基于比較基因組學(xué)分析的方法定位及注釋雙峰駝MHC基因

支立康，額爾敦木圖，安希文，王超，王瑞，包花爾，王秀珍

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基于比較基因組學(xué)分析的方法定位及注釋雙峰駝MHC基因

支立康，額爾敦木圖，安希文，王超，王瑞，包花爾，王秀珍

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院/農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，呼和浩特 010018）

【目的】定位并注釋雙峰駝主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)基因序列，為進(jìn)一步研究雙峰駝MHC基因提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā?運(yùn)用比較基因組學(xué)方法，提取人類MHC（HLA）基因編碼序列和牛MHC（BoLA)基因編碼序列并分別與雙峰駝轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行blastn基因序列比對，識別出相似度較高的scaffolds，通過分析HLA、BoLA基因序列比對在這些scaffolds上的位置順序，對多條scaffolds進(jìn)行拼接，得到雙峰駝MHC的Pseudo chromosome；再分別提取HLA、BoLA全基因組序列與雙峰駝已拼接的scaffolds進(jìn)行基因組共線性分析，利用lastz建立起的Pseudo chromosome與HLA、BoLA全基因組序列的線性關(guān)系判斷篩選出的scaffolds是否準(zhǔn)確；然后通過分析MHC基因在兩物種間的線性關(guān)系，在雙峰駝參考基因組中提取出MHC基因序列，并對這些序列進(jìn)行基因注釋；最后根據(jù)得到的雙峰駝MHC基因繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹，研究其基因間的進(jìn)化關(guān)系?！窘Y(jié)果】通過對HLA、BoLA基因編碼序列與雙峰駝轉(zhuǎn)錄本用blastn進(jìn)行序列比對，識別出了相似度較高的3條scaffolds，即NW_011511766.1（全長4.1M）、NW_011515227.1（全長1.2M）和NW_011514613.1（全長15K），對其拼接得到雙峰駝MHC的Pseudo chromosome；利用lastz共線性分析,識別出HLA基因序列和BoLA基因序列并比對出其在雙峰駝MHC基因的共線性區(qū)域。該區(qū)域與拼接得到的Pseudo chromosome一致，證明篩選出的scaffolds是準(zhǔn)確的。并且發(fā)現(xiàn)Class-Ⅰ類和Class-Ⅲ類基因集中分布在NW_011515227.1上，而Class-Ⅱ類基因集中分布在NW_011511766.1和NW_011514613.1上，進(jìn)一步分析得知Class-Ⅱ類基因主要分布在NW_011511766.1 的3.5—4.1M的位置；將存在共線性區(qū)域的序列提取出來，與比對到雙峰駝上的MHC基因的編碼序列進(jìn)行blat分析，結(jié)果在雙峰駝基因組中共識別出24個(gè)與牛BoLA基因高度相似的基因，其中Ⅰ類基因1個(gè)，Ⅱ類10個(gè), Ⅲ類基因13個(gè)。對雙峰駝這24個(gè)MHC基因進(jìn)行信息注釋并繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果顯示注釋的Class-Ⅰ類和Class-Ⅱ類基因在同一分支?！窘Y(jié)論】通過比較基因組學(xué)方法定位并注釋了雙峰駝的MHC基因，將雙峰駝MHC基因序列定位到了3條scaffolds上，找到并注釋了24個(gè)MHC基因，繪制了雙峰駝MHC的Pseudo chromosome，為進(jìn)一步研究雙峰駝MHC基因奠定了理論基礎(chǔ)。

雙峰駝；MHC；CBLA；BoLA；HLA；比較基因組學(xué)

