• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    木霉菌對(duì)土壤微生物多樣性及草莓生長(zhǎng)和發(fā)病的影響

    2018-10-16 07:13:46靳亞忠咸洪泉
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年18期
    關(guān)鍵詞:霉菌草莓真菌

    王 寧,劉 銅,靳亞忠,咸洪泉

    (1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué),山東青島266109;2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué),黑龍江大慶163319)

    木霉菌是優(yōu)良的生防真菌,在應(yīng)用真菌防治土傳病害的研究中,應(yīng)用最廣泛的真菌殺菌劑便是木霉菌[1]。土壤微生物群落結(jié)構(gòu)失衡是造成土傳病害發(fā)生的主要原因[2-3],其多樣性高低是衡量土壤健康與否的一項(xiàng)重要指標(biāo)[4]。施用木霉菌后,通過對(duì)土壤微生物多樣性產(chǎn)生影響來達(dá)到防治病害、改良土壤的作用,因此,研究土壤微生物多樣性意義重大。目前微生物多樣性的研究方法多為活菌培養(yǎng),局限在部分微生物總體數(shù)量研究,對(duì)種類的研究比較少,而土壤中的大多數(shù)微生物是無法進(jìn)行培養(yǎng)的,可培養(yǎng)率只有 0.1% ~1.0%[5-6]。高通量測(cè)序具有無需培養(yǎng)、能夠客觀還原菌群結(jié)構(gòu)和數(shù)據(jù)量大等優(yōu)點(diǎn)[7],近年來,高通量測(cè)序技術(shù)不斷發(fā)展,尤其是第二代測(cè)序方法,即Illumina 454和SOLiD Ion Torrent具有諸多優(yōu)點(diǎn)[8-10]。這些測(cè)序平臺(tái)最大數(shù)據(jù)產(chǎn)出通量高,在土壤微生物多樣性的研究中可以獲得豐富的信息[11-12]。因此,筆者試圖通過對(duì)土壤微生物基因組進(jìn)行高通量測(cè)序,研究木霉菌施用后對(duì)土壤微生物多樣性的影響,為進(jìn)一步揭示木霉菌和土壤微生物多樣性之間的關(guān)系提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    供試菌劑為青島農(nóng)業(yè)大學(xué)研發(fā)的木霉菌可濕性粉劑,棘孢木霉(Trichoderma asperellum)的孢子濃度為1×109CFU/g,草莓品種為紅顏。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)在黑龍江省大慶市薩爾圖區(qū)春雷農(nóng)場(chǎng)塑料大棚內(nèi)進(jìn)行,木霉菌可濕性粉劑于苗期施用。設(shè)木霉菌可濕性粉劑、對(duì)照2個(gè)處理,小區(qū)面積為0.02 hm2,共3次重復(fù)。木霉菌可濕性粉劑處理為將木霉菌可濕性粉劑稀釋300倍進(jìn)行灌根,灌根量為300 mL/株,對(duì)照用等體積的水灌根。灌根時(shí)間為2016年11月4日,21 d后采用對(duì)角線五點(diǎn)取樣法取草莓根際土。

    1.2.2 土壤微生物測(cè)序 微生物多樣性研究主要基于編碼核糖體RNA的核酸序列,其中細(xì)菌多樣性研究主要是基于16SrDNA V3+V4區(qū),真菌多樣性研究主要基于內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS1區(qū)。提取樣品總DNA,細(xì)菌V3+V4擴(kuò)增采用的引物如下:F,5'-ARACTYCTACGGRAGGCWG -3';R,5'-GACTACNVGGGTATCTAATCC-3'。真菌 ITS1擴(kuò)增引物如下:ZF,5'-AACCTGCGGAAGGATCATT -3';ZR,5'-GARCCAAGAGATCCRTTG-3'。進(jìn)行PCR擴(kuò)增并對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行純化、定量和均一化形成測(cè)序文庫(kù),對(duì)于建好的文庫(kù)先進(jìn)行文庫(kù)質(zhì)檢,質(zhì)檢合格的文庫(kù)用Illumina HiSeq 2500進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序由北京百邁客生物科技有限公司完成。

