復(fù)方氨酚苯海拉明片的溶出曲線質(zhì)量評(píng)價(jià)

陳星宇，劉美玲，朱恒怡，袁 軍，徐小平，錢廣生

(1.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 成都 610041;2.四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院，四川 成都 611731)

0 引 言

復(fù)方氨酚苯海拉明片是由對(duì)乙酰氨基酚（BCS4類）、咖啡因（BCS3類）、鹽酸苯海拉明（BCS1類）和鹽酸麻黃堿（BCS3類）4種成分組成的復(fù)方制劑，共兩個(gè)規(guī)格，規(guī)格一中每片含對(duì)乙酰氨基酚300 mg、咖啡因30 mg、鹽酸麻黃堿7.5 mg、鹽酸苯海拉明7.5 mg，規(guī)格二中各主成分量為規(guī)格一含量的一半。該制劑具有良好的解熱鎮(zhèn)痛效果。臨床常用于治療傷風(fēng)感冒引起的發(fā)熱、頭痛，且伴有咳喘癥狀者[1-2]。該品種的法定檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》（化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)）第十二冊(cè)[WS-10001-(HD-1152)-2002]中未收載溶出度檢查方法，且未檢索到該品種溶出曲線研究的文獻(xiàn)報(bào)道。體外溶出度試驗(yàn)現(xiàn)已作為評(píng)價(jià)固體制劑內(nèi)在品質(zhì)的重要手段之一[3-4]。對(duì)不同廠家同一劑型溶出度的全面深入研究以及溶出曲線的準(zhǔn)確客觀繪制，可揭示各制劑工藝的差別和內(nèi)在品質(zhì)的優(yōu)劣，也可初步為體內(nèi)生物利用率和生物等效性提供參考[5]。為了從體外試驗(yàn)探究該制劑的臨床療效，本研究對(duì)7個(gè)企業(yè)生產(chǎn)的復(fù)方氨酚苯海拉明片中4種主成分的溶出曲線同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)并比較，對(duì)不同廠家藥品的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)影響溶出行為的處方、環(huán)境、包材因素進(jìn)行研究分析，為臨床用藥和藥品質(zhì)量穩(wěn)定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

Agilent Technologies 708-DS Dissolution Apparatus，配 8000 Dissolution Sampling Station（美 國(guó)Agilent公司）；Waters Acquity UPLC色譜儀（美國(guó)Waters公司）；ZKT-18F真空脫氣儀（天大天發(fā)科技有限公司）；Sartorius CP225D電子天平 (德國(guó)Sartorius公司)；SevenExcellece pH 計(jì)（瑞士 Mettler-Toledo 公司）；超純水機(jī)（ULUP-IV-20T）。

1.2 試 劑

對(duì)乙酰氨基酚（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100018-201409，含量：99.9%），咖啡因（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：171215-201512，含量：99.9%），鹽酸麻黃堿（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：171241-201007，含量：99.7%），鹽酸苯海拉明（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100066－200807，含量：99.9%）；復(fù)方氨酚苯海拉明片，規(guī)格一：每片含對(duì)乙酰氨基酚300 mg、咖啡因30 mg、鹽酸麻黃堿7.5 mg、鹽酸苯海拉明7.5 mg（A廠，黑龍江省，批號(hào)：20161124；B廠，吉林省，批號(hào)：20161103；C廠，吉林省，批號(hào)：20160901；D廠，吉林省，批號(hào)：20160901；E廠，吉林省，批號(hào)：20170109；F 廠，黑龍江省，批號(hào)：20170201），規(guī)格二：每片含對(duì)乙酰氨基酚150 mg、咖啡因15 mg、鹽酸麻黃堿3.75 mg、鹽酸苯海拉明3.75 mg（G廠，吉林省，批號(hào)：03-160909）；參照制劑酚麻美敏片（H 廠，上海市，批號(hào)：151015726）、乙腈、磷酸為色譜純，氯化鈉、鹽酸、冰醋酸、乙酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀均為分析純。