0 引言

【研究意義】MHC（major histocompatibility complex）是所有生物主要組織相容性復(fù)合體的統(tǒng)稱，常見類型有3類，即Class-Ⅰ、Class-Ⅱ和Class-Ⅲ類基因。MHC不僅控制著同種移植排斥反應(yīng)，更重要的是與生物機(jī)體免疫應(yīng)答、免疫調(diào)節(jié)及某些病理狀態(tài)的產(chǎn)生均密切相關(guān)。不同種類哺乳動(dòng)物的MHC基因序列結(jié)構(gòu)、名稱存在差異[1-4]。雙峰駝因其應(yīng)對惡劣環(huán)境挑戰(zhàn)的能力而聞名。關(guān)于MHC的研究，雙峰駝是一種具有實(shí)際意義的生物模型[5-6]。定位并注釋雙峰駝中的MHC基因，對雙峰駝MHC的進(jìn)一步研究，以及對雙峰駝機(jī)體免疫機(jī)制的研究有重要的科學(xué)意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】對于MHC的研究工作最早可以追溯到1936年，國外學(xué)者在研究小鼠腫瘤細(xì)胞排斥反應(yīng)中首次發(fā)現(xiàn)了MHC基因；1951年，研究者發(fā)現(xiàn)了小鼠的MHC-H2系統(tǒng)；1958年，Dausset首次發(fā)現(xiàn)了人類的白細(xì)胞抗原；1961年SCHIERMAN和NORDSKOG確定了家禽中的MHC為一種紅細(xì)胞抗原，并將其命名為B[2,7]；到了20世紀(jì)70代，人們發(fā)現(xiàn)在遺傳上與H2同源的系統(tǒng)同樣存在于其它動(dòng)物中[8-10]；近年來已確定幾乎所有的脊椎動(dòng)物都存在MHC基因，且各國學(xué)者不斷豐富著不同種屬動(dòng)物MHC基因的研究。2012年吉日木圖教授等首次完成雙峰駝全基因組序列圖譜繪制和解析。2016年捷克科學(xué)家通過FISH技術(shù)將單峰駝MHC基因定位到了20號染色體短臂上（20q12）[11]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前雙峰駝參考基因組的組裝及注釋水平不完善，在雙峰駝基因組中MHC基因并沒有得到組裝和注釋[12]。傳統(tǒng)的基因定位方法普遍采用的是雜交，側(cè)交和自交，分別求出基因間的交換率和相對距離，然后在染色體上確定基因間的排列順序，這些方法操作繁瑣、復(fù)雜，成本也很昂貴?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究通過利用目前已知組裝水平最好的人類MHC基因和與雙峰駝?dòng)H緣關(guān)系較近的牛MHC基因?yàn)榉N子序列，采用比較基因組學(xué)方法來探究物種間基因的同源性關(guān)系，準(zhǔn)確定位并注釋到雙峰駝中的MHC基因，為雙峰駝MHC基因的進(jìn)一步研究奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

試驗(yàn)于2017年6—9月在內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)的內(nèi)蒙古自治區(qū)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）進(jìn)行。

1.1 序列來源

雙峰駝MHC基因序列從家養(yǎng)阿拉善雙峰駝的參考基因組中獲得，參考基因組Camelus bactrianus (assembly Ca_bactrianus_MBC_1.0)在NCBI上下載得到，人類HLA、牛BoLA基因序列都是從ensemble網(wǎng)站下載得到。相關(guān)信息如下（表1）。

1.2 方法

1.2.1利用blast v2.3.0軟件將分別從表1所示網(wǎng)址提取的HLA、BoLA基因編碼序列，分別與雙峰駝轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行blastn序列比對，識別出相似度較高的scaffolds；再通過分析HLA、BoLA比對在scaffolds的位置順序，從而對多條scaffold進(jìn)行拼接。

1.2.2 分別提取HLA、BoLA基因組序列與雙峰駝已拼接的scaffolds進(jìn)行基因組共線性分析，利用lastz v.1.04.00軟件建立起已拼接的scaffolds與HLA、BoLA基因組序列的線性關(guān)系，以判斷篩選出的scaffolds是否準(zhǔn)確。

表1 雙峰駝、人類、?；蛐蛄屑皵?shù)據(jù)來源

1.2.3 通過分析MHC在兩物種間的線性關(guān)系，利用BLAT v.35軟件提取出MHC在雙峰駝基因組的基因序列，并對這些基因序列進(jìn)行基因注釋。

1.2.4 利用MEGA 7.0.26軟件對得到的雙峰駝MHC基因繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹。