    1.2.3 信息分析流程 利用雙末端測(cè)序(paired-end)的方法,構(gòu)建小片段文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序。通過對(duì)reads(讀長(zhǎng))拼接過濾,得到優(yōu)化序列(tags)。將優(yōu)化序列進(jìn)行操作分類單元(operational taxonomic units,簡(jiǎn)稱OTUs)聚類,并進(jìn)行物種注釋及豐度分析,以揭示樣品的物種構(gòu)成。進(jìn)一步進(jìn)行α多樣性分析(alpha diversity),研究單個(gè)樣品內(nèi)部的物種多樣性,統(tǒng)計(jì)各樣品在97%相似度水平下的 Ace、Chao1、Shannon及Simpson指數(shù)。

    1.2.4 草莓生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定 施用木霉菌可濕性粉劑50 d后,測(cè)定單株葉片數(shù)及單張葉面積,測(cè)定數(shù)量為10株。單張葉面積的測(cè)定參考喬寶營(yíng)等的方法[13]。

    1.2.5 草莓灰霉病的調(diào)查 施藥后在生育期內(nèi)定期觀測(cè)連作草莓土傳病害的發(fā)生情況,主要調(diào)查整個(gè)試驗(yàn)處理草莓灰霉病的病株數(shù),并參照朱虹等方法計(jì)算防效[14]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 樣品測(cè)序結(jié)果評(píng)估

    通過數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件處理各階段樣品序列數(shù),評(píng)估數(shù)據(jù)質(zhì)量。各樣品測(cè)序數(shù)據(jù)評(píng)估結(jié)果如表1、表2所示。

    稀釋性曲線(rarefaction curve)用于驗(yàn)證測(cè)序數(shù)據(jù)量是否足以反映樣品中的物種多樣性,并間接反映樣品中物種的豐富程度[15]。由圖1可以看出,在一定范圍內(nèi),隨著測(cè)序數(shù)的增多,若曲線表現(xiàn)為急劇上升,則表示群落中有大量物種被發(fā)現(xiàn);當(dāng)曲線趨于平緩時(shí),則表示此環(huán)境中的物種并不會(huì)隨著測(cè)序數(shù)量的增加而明顯增多。稀釋曲線可以作為對(duì)各樣本測(cè)序量是否充分的判斷,如果曲線急劇上升,表明測(cè)序量不足,需要增加序列數(shù);反之,則表明樣品序列充分,可以進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。樣品稀釋曲線分別在測(cè)序數(shù)為10 000、20 000條處逐漸趨向平坦,而表1顯示,細(xì)菌的優(yōu)化測(cè)序數(shù)量超過60 000條,表2顯示,真菌的優(yōu)化序列超過40 000條,說明樣品序列充分,測(cè)序數(shù)量合理。

    表1 樣品細(xì)菌測(cè)序數(shù)據(jù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

    表2 樣品真菌測(cè)序數(shù)據(jù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

    2.2 OTU 劃分結(jié)果

    6個(gè)樣品測(cè)序共獲得479 966對(duì)reads,雙端reads拼接、過濾后共產(chǎn)生301 529條tags,平均每個(gè)樣品產(chǎn)生 43 076 tags。根據(jù)不同的相似度水平,對(duì)所有序列進(jìn)行OTU劃分,在一般情況下,如果序列之間的相似性高于97%就可以把它定義為1個(gè)OTU,每個(gè)OTU對(duì)應(yīng)1種代表序列[16]。使用QIIME(version 1.8.0)軟件中的UCLUST對(duì)tags在97%的相似度水平下進(jìn)行聚類,獲得OTU,并基于Silva(細(xì)菌)和UNITE(真菌)分類學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)OTU進(jìn)行分類學(xué)注釋。由表3看出,各處理組和對(duì)照組細(xì)菌的總種類數(shù)變化非常小,而真菌種類的數(shù)量差異較大,處理組較對(duì)照組真菌種類總數(shù)明顯減少,降低了 17.57%。

