原子吸收分光光度法測定牛黃解毒丸中雄黃的含量

貢慶欣

（吉林省通化市食品藥品檢驗所化學(xué)室，吉林 通化 134000）

牛黃解毒丸為清熱解毒類常用中藥，被列入國家基本藥物目錄，現(xiàn)收載于《中華人民共和國藥典》2015年版一部[1]。該方始見于元代 (1278年)《咽喉脈證通論》，由人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草8味藥組成，臨床上主要用于火熱內(nèi)盛、咽喉腫痛、牙齦腫痛、口舌生瘡、目赤腫痛[1]。牛黃解毒丸歷經(jīng)數(shù)百年發(fā)展，因其用途廣泛、療效確切，成為深受患者青睞的清熱解毒名方，并發(fā)展出牛黃解毒片等新劑型，得到越來越多的應(yīng)用[2]。

雄黃收載于2015年版《中國藥典》一部，其主要成分是二硫化二砷 (AS2S2)，是國務(wù)院在《醫(yī)療用毒性藥品管理辦法》中規(guī)定的28種毒性中藥之一[1，3]。雄黃入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》 （稱黃食石），在我國臨床應(yīng)用已有兩千多年的歷史，是中醫(yī)內(nèi)治外用的常用藥之一，也是很多復(fù)方中藥的重要組成，許多常用中藥制劑都含有雄黃，如安宮牛黃丸、牛黃解毒丸、局方至寶散等[1，3-4]。由于雄黃含砷，臨床屢有報道大量或長時間服用含雄黃或外用雄黃的制劑造成急、慢性中毒，因此雄黃及其復(fù)方的安全性問題受到了國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的質(zhì)疑，影響了含雄黃中成藥的國際聲譽[3]。近年來含雄黃中成藥多次被曝出重金屬（主要是砷）超標(biāo)等問題，其安全性受到越來越多的關(guān)注[5-9]。牛黃解毒丸作為最常用的含雄黃中成藥，2015年版《中國藥典》一部對其雄黃僅規(guī)定了顯微鑒別和三氧化二砷檢查，沒有含量方面的規(guī)定，無法對雄黃質(zhì)量進行有效控制[1]。為完善藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證臨床用藥安全有效，本實驗采用原子吸收分光光度法對雄黃中的砷進行了定量分析，介紹如下。

1 試劑與試藥

Agilent 200 SeriesAA型原子吸收分光光度計及工作站 (美國Agilent公司)；CEM MARS高通量密閉微波消解儀 (美國CEM公司)；砷空心陰極燈 (北京有色金屬研究總院)，砷 (As)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液 (1000 μg/mL，編號GBW08611，批號17123，中國計量科學(xué)研究院)；AL104電子天平；鹽酸和硝酸均為優(yōu)級純，水為超純水；牛黃解毒丸15批，均為市售樣品，來自12家藥品生產(chǎn)企業(yè)。

2 方法與結(jié)果

2.1 實驗方法

2.1.1 對照品貯備溶液的制備 精密量取砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加水制成每 1 mL含砷100 μg的溶液，即得。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備 精密量取砷對照品貯備溶液適量，加10%混合酸 [硝酸-鹽酸 (4∶1)]溶液制成每1 mL 含砷0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg的溶液，作為砷標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品10丸，剪碎，混勻，精密稱取0.2 g，置聚四氟乙烯微波消解罐中，加入硝酸4 mL、鹽酸1 mL，在微波消解儀中消解，消解條件：功率1600 W，5 min內(nèi)由室溫升至120℃，在120℃保持5 min，在5 min內(nèi)由120℃升溫至160℃，在160℃保持5 min，然后5 min內(nèi)由160℃升溫至180℃，在180℃保持20 min，最后25 min內(nèi)由180℃降溫至30℃。消解液放冷，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加10%混合酸[硝酸-鹽酸 (4∶1)]溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。同法制備試劑空白溶液。

2.1.4 測定法 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液、供試品溶液和試劑空白溶液，照原子吸收分光光度法 (火焰原子化器，標(biāo)準(zhǔn)曲線法)[10]，在 193.7 nm波長處測定，計算，即得。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 陰性干擾試驗 按處方工藝制備不含雄黃的牛黃解毒丸陰性樣品，取6份，按2.1實驗方法測定砷的含量，結(jié)果6份樣品均未檢出砷。說明樣品中除雄黃外的其他7味藥材對砷的含量測定沒有干擾，該方法專屬性良好。