2 結(jié)果

2.1 blastn序列對比及拼接

分別以人類HLA、牛BoLA基因編碼序列與雙峰駝轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行blastn序列對比，結(jié)果識別出了相似度較高的3條scaffold，即NW_011511766.1（全長4.1M）、NW_011515227.1（全長1.2M）和NW_011514613.1（全長15K），進(jìn)一步通過分析HLA、BoLA比對在scaffolds的位置順序，發(fā)現(xiàn)CBLAⅠ類和Ⅲ類基因分布在NW_011515227.1上，而CBLAⅡ類基因分布在NW_011511766.1和NW_011514613.1上對上述3條scaffolds進(jìn)行拼接，得到雙峰駝MHC的Pseudo chromosome，其結(jié)構(gòu)示意圖如圖1。

2.2 共線性分析

2.2.1 人類HLA與雙峰駝Pseudo chromosome共線性分析 提取人類MHC基因（HLA）的基因組DNA序列，與雙峰駝基因組進(jìn)行共線性分析。在基因組共線性分析中一個(gè)共線性基因?qū)?yīng)一個(gè)點(diǎn)，而密集的共線性基因可以連接成片段，并以線條的形式呈現(xiàn)在圖中。繪制雙峰駝MHC基因與人類HLA基因共線性關(guān)系圖（圖2）?？梢钥闯?，有很多雙峰駝MHC基因片段和人類HLA基因片段是共線性關(guān)系，即存在較長的線性片段，有力地支持了本研究所定位到的雙峰駝MHC基因的準(zhǔn)確性，從而說明雙峰駝的MHC基因家族主要分布在筆者拼接的scaffolds上。

圖1 雙峰駝MHC-Pseudo chromosome結(jié)構(gòu)示意圖

橫軸為人HLA的基因序列，縱軸為雙峰駝MHC的基因序列

2.2.2 牛BoLA與雙峰駝pseudo chromosome共線性分析 同理，提取與雙峰駝?dòng)H緣關(guān)系最近的牛的MHC基因（BoLA）[13]的基因組DNA序列，與雙峰駝基因組進(jìn)行共線性分析，結(jié)果顯示牛BoLA基因與雙峰駝的NW_011511766.1（全長4.1M）、NW_011515227.1（全長1.2M）和NW_011514613.1（全長15K）相似度最高，且Ⅰ類和Ⅲ類基因分布在NW_011515227.1上，而Ⅱ類基因分布在NW_011511766.1和NW_011514613.1上，進(jìn)一步分析得知Ⅱ類基因主要分布在NW_011511766.1 的3.5—4.1M的位置。在基因組共線性分析中一個(gè)共線性基因?qū)?yīng)一個(gè)點(diǎn)，密集的共線性基因可以連接成片段，并以線條的形式呈現(xiàn)在圖中。繪制雙峰駝MHC基因與牛BoLA基因共線性關(guān)系圖（圖3）。可以清楚的表明，有很多雙峰駝MHC基因片段和牛BoLA基因片段是共線性關(guān)系，即存在較長的線性片段，有力地支持了本研究所定位到的雙峰駝MHC基因的準(zhǔn)確性，更加說明雙峰駝的MHC基因家族主要分布在拼接的scaffolds上，該結(jié)果與結(jié)果1的一致。但在局部雙峰駝的片段呈現(xiàn)更多的碎片，即當(dāng)縱坐標(biāo)低于4 000 000時(shí)牛BoLA與雙峰駝pseudo chromosome 共線性區(qū)域出現(xiàn)倒置現(xiàn)象。

2.3 BLAT分析

將存在共線性區(qū)域的基因組序列提取出來，與比對到雙峰駝上的CBLA基因的編碼序列運(yùn)用BLAT v.35進(jìn)行分析，從而把雙峰駝CBLA編碼定位在基因組上。比對分析結(jié)果顯示，在雙峰駝基因組中共識別出24個(gè)與牛BoLA基因高度相似的基因，即在本次試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)雙峰駝的CBLA包含24個(gè)基因，其中Ⅰ類基因1個(gè)，Ⅱ類10個(gè), Ⅲ類基因13個(gè)（表2）。并由此可繪制人/牛/雙峰駝 MHC基因個(gè)數(shù)統(tǒng)計(jì)表（表3）。