    表3 通過聚類得到的不同處理土壤中的OTU數(shù)量

    2.3 屬水平豐度變化

    由圖2可以看出,細(xì)菌屬水平的豐度變化表現(xiàn)如下:在土壤中,特呂珀菌屬(Truepera)、Chryseolinea、藤黃單胞菌屬(Luteimonas)、鐵礦沙單胞菌屬(Arenimonas)、鞘鞍醇單胞菌屬(Sphingomonas)、冷菌屬(Algoriphagus)和熱單胞菌屬(Thermomonas)豐度較高,處理組和對(duì)照組相比沒有明顯變化。處理組的假單胞菌屬(Pseudomonas)豐度所占比例比對(duì)照增加45.8百分點(diǎn)。假單胞菌屬是土壤中病原菌的拮抗菌,其種類和數(shù)量增多有利于土壤健康[17]。

    由圖3可以看出,真菌屬水平豐度的變化表現(xiàn)如下:鐮刀菌屬(Fusarium)在T3處理中豐度占比2.41%,T3處理中其他種類真菌數(shù)量較少,鐮刀菌占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì),與往年T3處理是根腐病嚴(yán)重區(qū)有關(guān)。大棚內(nèi)有相同根腐病發(fā)生區(qū)的土壤中,鐮刀菌豐度占比達(dá)3.35%,木霉菌處理后下降28.06百分點(diǎn)。豐度占比前10的頭梗霉屬(Cephaliophora)、赤霉菌屬(Gibberella)、毛殼菌屬(Chaetomium)相對(duì)豐度明顯減少,分別降低245.20、322.53、38.46 百分點(diǎn),羽蘚屬(Tetracladium)相對(duì)豐度明顯增多,增加348.29百分點(diǎn)。毛殼菌廣泛存在于土壤中,它可以有效降解纖維素和有機(jī)物,對(duì)微生物產(chǎn)生拮抗作用,是廣泛應(yīng)用的生防菌[18]。而木霉菌和毛殼菌互相拮抗,所以會(huì)造成毛殼菌豐度的減少[19]。

    2.4 物種豐度聚類熱圖

    Heatmap是以顏色梯度來代表數(shù)據(jù)矩陣中數(shù)值的大小并根據(jù)物種或樣品豐度相似性進(jìn)行聚類的一種圖形展示方式。將高豐度和低豐度的物種分塊聚集,通過顏色梯度及相似程度來反映多個(gè)樣品群落組成的相似性和差異性。在熱圖聚類結(jié)果中,顏色代表物種豐度;縱向聚類表示不同物種在各樣品間豐度的相似情況,2個(gè)物種間距離越近,枝長(zhǎng)越短,說明這2個(gè)物種在各樣品間的豐度越相似;橫向聚類表示不同樣品的各物種豐度的相似情況,與縱向聚類一樣,2個(gè)樣品間距離越近,枝長(zhǎng)越短,說明這2個(gè)樣品的各物種豐度越相似。

    從圖4可以看出,木霉菌制劑處理的土樣真菌豐度明顯降低,尤其是處理1和處理3。處理2和對(duì)照2橫向聚類豐度相近,縱向聚類豐度差異較大。頭梗霉屬、赤霉菌屬等一些土壤致病菌明顯減少,而圓酵母屬(Torula)、摩西管柄囊霉(Funneliformis)、羽蘚屬(Tetracladium)豐度增加,其中摩西管柄囊霉和羽蘚屬均是菌根真菌,對(duì)土壤健康的保持非常重要。21 d后木霉菌的數(shù)量會(huì)明顯降低。

