟件采用非房室模型進(jìn)行分析。靜脈注射結(jié)果表明，按4 mg·kg-1的劑量給豬靜脈注射后，泰地羅新在豬體內(nèi)獲得的血藥濃度—時(shí)間數(shù)據(jù)符合非房室模型。泰地羅新給藥后，消除半衰期t1/2為（99.42±22.25）h，藥時(shí)曲線面積AUClast為（18030.30±7560.75）h·ng·mL-1。消除半衰期t1/2為（99.42±22.25）h。MRT為（81.71±12.15）h。說明靜脈注射給藥后分布廣泛，表觀分布容積大，半衰期長(zhǎng)，消除緩慢（表1，2）。

2.2 肌注泰地羅新在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征

本試驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)經(jīng)Winnonlin5.2.1軟件采用非房室模型進(jìn)行分析。泰地羅新按4 mg·kg-1的劑量肌肉注射后，泰地羅新在豬體內(nèi)獲得的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)符合非房室模型。肌注泰地羅新后，達(dá)峰時(shí)間tmax為（0.51±0.30）h，峰濃度Cmax為（886.00±155.63）ng·mL-1，消除半衰期t1/2為（100.83±20.23）h，藥時(shí)曲線下面積AUClast為（19702.05 ±6442.36）h·ng·mL-1。MRT為（81.80±9.44）h。泰地羅新注射液的絕對(duì)生物利用度為109.27%，說明肌注給藥吸收完全。

A：0-4 h，B：0-360 h

3 討論

3.1 安全性

據(jù)EMA報(bào)道，大鼠按2 000 mg·kg-1bw口服泰地羅新，表現(xiàn)出皮膚褶皺、鎮(zhèn)靜、身體躬起、閉目、失衡、流涕等癥狀。剖檢無(wú)其他病理變化。小鼠按6.25、12.5、25 和50 mg·kg-1bw靜脈注射后，高于12.5 mg·kg-1bw劑量組全部死亡，且劑量越大死亡越快，并表現(xiàn)出失衡、呼吸急促、不安、抽搐、痙攣等癥狀。小鼠靜脈注射泰地羅新的LD50（半數(shù)致死量）的范圍為6.25＜LD50＜12.5 mg·kg-1bw[19]。與替米考星一樣，泰地羅新有一定的心臟毒性，犬按20 mg·kg-1bw，肌肉一次注射，給藥后，犬血壓有輕微且明顯的下降。在靶動(dòng)物豬的安全性試驗(yàn)中。豬按4、8、12、20 mg·kg-1bw的劑量進(jìn)行肌肉注射給藥，每個(gè)注射位點(diǎn)的給藥體積不超過5 mL。在所有進(jìn)行多倍推薦劑量注射的試驗(yàn)組中，豬會(huì)短暫地表現(xiàn)出精神萎靡。3倍推薦劑量組和5倍推薦劑量組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)短暫的震顫癥狀，5倍劑量組甚至出現(xiàn)休克癥狀。豬肌肉注射5倍推薦劑量給藥后，注射部位出現(xiàn)不適，腫脹。白細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞以及肌酸磷酸激酶增加[20]。除了注射部位，試驗(yàn)動(dòng)物的其他部位并沒有發(fā)現(xiàn)明顯的病理變化[21]。本試驗(yàn)過程中肌肉注射和靜脈注射，給藥劑量均為4 mg·kg-1bw，給藥后臨床無(wú)不良反應(yīng)。

表1 豬肌肉、靜注泰地羅新注射液后平均血藥濃度（4 mg·kg-1b.w.）（±SD，n=10）

Table 1 Mean ± SD plasma concentrations in pigs administered a single intramuscular(i.m.) or intravenous (i.v.) injection of tildipiroson at 4 mg·kg-1body weight, respectively (ng·mL-1) (±SD, n=10)

表2 豬靜脈、肌肉注射泰地羅新注射液（4 mg·kg-1bw）后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（注射液規(guī)格為：4%）

Table 2 Plasma pharmacokinetics parameters after single intramuscular (i.m.) or intravenous (i.v.) administration of 40 mg·mL-1tildipirosin solution for injection at 4 mg·kg-1body weight

3.2 藥動(dòng)學(xué)