2.2.2 線性關(guān)系考察 精密量取砷對照品貯備溶液適量，加 10%混合酸 [硝酸-鹽酸 (4∶1)]溶液制成每1 mL含砷0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg的溶液，照原子吸收分光光度法 (火焰原子化器，標(biāo)準(zhǔn)曲線法)[10]，在193.7 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo) (Y，mL)，以濃度為橫坐標(biāo) (X，μg/mL)，得回歸方程Y=5.295×10-3x+7.996×10-3，r=0.999 5。結(jié)果表明砷的濃度在0～20 μg/mL與吸光度之間線性關(guān)系良好。

2.2.3 重復(fù)性試驗 稱取同一批號牛黃解毒丸 (批號15090832)，剪碎，混勻，取約0.2 g，精密稱定，共6份，按2.1項下方法測定砷的含量，結(jié)果平均含量為21.06 mg/g， RSD為1.26%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗 稱取同一批號牛黃解毒丸 (批號15090832)，剪碎，混勻，取約0.2 g，精密稱定，共6份，分別放置0、2、4、8、12、24 h，按2.1項下方法測定砷的含量，結(jié)果RSD為1.35%，表明在24 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.2.5 加樣回收試驗 精密稱取已知砷含量的牛黃解毒丸 (批號15090832，As含量21.10 mg/g)6份，每份約0.1 g，精密加入砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液 (1000 μg/mL)2 mL，混勻，按2.1實驗方法測定回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，該方法的準(zhǔn)確性良好。

表1 回收率測定結(jié)果 (n=6)

2.3 樣品中砷的測定 精密稱取15批不同批號的牛黃解毒丸樣品，每批隨機取3份，每份約0.2 g，按2.1方法測定砷的含量。結(jié)果見表2。

表2 牛黃解毒丸中砷含量測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

目前測定砷含量的方法主要有容量法[11-12]、原子吸收分光光度法 (AAS)[13-14]、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法 (ICP-AES)[15]、電感耦合等離子體質(zhì)譜法 (ICPMS)[16-17]等。與AAS法相比，容量法存在操作繁瑣、靈敏度低、取樣量大、有時消化不完全等缺點；ICP-AES法和ICP-MS由于靈敏度太高，當(dāng)樣品中砷含量較高時，容易導(dǎo)致儀器被污染。AAS法靈敏度高、專屬性強，適合應(yīng)用于中成藥中雄黃的含量測定。

由于本品處方中雄黃含量較高，用石墨爐原子化器容易導(dǎo)致石墨爐被污染，用氫化物發(fā)生原子化器操作比較繁瑣，選擇火焰原子化器操作相對簡便，能夠滿足實驗要求。

實驗中選擇不同的消解試劑進行比較，即硝酸、硝酸-鹽酸 (4∶1)、硝酸-鹽酸 (3∶2)、硝酸-過氧化氫 (4∶1)，結(jié)果選擇硝酸-鹽酸 (4∶1)消解效果最好。同時還對微波消解的不同升溫條件進行了比較，結(jié)果在正文中的升溫條件下消解最完全。

采用本文方法對15批牛黃解毒丸中雄黃的砷含量進行了測定，15批供試品中砷含量為8.32～21.10 mg/g，按每丸重3 g計算，每丸砷含量在24.96～63.30 mg，不同廠家、批次的樣品含量差異較大，最高與最低相差超過1倍。分析原因可能是（1）有的企業(yè)對所采購的雄黃藥材未進行含量檢測，或未按 《中國藥典》規(guī)定對雄黃進行水飛炮制，可能采用不合格雄黃生產(chǎn)； (2)由于《藥典》對牛黃解毒丸中的雄黃未規(guī)定含量測定，有的企業(yè)在生產(chǎn)過程中有意減少雄黃的投料量，未按照處方規(guī)定加入足量的雄黃。

由于牛黃解毒丸處方中只有雄黃中含砷，可以通過測定砷的含量控制制劑中雄黃的含量。

建議 《中國藥典》 增加牛黃解毒丸中雄黃的含量測定，以有效控制生產(chǎn)投料，保證藥品質(zhì)量。