    2.5 Alpha多樣性分析

    Alpha多樣性有 Chao1、Ace、Shannon、Simpson 等多種衡量指標(biāo)[20]。其中Chao1和Ace指數(shù)能簡(jiǎn)單地反映群落中物種的數(shù)量,而不表示群落中每個(gè)物種的豐度信息。Shannon和Simpson指數(shù)用于衡量群落多樣性,受樣品群落中物種豐度和物種均勻度的影響。Chao1、Ace、Shannon指數(shù)越大,Simpson指數(shù)越小,說明樣品的物種多樣性越高[21]。另外,本研究還統(tǒng)計(jì)了樣本文庫(kù)的覆蓋率(Coverage),其數(shù)值越高,則表明樣本中序列被測(cè)出的概率越高,而沒有被測(cè)出的概率越低。該指數(shù)可以反映測(cè)序結(jié)果是否能夠代表樣本中微生物的真實(shí)情況。

    從表4、表5可以看出,經(jīng)過木霉菌處理后,土壤微生物多樣性指數(shù)整體上變低,細(xì)菌多樣性指數(shù)變化不大,Ace和Shannon指數(shù)變化較小,Chao1和Simpson指數(shù)略微下降。真菌的多樣性指數(shù)明顯降低,對(duì)照Ace、Chao1、Shannon指數(shù)分別比處理增加 18.51%、18.81、31.03%;對(duì)照 Simpson 指數(shù)比處理降低50.96%。分析原因,可能是由于木霉菌對(duì)細(xì)菌的拮抗性較小,主要拮抗真菌。

    2.6 木霉制劑對(duì)草莓植株生長(zhǎng)及灰霉病發(fā)生的影響

    施入可濕性粉劑后,分別在生育期內(nèi)進(jìn)行草莓葉片數(shù)量、面積測(cè)定。表6結(jié)果表明:處理組的草莓葉片數(shù)量、葉面積均比對(duì)照組明顯增加。施藥后50 d時(shí),處理組葉片數(shù)量、葉面積分別比對(duì)照組增加10.78%、10.94%,對(duì)草莓灰霉病的相對(duì)防效達(dá)65%。結(jié)果說明,施入木霉菌對(duì)草莓植株具有明顯的促生長(zhǎng)作用,并對(duì)草莓灰霉病有很好的預(yù)防和治療作用。

    3 結(jié)論與討論

    本試驗(yàn)采用土壤宏基因組高通量測(cè)序的方法研究木霉菌制劑施用后對(duì)土壤微生物多樣性的影響,結(jié)果表明,施用木霉菌對(duì)土壤中細(xì)菌多樣性影響較小,但會(huì)使真菌多樣性明顯降低。木霉菌對(duì)細(xì)菌多樣性的影響主要表現(xiàn)為假單胞菌屬數(shù)量明顯增多;對(duì)真菌多樣性的影響主要表現(xiàn)為頭梗霉屬、赤霉菌屬和毛殼菌屬等數(shù)量明顯減少,酵母菌、羽蘚屬等數(shù)量明顯增多。木霉菌的施用會(huì)造成很多病原菌含量減少,也會(huì)造成一些有益菌含量減少,從而重新塑造土壤的微生態(tài)系統(tǒng),間接改良土壤,增強(qiáng)植株長(zhǎng)勢(shì),并減輕灰霉病等土傳病害的發(fā)生程度[22]。

    馬建華等報(bào)道,在土壤中施入深綠木霉后細(xì)菌增長(zhǎng)速度緩慢,而真菌數(shù)量顯著降低[23]。古麗君等研究發(fā)現(xiàn),施入深綠木霉17 d后,真菌的數(shù)量比對(duì)照減少了4×103CFU/g,土壤中細(xì)菌的數(shù)量增加了1.27×1010CFU/g,放線菌數(shù)量沒有明顯變化[24]。另有報(bào)道顯示,木霉菌和假單胞菌屬可以協(xié)同作用,從而提高生防效果[25]。毛殼菌屬是優(yōu)良的生防菌,但木霉菌施用后會(huì)造成其數(shù)量下降,已有報(bào)道顯示兩者互相拮抗[19]。