2 檢測(cè)方法

2.1 溶出方法的確定

2.1.1 溶出介質(zhì)的選擇

選擇4種不同pH值的溶出介質(zhì)來(lái)模擬消化道內(nèi)的體液[6]（pH1.2、pH4.0、pH6.8 的緩沖液及水），配制方法為：1）pH 1.2鹽酸溶液：稱取氯化鈉2.0 g，加水適量溶解，加鹽酸7 mL，再加水稀釋至1 000 mL，即得；2）pH4.0醋酸鹽緩沖液：稱取三水合醋酸鈉1.22 g，加入冰醋酸溶液2.337 mL，加水溶解并稀釋至1 000 mL，即得；3）pH6.8磷酸鹽緩沖液：稱取磷酸二氫鉀3.4 g和無(wú)水磷酸氫二鈉3.55 g，加水適量溶解并定容至1 000 mL，再稀釋一倍，即得；4）水：純化水。上述介質(zhì)在使用前均采用真空脫氣處理。

2.1.2 溶出方法的選擇

最常用的溶出方法為籃法或槳法，對(duì)于片劑的溶出考察，大多采用槳法[7]，本方法采用槳法。

2.1.3 溶出參數(shù)的選擇

轉(zhuǎn)速對(duì)制劑的溶出速率影響明顯[8]，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)50 r/min較75 r/min更有區(qū)分力，因此選擇50 r/min；人體消化道內(nèi)體液總體積接近于900 mL[9]，因此溶出介質(zhì)體積采用900 mL，為兼顧檢測(cè)方法，處方規(guī)格二采用500 mL溶出介質(zhì)。

2.1.4 取樣點(diǎn)的選擇

基于預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇各溶出介質(zhì)中的取樣點(diǎn)分別為：1)pH1.2鹽酸溶液:5，10，20，30，45，60，90，120 min；2)pH4.0的醋酸鹽緩沖液：5，10，20，30，45，60，90，120 min；3)pH6.8 的磷酸鹽緩沖鹽：5，10，20，30，45，60，90，120 min；4)水：5，10，20，30，45，60，90，120 min。

2.1.5 參照制劑的選擇

未查詢到國(guó)外復(fù)方氨酚苯海拉明片上市制劑。因此選擇對(duì)乙酰氨基酚處方量相似的酚麻美敏片（規(guī)格：乙酰氨基酚325 mg，鹽酸偽麻黃堿30 mg，氫溴酸右美沙芬10 mg，馬來(lái)酸氯苯那敏2 mg）作為參照制劑進(jìn)行溶出曲線研究。

2.2 測(cè)定方法的建立和驗(yàn)證

對(duì)于復(fù)方制劑，首選液相方法同時(shí)對(duì)幾個(gè)有效成分進(jìn)行溶出量的測(cè)定。本文建立了UPLC檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)了快速分析測(cè)定4個(gè)主成分。

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）；流動(dòng)相：水（A）（磷酸調(diào)pH 至2.5）-乙腈（B），梯度洗脫（0～1 min，5%B；1～2 min，5%～70%B；2～2.5 min，70%～5%B；2.5～3 min，5%B）；流量0.5 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)分別為216 nm（對(duì)乙酰氨基酚和鹽酸苯海拉明）和205 nm（咖啡因和鹽酸麻黃堿）；進(jìn)樣量分別為2 μL（對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因）和20 μL（鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明）；柱溫為30℃。該色譜條件下各成分的分離度良好，如圖1所示。

圖1 復(fù)方氨酚苯海拉明片中4種成分的UPLC分離色譜圖

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明對(duì)照品適量，用溶出介質(zhì)溶解并稀釋制成含上述各成分約0.33 mg/mL，0.033 mg/mL，0.083 mg/mL，0.083 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

取各時(shí)間點(diǎn)下的溶出液用0.45 μm的濾膜過(guò)濾，棄去3mL初濾液后，取續(xù)濾液即得。

2.2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

1)專屬性試驗(yàn)

分別取空白溶劑、空白輔料、對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果如圖2所示，表明各介質(zhì)及空白輔料均不干擾主成分的檢出，專屬性強(qiáng)。