據(jù)EMA報(bào)道，豬按4 mg·kg-1bw肌肉注射泰地羅新注射液后，tmax小于0.5 h，14 d后血漿藥物濃度低于定量限（10 ng·mL-1），t1/2大于4 d，AUClast為11 012 h·ng·mL-1，MRTlast大于3.5 d[20-21]。Rose等亦報(bào)道了泰地羅新肌肉注射給藥后（4 mg·kg-1），tmax為（0.38±0.14）h，Cmax為（895±453）ng·mL-1，t1/2為（106±15）h，AUClast為（11012±2989） h·ng·mL-1[11]。廖遠(yuǎn)軍報(bào)道泰地羅新肌肉注射后（4 mg·kg-1），tmax為（0.39±0.18）h，Cmax為（0.97±0.39）μg·mL-1，t1/2為（124.5±42.1）h，AUClast為（15.75±5.19）h·μg·mL-1[22]。這與本研究得到的泰地羅新藥動(dòng)學(xué)參數(shù)接近。AUC有較大的差異，這可能是樣品的檢測(cè)限和納入試驗(yàn)動(dòng)物的品種等不同引起的差異。說明該制劑的生物利用度比已報(bào)道的更高，達(dá)到109.27%。已報(bào)道泰地羅新在不同動(dòng)物的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表3。

表3 泰地羅新在不同動(dòng)物體內(nèi)經(jīng)肌肉、皮下、靜脈注射后的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（±SD）

Table 3 Summary of the mean (±SD) plasma pharmacokinetic parameters in different animals administered a single intramuscular (i.m.), subcutaneous(s.c.) or intravenous (i.v.) injection of tildipirosin

Cmax：血藥峰濃度；Tmax：藥物達(dá)到峰濃度的時(shí)間；AUClast：0 h到最后一個(gè)采樣點(diǎn)藥時(shí)曲線下面積；AUCinf (predicted)：0 h到無(wú)窮大藥時(shí)曲線下面積；T1/2：體內(nèi)藥物下降一半所需要的時(shí)間；MRTlast：0 h到最后一個(gè)采樣點(diǎn)平均滯留時(shí)間

Cmax, maximum observed concentration in plasma; Tmax, time to reach maximum observed concentration in plasma; AUClast, area under concentration-vs.-time curve from time 0 to the last sampling time associated with a quantifiable drug concentration; AUCinf (predicted), area under concentration vs.time curve from time zero extrapolated to infinity (predicted); T1/2, terminal half-life; MRTlast, mean residence time from the time of dosing to the time of last measurable concentration

3.3 藥效學(xué)

泰地羅新的抗微生物活性譜包括：胸膜肺炎放線桿菌（），多殺巴氏桿菌（），支氣管敗血波氏桿菌（）和副豬嗜血桿菌（），它們是最常與豬呼吸道疾病（SRD，swine respiratory disease）相關(guān)的細(xì)菌病原體。在體外，泰地羅新的作用是抑制多殺巴斯德氏菌和支氣管敗血波氏桿菌，對(duì)胸膜肺炎放線桿菌和副豬嗜血桿菌是殺菌的。EMA報(bào)道的泰地羅新對(duì)常見致病菌見表4。本試驗(yàn)給藥后血漿藥物濃度Cmax為（886.00±155.63）ng·mL-1，值得一提的是，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的在組織中的分布是遠(yuǎn)高于血漿[25- 26]，尤其是在吞噬細(xì)胞（如多核白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）周圍[27-29]。ROSE等報(bào)道給藥后的泰地羅新被迅速吸收和廣泛分布到呼吸道感染部位。在肺中，泰地羅新在給藥后第24 h達(dá)到峰值，為（4.25±0.72）μg·kg-1，而同時(shí)間的血漿濃度僅為（0.051±0.005）μg·mL-1，肺/血漿的比率為83。之后緩慢下降，在給藥后第5天比率達(dá)到最高的148。直到給藥后17 d，依然可以檢測(cè)到肺部藥物濃度，其在肺部的消除半衰期約為7 d。同樣考察了支氣管液中泰地羅新的藥物含量，給藥后5 d，支氣管液中泰地羅新含量高達(dá)（14.31±3.67）μg·g-1，支氣管液/血漿比率為681[11]。還有研究表明，豬流行性胸膜肺炎放線桿菌（APP）可以長(zhǎng)期在扁桃體中成為這種微生物的無(wú)癥狀攜帶者。給藥后，扁桃體中泰地羅新的最大濃度在給藥后1 d觀察到，一直持續(xù)到第15天。最后，扁桃體AUC/血漿AUC為97.9，和扁桃體t1/2（h）明顯高于血漿?？咕委熞驯挥糜诟馓殷w中的APP[30]。

表4 泰地羅新對(duì)常見致病菌MIC

Table 4 Tildipirosin against common pathogens MIC (μg·mL-1)