    有關(guān)木霉菌在土壤中存活時(shí)間的問題,當(dāng)前研究結(jié)果不一,康萍芝等研究發(fā)現(xiàn),施用木霉菌后11 d,木霉菌含量達(dá)到高峰,之后開始降低,55 d后土壤中幾乎檢測(cè)不到木霉菌[26]。杜嬋娟等發(fā)現(xiàn),施用木霉菌后35 d,木霉菌含量達(dá)到高峰,之后開始下降[27]。古麗君等發(fā)現(xiàn),木霉在施入25 d時(shí),相對(duì)含量達(dá)到最低值[24]。本研究發(fā)現(xiàn),施用木霉制劑21 d后根際土壤中木霉菌含量已經(jīng)很低,其原因有待進(jìn)一步研究。

    表4 細(xì)菌Alpha多樣性指數(shù)統(tǒng)計(jì)

    土壤微生物多樣性是衡量土壤健康與否的重要指標(biāo)。木霉菌的施用會(huì)改變土壤中的微生態(tài)系統(tǒng),往往使一些土傳病害真菌種類和數(shù)量減少,而土壤中有許多真菌往往是重要的病原菌[28],從而使土壤有益菌和病原菌保持一種動(dòng)態(tài)平衡,達(dá)到抑制病害發(fā)生和促進(jìn)作物生長(zhǎng)的目的。

    表5 真菌Alpha多樣性指數(shù)統(tǒng)計(jì)

    表6 木霉制劑對(duì)草莓生長(zhǎng)和灰霉病發(fā)生的影響(施藥后50 d)