2.4 基因注釋

對照從ensemble上獲取的人類HLA、牛BoLA已知MHC基因注釋信息對找到的這24個(gè)基因進(jìn)行注釋，可繪制雙峰駝CBLA基因注釋信息表（表4）。

橫軸為牛BoLA的基因序列，縱軸為雙峰駝MHC的基因序列

表2 blat分析找到的CBLA基因

表3 人/牛/雙峰駝 MHC基因個(gè)數(shù)統(tǒng)計(jì)表

36/106表示人類HLA中共發(fā)現(xiàn)106個(gè)class-Ⅰ類基因，其中36個(gè)為真基因；同理：33/59表示人類HLA中共發(fā)現(xiàn)59個(gè)class-Ⅱ類基因，其中33個(gè)為真基因；59/59表示人類HLA中共發(fā)現(xiàn)59個(gè)class-Ⅲ類基因，其中59個(gè)為真基因

36/106 indicates that there are 106 class-I genes in human HLA, 36 of which are true genes; Similarly, 33/59 indicates that there are 59 class-II genes in human HLA, 33 of which are true genes. 59/59 indicates that 59 class-III genes were found in human HLA, 59 of which were true genes

2.5 雙峰駝MHC基因繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹

對得到的雙峰駝MHC基因繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果顯示注釋的CBLA Class-Ⅰ類和Class-Ⅱ類基因在同一分支（圖4），說明CBLA Class-Ⅰ類和Class-Ⅱ類基因進(jìn)化關(guān)系最近。

3 討論

近年來出現(xiàn)了很多MHC基因的定位方法，常用的方法有體細(xì)胞雜交法、克隆嵌板法、原位雜交和熒光原位雜交法（FISH）、連鎖分析法。如Martin Plasil在2016年通過熒光原位雜交法將單峰駝的12個(gè)MHC基因定位到了20號染色體短臂（20q12）上的具體位置，并繪制了物理圖譜。本研究通過利用目前已知組裝水平最好的人類HLA基因和與雙峰駝?dòng)H緣關(guān)系較近的牛BoLA基因[14]作為種子序列來定位并注釋雙峰駝的MHC基因。通過與兩個(gè)參考物種的比較基因組學(xué)分析，最終在雙峰駝基因組序列中找到了24個(gè)MHC基因（其中Ⅰ類基因1個(gè)，Ⅱ類10個(gè), Ⅲ類基因13個(gè)），并繪制出了雙峰駝MHC的Pseudo chromosome。相比于以前的MHC基因的定位方法，該方法操作簡便、檢測迅速、成本低廉，有望推廣應(yīng)用于其他物種MHC基因的定位和注釋。

共線性描述了由同一祖先型分化而來的不同物種間基因的類型及相對順序的保守性，是物種間的一種關(guān)系，體現(xiàn)了基因的同源性以及基因的排列順序。本研究通過使用lastz軟件分別對人類HLA、牛BoLA基因與拼接出來的雙峰駝CBLA基因序列進(jìn)行共線性分析發(fā)現(xiàn)，其絕大部分基因具有很高的共線性，說明這3種動(dòng)物MHC基因組同源性很高[15]。對比圖2、3，可以看到牛BoLA基因序列與拼接出來的雙峰駝CBLA基因序列具有更好的共線性，即牛與雙峰駝的的MHC基因同源性更高。說明了相比于人類，牛與雙峰駝?dòng)H緣關(guān)系更近。這一結(jié)果與WU等[16]所得結(jié)論一致，從而證明本試驗(yàn)所用方法的結(jié)果是準(zhǔn)確的。再對3個(gè)物種進(jìn)行blat分析，發(fā)現(xiàn)其MHC基因組上的等位基因種類、結(jié)構(gòu)和位置也極其相似，因此可以認(rèn)定MHC基因?yàn)橹毕蛲椿虻囊环N[17-18]。對于像MHC基因這種功能基因的研究，通過選取其他近緣生物基因組為參照進(jìn)行比較基因組學(xué)研究，利用計(jì)算機(jī)的強(qiáng)大處理信息能力鑒別存在于各物種的直向同源基因，并選擇具有重要生物學(xué)功能或價(jià)值的候選標(biāo)記基因進(jìn)行試驗(yàn)研究，可以迅速實(shí)現(xiàn)動(dòng)物基因組比較信息的物種間轉(zhuǎn)移，發(fā)掘更多新的功能基因和定位信息，從而加快對其他物種基因組學(xué)研究[19]。