2)濾膜吸附試驗(yàn)

于同一溶出杯中取兩份樣品，一份溶液用0.45 μm微孔濾膜依次棄去初濾液 0，1，2，3，4，5，6，7 mL，取續(xù)濾液進(jìn)樣測(cè)定[10]。另一份溶液離心（10 000 r/min，10 min）后取上清液進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，棄去3 mL初濾液后，濾膜的吸附率均小于2.0%，對(duì)各有效成分的測(cè)定無(wú)影響。

3)線性范圍

分別精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品33.33 mg置于10 mL量瓶中，咖啡因?qū)φ掌?6.65 mg置于50 mL量瓶中，鹽酸麻黃堿對(duì)照品20.75 mg置于25 mL量瓶中，鹽酸苯海拉明對(duì)照品20.75 mg置于25 mL量瓶中，加入2.1.1項(xiàng)下的4種溶出介質(zhì)使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品貯備液；分別精密量取對(duì)照品貯備液適量，用相應(yīng)的溶出介質(zhì)稀釋制成5%、10%、20%、50%、70%、100%、120%系列濃度的混合對(duì)照品溶液，照2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，以4種主藥成分的濃度（mg/mL）對(duì)峰面積進(jìn)行最小二乘法線性回歸擬合。結(jié)果表明，在4種溶出介質(zhì)中，對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明分別在 16.50～400.00 μg/mL、1.65～40.00 μg/ml、4.15～99.60 μg/mL 和4.15～99.60 μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖2 專屬性試驗(yàn)色譜圖（a.對(duì)照品溶液；b.溶劑；c.空白輔料）

4)精密度試驗(yàn)

分別取4種溶出介質(zhì)中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明濃度分別為0.33 mg/mL，0.033 mg/mL，0.083 mg/mL，0.083 mg/mL的混合對(duì)照品溶液，照2.2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。結(jié)果4種溶出介質(zhì)中各主藥成分峰面積的RSD值均小于2.0%，表明本方法精密度良好。

5)回收率試驗(yàn)

按處方量比例的5%、50%、120%精密稱取4種主藥成分對(duì)照品各3份，加入處方量的輔料，加4種溶出介質(zhì)配制成低、中、高濃度的回收率試驗(yàn)溶液，照2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄峰面積。4種主成分在pH1.2、pH4.0、pH6.8介質(zhì)中回收率均在95.0%～105%范圍內(nèi)。在介質(zhì)水中，含羧甲基淀粉鈉輔料的廠家，鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明的回收率只有72.2%和62.5%（遠(yuǎn)小于95%），所以，介質(zhì)水中只考察了不含羧甲基淀粉鈉輔料的廠家樣品的溶出曲線。

6)重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取復(fù)方氨酚苯海拉明片粉末6份，加4種溶出介質(zhì)溶解，過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣檢測(cè)，記錄峰面積。結(jié)果4種主成分含量RSD值均小于2.0%，表明方法的重復(fù)性良好。

7)穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液和2.2.3項(xiàng)下供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12，18 h按 2.2.1 項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果在18 h內(nèi)4種主成分在4種溶出介質(zhì)中峰面積的RSD均小于2%，表明對(duì)照品溶液和供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定。

3 溶出曲線測(cè)定結(jié)果

按照第2節(jié)中確定的溶出曲線檢測(cè)方法，檢測(cè)了參照制劑和7個(gè)廠家生產(chǎn)的復(fù)方氨酚苯海拉明片的溶出曲線。現(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果匯總?cè)鐖D3、圖4所示（因數(shù)據(jù)較多，此處僅列出BCS分類4類且所占比重最大的對(duì)乙酰氨基酚的典型溶出曲線）。

3.1 各企業(yè)樣品在不同介質(zhì)中溶出曲線的典型圖譜（溶出量為6片的均值）

從圖3可以看出，在4種介質(zhì)中參照制劑中對(duì)乙酰氨基酚的溶出行為相似，溶出速率快，批內(nèi)差異小。而廠家E的樣品溶出行為差異較大，溶出速率慢。由于復(fù)方氨酚苯海拉明片各生產(chǎn)企業(yè)的樣品中4種主成分在pH1.2、pH4.0、pH6.8、水中6片樣品溶出量RSD值不滿足“第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)RSD小于20%，以后時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)均小于10%”的要求[11]，批內(nèi)差異大，所以不再進(jìn)行批間溶出行為比較。

3.2 相同溶出介質(zhì)中各企業(yè)樣品溶出曲線比較

由圖4可以看出，各生產(chǎn)企業(yè)的復(fù)方氨酚苯海拉明片在相同介質(zhì)中的溶出行為差異很大，如在pH1.2介質(zhì)中B廠家30 min達(dá)到完全溶出，而E廠家120 min才能達(dá)到完全溶出。提示各生產(chǎn)企業(yè)的樣品在人體內(nèi)吸收可能會(huì)有差異，療效也不同，不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品效果不能保證一致。

4 影響溶出行為的因素分析

針對(duì)復(fù)方氨酚苯海拉明片批內(nèi)溶出速率差異大，溶出較參照制劑緩慢，各生產(chǎn)企業(yè)樣品之間溶出行為差異大的現(xiàn)狀，本研究對(duì)影響本品溶出行為的因素進(jìn)行了考察。

圖3 不同介質(zhì)中對(duì)乙酰氨基酚的溶出曲線

圖4 相同介質(zhì)中各企業(yè)樣品中對(duì)乙酰氨基酚的溶出曲線

4.1 高濕影響因素考察

選擇區(qū)分力較強(qiáng)的pH1.2溶出介質(zhì)，考察樣品(G廠家）在高濕（RH90%，25 ℃）條件下，不同包裝程度放置一段時(shí)間后，樣品中各主成分溶出行為的變化情況如圖5所示。結(jié)果表明，水分對(duì)樣品溶出有一定的影響，會(huì)使4個(gè)主成分的溶出速率和程度變緩，溶出行為差異變大。

4.2 片劑硬度考察

采用YPD-300C型智能片劑硬度測(cè)定儀對(duì)樣品硬度進(jìn)行了測(cè)定，考察產(chǎn)品工藝穩(wěn)定性和與樣品溶出速率的關(guān)系。結(jié)果表明，各廠家生產(chǎn)的樣品硬度從12.56～130.22 N不等，差異較大，其中D廠家批間差異大(52.11～83.73 N)，其可能也是導(dǎo)致該企業(yè)樣品溶出行為差異較大的原因。

4.3 制劑處方考察

經(jīng)調(diào)研，7個(gè)生產(chǎn)廠家所使用的輔料種類相近，都使用了淀粉、蔗糖、硬脂酸鎂，僅在崩解劑的使用上存在差異。D、E、B、F 4個(gè)廠家都使用了羧甲基淀粉鈉，另外F廠家還使用了羥丙甲纖維素，A廠家使用了低取代羥丙纖維素，C廠家使用了預(yù)膠化淀粉，G廠家未使用任何崩解劑，該廠家樣品的溶出速率相比其他廠家較為緩慢。

圖5 高濕條件下市售廠家G溶出曲線變化趨勢(shì)圖

5 結(jié)束語(yǔ)

本文對(duì)復(fù)方氨酚苯海拉明中片中的4種成分進(jìn)行UPLC 檢測(cè)，通過(guò)對(duì)復(fù)方氨酚苯海拉明片溶出方法、檢測(cè)方法、溶出曲線的考察，該方法的精密度和重復(fù)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2.0%，對(duì)乙?；狈?、咖啡因、鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明的分離度和線性關(guān)系良好。回收率實(shí)驗(yàn)中，含羧甲基淀粉鈉輔料的廠家，鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明在水中的回收率較低，說(shuō)明了介質(zhì)水不適用于含羧甲基淀粉鈉樣品溶出行為的考察，同時(shí)藥品片與片之間在體內(nèi)的吸收速度和程度也會(huì)存在差異，高濕實(shí)驗(yàn)也揭示了生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)關(guān)注藥品包裝材料的質(zhì)量，從而確保藥品的穩(wěn)定性。