噠螨靈在羅漢果中的殘留分析及降解動態(tài)

陳曉蘭，鄧全道，陳娟，蔡祥宇

（1.桂林出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣西桂林541004；2.廣西出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，廣西南寧530021）

噠螨靈又名速螨酮，是一種高效、廣譜的殺螨劑和殺蟲劑，對植食性螨的整個生長期即卵、幼螨、若螨和成螨均有很好的效果，殺蟲效果持續(xù)時間長，不受溫度變化影響，與常用的殺螨劑均無交互抗性。該農(nóng)藥常用于羅漢果種植過程中紅蜘蛛的防治，但是目前有關(guān)于噠螨靈殘留降解動態(tài)的研究主要集中在棉花、柑桔、蘋果、香蕉、甘藍(lán)、枸杞等農(nóng)作物上[1-10]，而對其在羅漢果中的殘留降解動態(tài)尚屬空白。羅漢果主要產(chǎn)于廣西桂林市永福縣、龍勝縣和臨桂縣，是廣西桂林著名的特產(chǎn)植物和大宗經(jīng)濟(jì)農(nóng)作物，同時也是國家衛(wèi)生部首批公布的藥食兩用植物之一[11]。從羅漢果中提取出的主要有效成分羅漢果甜甙具有高甜度（約為蔗糖的300倍）、低熱量的特點(diǎn)，有降低血糖、抗氧化的作用，對糖尿病、高血壓、高血脂和肥胖癥患者無任何副作用，是一種理想天然甜味添加劑[12]。羅漢果是一種傳統(tǒng)的出口產(chǎn)品，在東南亞、歐美等地深受消費(fèi)者的青睞。因此，其食用的安全性不僅關(guān)系到消費(fèi)者的身體健康，更關(guān)系到我國對外貿(mào)易的發(fā)展。近年來，國際貿(mào)易技術(shù)壁壘不斷抬頭，各國對農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留限量要求不斷提高，日本、歐盟以及美國等國對未制定最大殘留限量（maximum residual limit，MRL）的農(nóng)產(chǎn)品，頒布了按一律限量0.01 mg/kg基準(zhǔn)執(zhí)行的殘留限量規(guī)定[13-15]。而我國食品安全標(biāo)準(zhǔn)GB 2763-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[16]對羅漢果中噠螨靈等農(nóng)藥的MRL卻沒有做出相關(guān)規(guī)定，導(dǎo)致羅漢果及羅漢果深加工產(chǎn)品在出口市場上很容易產(chǎn)生糾紛，嚴(yán)重制約了羅漢果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和羅漢果這一廣西桂林名優(yōu)特色產(chǎn)品在國內(nèi)外的品牌地位的提升。

因此，本文以15%噠螨靈乳油（emulsifiable concentrates，EC）作為供試藥劑，以栽培羅漢果作為供試作物，采用消解動態(tài)與最終殘留兩種試驗(yàn)方式，通過優(yōu)化建立起來的氣相色譜-電子捕獲檢測器（gas chromatography-electron capture detector，GC-ECD）分析方法，檢測施藥后不同時間采摘的羅漢果中噠螨靈的殘留量，研究該農(nóng)藥在羅漢果中的殘留降解動態(tài)規(guī)律，旨在為噠螨靈在羅漢果種植過程中的合理施用及開展安全性評價提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

乙腈、正已烷、甲醇（色譜純）：美國Fisher公司；無水硫酸鎂（分析純，MgSO4）：上海安譜實(shí)驗(yàn)公司，使用前在馬弗爐內(nèi)550℃烘烤4 h；石墨化炭黑（graphitized carbon black，GCB，120 目～400 目）、N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA，40 μm～60 μm）、十八烷基鍵合硅膠（C-18，40 μm～60 μm）固相萃取材料：德國CNW公司；15%噠螨靈乳油：江蘇揚(yáng)農(nóng)化工集團(tuán)有限公司。

農(nóng)藥噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品（純度大于99%）：德國Dr.公司，用甲醇溶解，配制成1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液（-18℃下避光保存），再用正乙烷稀釋至10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間使用液（-18℃下避光保存），根據(jù)需要用正乙烷配制質(zhì)量濃度為 0.01、0.05、0.1、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2 儀器設(shè)備及色譜條件