    猜你喜歡
    霉菌草莓真菌
    揭示水霉菌繁殖和侵染過程
    高等大型真菌與人類
    科學(xué)(2020年2期)2020-08-24 07:56:56
    真菌造房子
    草莓
    艾滋病合并侵襲性真菌感染的診治
    霉菌的新朋友—地衣
    地衣和霉菌
    空腹吃草莓
    采草莓
    青霉菌柚苷酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)
    亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产精品98久久久久久宅男小说| netflix在线观看网站| 两个人看的免费小视频| 欧美3d第一页| 丝袜人妻中文字幕| 欧美zozozo另类| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 免费看a级黄色片| 女同久久另类99精品国产91| 国产精品国产高清国产av| 国产午夜精品论理片| 观看免费一级毛片| 日本三级黄在线观看| 婷婷丁香在线五月| 国产日本99.免费观看| 在线观看日韩欧美| 久久午夜亚洲精品久久| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 天堂√8在线中文| 午夜免费观看网址| 日本 av在线| 啦啦啦免费观看视频1| 欧美日本亚洲视频在线播放| 大型黄色视频在线免费观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | www.www免费av| 欧美zozozo另类| 国产高清有码在线观看视频| 日本a在线网址| 91在线精品国自产拍蜜月 | 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 99精品欧美一区二区三区四区| 88av欧美| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 国产成+人综合+亚洲专区| 人人妻人人看人人澡| 麻豆一二三区av精品| 麻豆一二三区av精品| 亚洲成av人片免费观看| 国产伦人伦偷精品视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲无线在线观看| 色综合站精品国产| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲18禁久久av| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲国产欧美人成| 午夜福利免费观看在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产av不卡久久| 国产午夜精品久久久久久| 国产一区二区激情短视频| 国产午夜精品久久久久久| a级毛片a级免费在线| 国产一区二区在线av高清观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产一区二区激情短视频| 国产成人福利小说| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产精品爽爽va在线观看网站| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 两人在一起打扑克的视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 美女 人体艺术 gogo| 免费在线观看亚洲国产| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产单亲对白刺激| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美极品一区二区三区四区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲国产精品久久男人天堂| www.精华液| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲在线自拍视频| 一级毛片女人18水好多| 免费一级毛片在线播放高清视频| 人人妻人人看人人澡| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国内精品久久久久精免费| 国内精品久久久久精免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 波多野结衣巨乳人妻| 久久精品国产综合久久久| 91在线观看av| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 激情在线观看视频在线高清| 麻豆成人av在线观看| 欧美三级亚洲精品| 国产高清视频在线播放一区| 欧美又色又爽又黄视频| 国产一区二区在线观看日韩 | 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国语自产精品视频在线第100页| 麻豆成人av在线观看| 三级国产精品欧美在线观看 | 桃红色精品国产亚洲av| 国产真实乱freesex| 热99re8久久精品国产| 欧美黄色淫秽网站| 午夜成年电影在线免费观看| 久久热在线av| 国产精品电影一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩欧美在线乱码| 亚洲欧美日韩东京热| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产极品精品免费视频能看的| 国产精品影院久久| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品久久久久久精品电影| 99精品欧美一区二区三区四区| 听说在线观看完整版免费高清| 日本a在线网址| 丝袜人妻中文字幕| 麻豆成人午夜福利视频| 很黄的视频免费| 婷婷丁香在线五月| 午夜久久久久精精品| 国产探花在线观看一区二区| 精品国内亚洲2022精品成人| 在线国产一区二区在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | aaaaa片日本免费| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲第一电影网av| 天堂网av新在线| 欧美高清成人免费视频www| 国内精品一区二区在线观看| 一级黄色大片毛片| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲av免费在线观看| 露出奶头的视频| 色播亚洲综合网| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲精品456在线播放app | 欧美一级毛片孕妇| xxx96com| 搞女人的毛片| 国产视频一区二区在线看| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产不卡一卡二| 免费高清视频大片| 亚洲九九香蕉| www.www免费av| 色视频www国产| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 久久久久久久久免费视频了| 中文字幕高清在线视频| 不卡av一区二区三区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产精品影院久久| 亚洲激情在线av| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 成年人黄色毛片网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产av一区在线观看免费| 一级毛片高清免费大全| 激情在线观看视频在线高清| 欧美一区二区精品小视频在线| 搡老岳熟女国产| 免费高清视频大片| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲人与动物交配视频| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美高清成人免费视频www| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产一区二区在线观看日韩 | 午夜两性在线视频| 精品人妻1区二区| 精品乱码久久久久久99久播| 国产精品精品国产色婷婷| 天天躁日日操中文字幕| 久99久视频精品免费| 人妻久久中文字幕网| 一级毛片高清免费大全| 精品福利观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一进一出好大好爽视频| 中文字幕熟女人妻在线| 俺也久久电影网| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲av中文字字幕乱码综合| 