4 結(jié)論

本試驗(yàn)通過靜脈注射和肌肉注射給藥研究了國(guó)產(chǎn)泰地羅新注射液在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)，試驗(yàn)結(jié)果表明國(guó)產(chǎn)泰地羅新注射液在健康豬體內(nèi)具有吸收迅速，半衰期長(zhǎng)，生物利用度高等特點(diǎn)，獸醫(yī)臨床上可安全使用。本試驗(yàn)首次科學(xué)的評(píng)價(jià)了國(guó)產(chǎn)泰地羅新注射液在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，為其新獸藥審批及在臨床上合理使用提供了試驗(yàn)依據(jù)。對(duì)獸醫(yī)臨床上治療由胸膜肺炎放線桿菌、支原體、巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌等引起的疾病具有重大意義。

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（責(zé)任編輯 林鑒非）

Pharmacokinetics and Bioavailability of Tildipirosin Solution in Pigs

YAN ChaoQun1, LI JianYe1, ZHANG Shen1, XIE Shun1, HU Lang1, GU Xin2, CAO Ying2, HUANG ShiXin2, HUANG XianHui1

(1College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University/Guangdong Provincial Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutics Development and Safety Evaluation, Guangzhou 510642;2Shanghai Animal Disease Control Center, Shanghai 201103)

【Objective】The aim of this study was to investigate the pharmacokinetic properties and bioavailability of tildipirosin in pigs after an intravenous or intramuscular administration of 4 mg·kg-1body weight. 【Method】Twenty healthy pigs were selected and randomly divided into 2 groups and received 4 mg·kg-1of tildipirosin injection by either intravenous or intramuscular administration. The blood was collected at 5 min, 10 min, 15 min, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, 12 h, 1 d, 2 d, 3 d, 4 d, 5 d, 6 d, 7 d, 8 d, 9 d, 10 d, 11 d, 12 d, 13 d, 14 d and 15 d after administration. Phenomenex Luna C18 (150 mm×2 mm, 5 μm) was used. Acetonitrile-0.1% formic acid aqueous solution was used as the mobile phase. The gradient elution procedure was used. The flow rate was 0.25 mL·min-1, the column temperature was 30℃, and the injection volume was 5.0 μL. The sample was thawed naturally, 0.5 mL of plasma was accurately pipetted into a 5 mL centrifuge tube, 2 mL of acetonitrile was added, vortexed and shaken for 10 min, centrifuged at 8 000 r/min for 10 min. And then the supernatant was dried with nitrogen at 35℃ and reconstituted in 1 mL of solution. 0.22 μm microporous membrane, LC-MS/MS detection analysis. Tildipirosin showed a good linearity in the concentration range of 4-1000 ng·mL-1, with a correlation coefficient of 0.994-0.998, a detection limit of 2 ng·mL-1, and a limit of quantification of 4 ng·mL-1. The relative recovery rate of this method was 87.91%-104.93%, which showed a good linear relationship with the correlation coefficient of 0.994-0.998. The coefficient of intra-assay coefficient of variation was 2.12%-12.09%, and the inter-assay coefficient of variation was 3.92%-10.65%. The experimental method had high sensitivity and simple operation, and could be used for the pharmacokinetic study of tildipirosin in pigs. MS conditions of detection method: ESI ion source, positive ion scan, ion spray voltage: 5 500 V, TEM: 550℃, the pressure of CUR: 25 psi, the pressure of GS2 50 L/min, the pressure of collision CAD: 6 psi. the quantitative ion is: tildipirosin m/z→735.1/98.0. Blood samples were collected and detected by high-performance liquid chromatography (HPLC) with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Pharmacokinetic parameters were estimated using the WinNonlin5.2.1 software package and SPSS 16.0 analysis of the time and concentration data.【Result】After intravenous injection, AUClastand AUCinf (pred)were (18030.30 ±7560.75) h·ng·mL-1and (18795.31±7455.23) h·ng·mL-1, respectively;t1/2was (99.42±22.25) h, and MRT was (81.71±12.15) h. After intramuscular injection, Cmaxwas (886.00±155.63) ng·mL-1; Tmaxwas (0.51 ± 0.30) h. AUClastand AUCinf (pred)were (19702.05±6442.36) h·ng·mL-1and (20840.08±6849.76) h·ng·mL-1, respectively; t1/2was (100.83±20.23) h and MRT was (81.80±9.44) h; the absolute bioavailability was 109.27%. 【Conclusion】After intramuscular injection, the tildipirosin was absorbed quickly in pigs, distributed widely, peaked rapidly, and eliminated slowly.

tildipirosin; pharmacokinetic; bioavailability; pig

2018-01-24；

2018-05-23

“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2016YFD0501306）

閆超群，E-mail：1368268753@qq.com。 通信作者黃顯會(huì)，Tel：020-87344801；E-mail：xhhuang@scau.edu.cn