表4 雙峰駝CBLA基因注釋信息

藍(lán)色線表示CBLA-Ⅰ類基因，紅色線表示CBLA-Ⅱ基因，黑色線表示CBLA-Ⅲ類基因

目前，人類已知的HLA-Ⅰ類基因共有106個(gè)，其中36個(gè)編碼基因，其余為假基因；HLA-Ⅱ類基因59個(gè)，其中編碼基因33個(gè)，其余為假基因；HLA-Ⅲ類基因59個(gè)，均為編碼基因[20-21]。與人類HLA基因數(shù)量相比，雙峰駝中所注釋到的MHC基因數(shù)量相差較大[22-23]，推測原因可能有以下幾點(diǎn)：1）雙峰駝參考基因組的組裝水平較差；2）雙峰駝MHC基因具有低多樣性特點(diǎn)[24-25]；3）人類與雙峰駝?dòng)H緣關(guān)系較遠(yuǎn)，基因在物種進(jìn)化過程中發(fā)生改變[26-28]。而與親緣關(guān)系較近的牛BoLA相比，雙峰駝MHC基因數(shù)量基本一致（表3）。并且，從表3中能夠明顯觀察到牛和雙峰駝的MHCⅠ類基因的個(gè)數(shù)顯著少于人類MHCⅠ類基因的個(gè)數(shù)[29-31]。因此，比較研究雙峰駝與人類MHC基因在進(jìn)化過程中發(fā)生的差異將是一個(gè)重要的研究課題，這對于進(jìn)一步揭示雙峰駝MHC的作用具有重要意義，也將是今后重點(diǎn)研究的新方向，同時(shí)，也將對牛和雙峰駝的基因組研究起推動(dòng)作用。

在對牛BoLA與雙峰駝pseudo chromosome 進(jìn)行共線性分析后發(fā)現(xiàn)當(dāng)縱坐標(biāo)低于4 000 000時(shí)牛BoLA與雙峰駝pseudo chromosome 共線性區(qū)域出現(xiàn)倒置現(xiàn)象，說明雙峰駝CBLA部分基因出現(xiàn)倒置。這與2016年P(guān)LASIL通過FISH技術(shù)繪制的物理圖譜結(jié)果相似[11]。因此推測該部分基因出現(xiàn)倒置的原因可能是在物種進(jìn)化過程中發(fā)生倒置改變，這種倒置改變增加了MHC基因的多態(tài)性。關(guān)于這一現(xiàn)象的發(fā)生機(jī)制以及意義仍需進(jìn)一步的研究。

4 結(jié)論

本研究運(yùn)用比較基因組學(xué)方法，利用目前已知組裝水平最好的人類HLA基因和與雙峰駝?dòng)H緣關(guān)系較近的牛BoLA基因作為種子序列，成功構(gòu)建了一種新型的用于定位并注釋雙峰駝的MHC基因的方法。使用該方法找到了存在于雙峰駝基因組中的24個(gè)MHC基因，其中Ⅰ類基因有1個(gè)，Ⅱ類基因有10個(gè)，Ⅲ類基因有13個(gè)。分別分布在NW_011511766.1（全長4.1M）、NW_011515227.1（全長1.2M）和NW_011514613.1（全長15K）3條scaffolds上，且Ⅰ類和Ⅲ類基因分布在NW_011515227.1上，而Ⅱ類基因分布在NW_011511766.1和NW_011514613.1上，進(jìn)一步分析得知Ⅱ類基因主要分布在NW_011511766.1 的3.5—4.1M的位置，可繪制雙峰駝MHC的Pseudo chromosome長約1.8M，并對雙峰駝這24個(gè)MHC基因進(jìn)行了信息注釋，為雙峰駝MHC的進(jìn)一步研究奠定了理論基礎(chǔ)。