成人国产综合亚洲| 精品电影一区二区在线| 他把我摸到了高潮在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美极品一区二区三区四区| 波多野结衣巨乳人妻| 国产精品久久久久久久电影 | 免费看a级黄色片| 床上黄色一级片| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产亚洲欧美98| 亚洲在线自拍视频| 亚洲色图av天堂| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 99re在线观看精品视频| 露出奶头的视频| 久久九九热精品免费| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美日韩综合久久久久久 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 悠悠久久av| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲五月婷婷丁香| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av成人一区二区三| 999久久久精品免费观看国产| av国产免费在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 日本 欧美在线| 久久草成人影院| 国产1区2区3区精品| 在线观看免费视频日本深夜| 丁香欧美五月| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 欧美乱妇无乱码| 99热这里只有精品一区 | 老汉色∧v一级毛片| 久久99热这里只有精品18| 午夜亚洲福利在线播放| 日韩有码中文字幕| av黄色大香蕉| www日本在线高清视频| 嫩草影视91久久| 88av欧美| 午夜福利在线观看吧| 美女扒开内裤让男人捅视频| 日韩欧美在线乱码| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲美女黄片视频| 哪里可以看免费的av片| 中亚洲国语对白在线视频| 最新在线观看一区二区三区| 怎么达到女性高潮| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产一区在线观看成人免费| 听说在线观看完整版免费高清| 成人av在线播放网站| 两个人看的免费小视频| 黄色日韩在线| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品爽爽va在线观看网站| 两性夫妻黄色片| 伦理电影免费视频| 国产乱人伦免费视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 视频区欧美日本亚洲| 精品熟女少妇八av免费久了| 国内精品久久久久精免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 一区福利在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月 | 热99re8久久精品国产| 欧美最黄视频在线播放免费| 99视频精品全部免费 在线 | 又爽又黄无遮挡网站| 成人精品一区二区免费| 久久久久久人人人人人| 丰满人妻一区二区三区视频av | 精华霜和精华液先用哪个| 午夜亚洲福利在线播放| 国产日本99.免费观看| 国产激情欧美一区二区| 12—13女人毛片做爰片一| 国产私拍福利视频在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美黄色淫秽网站| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 男人舔女人的私密视频| 九色成人免费人妻av| 俺也久久电影网| 日韩大尺度精品在线看网址| 波多野结衣高清无吗| 精品免费久久久久久久清纯| 一本精品99久久精品77| 免费看光身美女| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久久精品欧美日韩精品| 女警被强在线播放| 国产精品野战在线观看| ponron亚洲| 亚洲无线在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产1区2区3区精品| 999久久久精品免费观看国产| 精品乱码久久久久久99久播| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲av成人精品一区久久| 动漫黄色视频在线观看| 午夜免费观看网址| 免费看十八禁软件| 国产 一区 欧美 日韩| 欧美三级亚洲精品| 精品乱码久久久久久99久播| 国产亚洲av嫩草精品影院| 久久国产精品人妻蜜桃| 小说图片视频综合网站| 美女黄网站色视频| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品电影一区二区三区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 一本综合久久免费| 美女午夜性视频免费| 成人无遮挡网站| 国产精品久久电影中文字幕| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久久久久国产a免费观看| 国产精华一区二区三区| 精品一区二区三区四区五区乱码| netflix在线观看网站| 色在线成人网| 最近最新中文字幕大全免费视频| 精品日产1卡2卡| 手机成人av网站| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产精品 欧美亚洲| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 精品国产美女av久久久久小说| 日本一二三区视频观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 老汉色∧v一级毛片| 哪里可以看免费的av片| 可以在线观看的亚洲视频| 91在线观看av| 美女免费视频网站| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产人伦9x9x在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 九九在线视频观看精品| 天堂动漫精品| 女警被强在线播放| 国产精品99久久久久久久久| 一区福利在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 国产成人av激情在线播放| 999久久久国产精品视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 桃色一区二区三区在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 美女大奶头视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久午夜综合久久蜜桃| 三级国产精品欧美在线观看 | 亚洲av成人精品一区久久| 欧美一区二区精品小视频在线| 中文字幕熟女人妻在线| www国产在线视频色| 国产精品98久久久久久宅男小说| 十八禁网站免费在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲专区字幕在线| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 在线观看午夜福利视频| 国产av麻豆久久久久久久| 久久人人精品亚洲av| 日韩av在线大香蕉| 观看免费一级毛片| 波多野结衣高清无吗| 久久久久久久精品吃奶| 国产综合懂色| 一进一出抽搐gif免费好疼| 叶爱在线成人免费视频播放| 免费看日本二区| 久久精品91蜜桃| 久久久久久久午夜电影| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲av成人av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久99热这里只有精品18| 在线观看日韩欧美| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产精品,欧美在线| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩国内少妇激情av| 亚洲av美国av| 久久这里只有精品19| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产91精品成人一区二区三区| 成人性生交大片免费视频hd| 国产熟女xx| 国产成年人精品一区二区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产免费男女视频| 18禁国产床啪视频网站| 