1.2.1 儀器設(shè)備

7820A氣相色譜儀，配有電子ECD檢測器：美國Agilent公司；Milli-Q超純水設(shè)備：美國Milipore公司；OT-2A渦旋器：上海琪特公司；XS205電子天平：瑞士Metler Toledo公司；3K15高速離心機(jī)：德國SIGMA公司；GT200均質(zhì)器：北京格瑞德曼公司；XO-1020低溫恒溫槽：南京先歐儀器公司。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：HP-5石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；升溫程序：初始溫度50℃保持1 min，以30℃/min升至130℃，然后以20℃/min升至250℃，再以5℃/min升至280℃，最后以20℃/min升至300℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：250℃；ECD檢測器溫度：300℃；載氣：高純氮?dú)猓兌?9.999%）；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量 1 μL。

1.3 方法

1.3.1 田間試驗(yàn)

1.3.1.1 供試材料

供試作物：羅漢果大地2號；供試藥劑：15%噠螨靈乳油。

1.3.1.2 試驗(yàn)方法

依據(jù)農(nóng)業(yè)部NY/T 788-2004《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[17]和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[18]，本試驗(yàn)于2017年8月中旬羅漢果果實(shí)個體至約為成熟可收成的一半大小時，在廣西桂林市臨桂區(qū)五通鎮(zhèn)保寧北塘村羅漢果種植基地進(jìn)行?；卦囼?yàn)區(qū)設(shè)6個處理，即消解動態(tài)試驗(yàn)區(qū)、最終殘留量低劑量試驗(yàn)區(qū)（噴藥2次和3次）、最終殘留量高劑量試驗(yàn)區(qū)（噴藥2次和3次）以及清水空白對照區(qū)，每個處理3個重復(fù)，每個重復(fù)包括10棵植株，小區(qū)間設(shè)保護(hù)行。

1）殘留消解動態(tài)試驗(yàn)

本動態(tài)試驗(yàn)施用劑量為最高推薦劑量的2倍，即300 mg/L，施藥處理后分別按 0.062 5、1、3、5、7、14、21 d隨機(jī)摘采不少于2 kg的田間樣品。

2）最終殘留量試驗(yàn)

最終殘留量試驗(yàn)以最高推薦劑量低劑量，即150 mg/L，以最高推薦劑量的2倍最為高劑量，即300 mg/L，每種劑量均設(shè)2次施藥和3次施藥2個處理。按照試驗(yàn)設(shè)計時間開始第1次施藥，施藥間隔期7 d，距離最后1次施藥7、14、21 d后隨機(jī)摘采不少于2 kg的田間樣品。

所有采集完的田間樣品，即刻放置于便攜式采樣箱子里（0℃），保證在2 h之內(nèi)送回實(shí)驗(yàn)室。

1.3.2 檢測方法

1.3.2.1 樣品的制備

試驗(yàn)區(qū)采摘回來的羅漢果樣品切碎后，用四分法縮至500 g后裝入封口袋中，貼好標(biāo)簽，于-18℃低溫冰柜中保存。

1.3.2.2 樣品前處理

1）提取

準(zhǔn)確稱取經(jīng)過粉碎均勻的樣品10.0 g于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，渦旋提取2 min，置于0℃低溫恒溫槽中，然后再加入3.0 g MgSO4及1.0 g NaCl，用手劇烈振搖1 min，再均質(zhì)提取2 min，最后于5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，靜置待凈化。

2）凈化

稱取 300 mg MgSO4、150 mg PSA、100 mg C18 和15 mg GCB于15mL離心管中，渦旋混合均勻10 s，準(zhǔn)確加入2 mL上清液，迅速搖勻并渦旋混合2 min，于5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，靜置，吸取上清液1.2 mL，氮?dú)獯蹈?，?.6 mL正乙烷溶解，渦旋混合，過0.22 μm微孔有機(jī)濾膜，待氣相色譜分析。

1.3.2.3 基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確吸取7份經(jīng)過上述凈化步驟中離心靜置后的空白樣品上清液各1.2 mL，氮?dú)獯蹈色@得空白基質(zhì)，分別取0.6 mL用正乙烷配制質(zhì)量濃度為0.01、0.05、0.1、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液復(fù)溶，渦旋混合，過0.22 μm微孔有機(jī)濾膜。每個樣品基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)濃度均為1個處理，每個處理6個重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測方法的驗(yàn)證

2.1.1 方法的線性關(guān)系、檢出限、定量限

在前處理方法及色譜條件確定的情況下，為了進(jìn)一步有效消除基質(zhì)效應(yīng)，采用“1.3.2.3”制備好的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行外標(biāo)法定量分析。以目標(biāo)峰的峰面積（y）對質(zhì)量濃度（x，mg/L）作回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果顯示，在0.01 mg/L～2.0 mg/L濃度范圍內(nèi)，回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r2）為0.994 6，說明分析組分在此濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。分別以目標(biāo)峰的3倍信噪比（S/N=3）和10倍信噪比（S/N=10）計算檢測方法的檢出限（limits of detection，LOD）和定量下限（limitsofquantitation，LOQ）。計算結(jié)果顯示，羅漢果中噠螨靈農(nóng)藥檢測方法的LOD為 1.8 μg/kg，LOQ 為 7.4 μg/kg。

2.1.2 方法的回收率及精密度

取羅漢果空白樣品進(jìn)行3個加標(biāo)水平的回收率和精密度試驗(yàn)，參考國標(biāo)食品中噠螨靈最大殘留限量的規(guī)定范圍[16]，添加水平設(shè)定為 0.02、0.1，1.0 mg/kg，每個添加水平重復(fù)測定6次，平均回收率為82.1%～95.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）均小于10%，具體見表1。

表1 羅漢果中噠螨靈測定方法的平均回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）Table 1 Average recoveries and RSD of the analysis method for pyridaben in Siraitia grosvenoriis（n=6）

由表1試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)可見，羅漢果中噠螨靈殘留量測定方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均能符合農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則[17]的要求。

2.2 羅漢果中噠螨靈的殘留消解動態(tài)

噠螨靈在羅漢果中的降解動態(tài)結(jié)果見表2。

表2 噠螨靈在羅漢果中的降解動態(tài)Table 2 The degradation dynamic of pyridaben in Siraitia grosvenoriis

從表2可以看出，施藥后噠螨靈降解前期速度較快，施藥后第一天采樣，噠螨靈濃度從0.827 4 mg/kg降至0.353 9 mg/kg，降解率達(dá)到57.2%，5天后噠螨靈殘留濃度已降至低于0.10 mg/kg，14天后噠螨靈濃度降至低于0.01 mg/kg，由此可見，噠螨靈屬于一種較為易降解的農(nóng)藥。

羅漢果中噠螨靈的殘留降解動態(tài)曲線結(jié)果如圖1，符合一級動力數(shù)學(xué)方程C=0.784 7e-0.511t（相關(guān)系數(shù)r2=0.972 2），降解半衰期 T1/2=1.36 d。

圖1 羅漢果中噠螨靈的殘留降解動態(tài)曲線Fig.1 The degradation curve of pyridaben in Siraitia grosvenoriis

2.3 羅漢果中噠螨靈的最終殘留

目前，我國國標(biāo)GB 2763-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[16]中只對大豆、辣椒、柑橘與蘋果等8種農(nóng)產(chǎn)品中噠螨靈的MRL值作出了規(guī)定（范圍為0.1 mg/kg～2.0 mg/kg），那么可以把最嚴(yán)格的MRL 0.1 mg/kg假設(shè)為噠螨靈在羅漢果的MRL；再者，羅漢果產(chǎn)品主要出口國家或地區(qū)，例如美國、歐盟、日本等，亦尚未專門針對羅漢果中噠螨靈MRL作出具體的要求[13-15]，因此，對于未作為具體規(guī)定的MRL一律視為0.01 mg/kg。噠螨靈在羅漢果中的最終殘留試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。

表3 噠螨靈在羅漢果中的最終殘留Table 3 The terminal residue of pyridaben in Siraitia grosvenoriis

從表3可知，噠螨靈低劑量施藥量為150 mg/L，高劑量施藥量為300 mg/L，分別各自均施藥2次與3次，每次施藥間隔7 d，那么末次藥后7 d殘留量低于0.1 mg/kg，14 d低于0.01 mg/kg，完全可以滿足國內(nèi)外對食品或農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留MRL的要求。因此，可以將14 d設(shè)定為噠螨靈在羅漢果上使用的安全間隔期。需要注意的是，安全間隔期與施藥量和施藥次數(shù)相對應(yīng)，改變施藥方式，安全間隔期也相應(yīng)發(fā)生改變。

3 結(jié)論

經(jīng)過對羅漢果中噠螨靈在田間降解行為的研究，結(jié)果表明，噠螨靈在羅漢果上的降解行為符合一級動力數(shù)學(xué)模型，降解半衰期為1.36 d；噠螨靈在噴施濃度為150 mg/L和300 mg/L，分別施2次～3次情況下，末次藥后14 d在羅漢果中的殘留量＜0.01 mg/kg，完全可以滿足國內(nèi)外MRL的要求。因此，15%噠螨靈乳油的施用建議如下：施藥劑量100 mg/L～150 mg/L，施藥2次，安全采摘間隔期為14 d。