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（責(zé)任編輯 林鑒非）

Mapping and Annotating of Bactrian Camel MHC Gene by Using the Comparative Genomic Approach

ZHI LiKang, Erdemtu, AN XiWen, WANG Chao, WANG Rui, BAO Huar, WANG XiuZhen

(College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University/Key Laboratory of Clinical Diagnosis and Treatment Technology in Animal Disease, Ministry of Agriculture P. R. China, Hohhot 010018)

【Objective】The objective of this study was to locate and annotate the major histocompatibility complex (MHC) gene sequence of Bactrian camel in order to provide scientific basis for further study on Bactrian camel MHC gene. 【Method】This study used comparative genomics method. The human MHC (HLA) gene coding sequence and bovine MHC (BoLA) gene coding sequence were extracted, compared with Bactrian camel transcripts on the gene sequences through blastn, to identify the scaffolds with higher similarity. By analyzing the sequence of HLA and BoLA gene sequences on their positions on these scaffolds, multiple pieces of scaffolds were spliced to obtain the Pseudo chromosome of Bactrian camel MHC. Then, the human MHC (HLA) gene coding sequence and bovine MHC (BoLA) gene coding sequence were extracted and analyzed with the spliced scaffolds of Bactrian camels through the genomic collinearity analysis. The selected scaffolds could be judged whether or not it was accurate, based on the linear relationship between Pseudo chromosome established by lastz and HLA and BoLA genome sequences; then by analyzing the linear relationship between MHC genes in the two species, MHC gene sequences were extracted from Bactrian camel genomes, and these sequences were genetically annotated; finally, according to the obtained Bactrian camel MHC gene, the phylogenetic tree was drawn to study the evolutionary relationship between their genes. 【Result】By comparing the HLA and BoLA gene coding sequences with the Bactrian camel transcripts through blastn, three scaffolds with high similarity were identified, namely NW_011511766.1 (full-length 4.1M), NW_011515227.1 (full-length 1.2 M) and NW_011514613.1 (15K in total length), and spliced to obtain Bactrian camel MHC Pseudo chromosome; By using the lastz colinear analysis, the HLA gene sequence and the BoLA gene sequence were identified and compared with MHC gene of the Bactrian camel to obtain the colinear region. It was consistent with the spliced Pseudo chromosome, which proved that the selected scaffolds was accurate. It was found that Class-I and Class-III genes were distributed on NW_011515227.1, while Class-II genes were distributed on NW_011511766.1 and NW_011514613.1. Further analysis revealed that Class-II genes were mainly distributed in NW_011511766.1 3.5 to 4.1M position; the sequences that existed in the collinear region were extracted and subjected to blat analysis, namely aligned with the coding sequence of the MHC gene on the Bactrian camel. Results reveal that a total of 24 genes highly similar to bovine BoLA gene were identified in Bactrian camel genome, including 1 of class I gene, 10 of class II gene and 13 of class III gene. The 24 MHC genes of Bactrian camels were annotated and phylogenetic trees were mapped. The results showed that the annotated Class-I and Class-II genes were on the same branch. 【Conclusion】The method of locating and annotating the MHC gene sequence in Bactrian camel was established by comparative genomics. The MHC gene sequence of Bactrian camel was mapped to three scaffolds, 24 MHC genes were found and annotated, and the Pseudo chromosome of the MHC gene of the Bactrian camel was drawn, which laid the foundation for further study of Bactrian camel MHC gene.

Bactrian camel; MHC; CBLA; BoLA; HLA; comparative genomic

10.3864/j.issn.0578-1752.2018.18.015

2017-12-13；

2018-07-06

國家自然科學(xué)基金（31360591）

支立康，E-mail：15849121059@163.com。通信作者額爾敦木圖，Tel：0471-4309179；E-mail：eedmt@imau.edu.cn