免费在线观看成人毛片| 欧美日韩精品网址| 久久精品影院6| 国产v大片淫在线免费观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲av电影在线进入| 成人亚洲精品av一区二区| 欧美日韩黄片免| 91av网站免费观看| 日韩欧美国产在线观看| 999久久久国产精品视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产成人系列免费观看| 久久久久九九精品影院| 亚洲一区二区三区不卡视频| 美女黄网站色视频| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影 | 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 精品久久久久久成人av| 国产高清视频在线播放一区| 国产高清有码在线观看视频| 操出白浆在线播放| 国产高清三级在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲精品久久国产高清桃花| 99国产精品99久久久久| 黄色女人牲交| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲性夜色夜夜综合| 天堂影院成人在线观看| 午夜福利在线在线| 精品久久久久久久末码| 午夜日韩欧美国产| 婷婷六月久久综合丁香| 午夜激情欧美在线| 一二三四在线观看免费中文在| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日本在线视频免费播放| 99国产极品粉嫩在线观看| 禁无遮挡网站| 亚洲最大成人中文| 久久久久久久午夜电影| svipshipincom国产片| 又粗又爽又猛毛片免费看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 91在线观看av| 国产高清视频在线观看网站| 国产单亲对白刺激| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 1024香蕉在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日本黄大片高清| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品国产美女av久久久久小说| 国产精品亚洲av一区麻豆| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 可以在线观看毛片的网站| 欧美午夜高清在线| 美女高潮的动态| 999久久久精品免费观看国产| 日日干狠狠操夜夜爽| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲人成伊人成综合网2020| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产黄色小视频在线观看| 脱女人内裤的视频| 最新中文字幕久久久久 | www.熟女人妻精品国产| 亚洲乱码一区二区免费版| 精品欧美国产一区二区三| 国产精品国产高清国产av| 视频区欧美日本亚洲| 欧美一级a爱片免费观看看| 少妇丰满av| 亚洲成a人片在线一区二区| 人妻夜夜爽99麻豆av| a级毛片在线看网站| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产黄a三级三级三级人| 午夜久久久久精精品| 丁香欧美五月| xxxwww97欧美| 欧美日韩黄片免| 国产精品久久视频播放| 日韩国内少妇激情av| 久久久久久久午夜电影| 国内精品久久久久精免费| 国产高清激情床上av| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产99白浆流出| 在线观看午夜福利视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 90打野战视频偷拍视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 99久久精品热视频| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 成年人黄色毛片网站| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日本a在线网址| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 中文在线观看免费www的网站| 少妇丰满av| www国产在线视频色| 国产av在哪里看| 国产真实乱freesex| 欧美日韩黄片免| 男人的好看免费观看在线视频| 免费无遮挡裸体视频| 免费观看人在逋| 黑人操中国人逼视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 91老司机精品| 一进一出好大好爽视频| 久久伊人香网站| 日本 av在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 老司机午夜福利在线观看视频| 精品人妻1区二区| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲专区中文字幕在线| 99在线视频只有这里精品首页| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲黑人精品在线| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 免费看十八禁软件| 手机成人av网站| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品99久久久久久久久| 99国产综合亚洲精品| 国产av麻豆久久久久久久| 十八禁网站免费在线| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久成人免费电影| 老司机福利观看| 国产一区二区在线观看日韩 | 国产一区二区激情短视频| 脱女人内裤的视频| 十八禁网站免费在线| 久久久精品大字幕| 亚洲,欧美精品.| 国产成人啪精品午夜网站| 啦啦啦免费观看视频1| 很黄的视频免费| 97碰自拍视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 全区人妻精品视频| 日韩高清综合在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美激情久久久久久爽电影| 最近最新中文字幕大全免费视频| 香蕉久久夜色| 我要搜黄色片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 午夜亚洲福利在线播放| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 日本免费a在线| 日韩国内少妇激情av| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲专区字幕在线| 精品免费久久久久久久清纯| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲av第一区精品v没综合| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 51午夜福利影视在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产黄片美女视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 俄罗斯特黄特色一大片| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 免费大片18禁| 欧美乱色亚洲激情| 一夜夜www| 日韩精品中文字幕看吧| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 在线观看午夜福利视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 精品欧美国产一区二区三| 国产高潮美女av| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲精品一区av在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 操出白浆在线播放| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美黄色淫秽网站| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久成人免费电影| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀|