血管內(nèi)皮祖細胞在治療動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞中的作用

宰青青，潘 婷，楊勝萍

（銅仁職業(yè)技術學院，貴州 銅仁 554300）

動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞是一種常見的血管病變。目前臨床上治療此病的主要方法包括實施介入手術、藥物治療等。有研究指出，動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞的發(fā)生、發(fā)展與患者存在血管內(nèi)皮細胞損傷密切相關。夏文豪等[1]的研究結(jié)果表明，通過補充血管內(nèi)皮祖細胞可修復受損的血管，從而可有效地根治動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞。為了進一步評價用血管內(nèi)皮祖細胞治療動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞的效果，筆者進行了以下研究。

1 材料與方法

1.1 實驗對象

選取60只Wistar大鼠作為實驗對象。這60只大鼠均為雄性；其體重為200～300g。將其建立為動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞大鼠模型。方法是：對大鼠的股動脈進行鉗夾、結(jié)扎，對其股動脈的分支血管進行離斷。然后使用高脂飼料對其進行為期8周的飼養(yǎng)。

1.2 儀器與試劑

本研究中所使用的血管內(nèi)皮祖細胞是由對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞進行分離培養(yǎng)誘導獲得的第4代血管內(nèi)皮祖細胞，其存活率在90%以上。本研究中所使用的儀器主要包括冰臺、石蠟切片機、石蠟包埋機、超凈工作臺、高壓滅菌器、圖像采集系統(tǒng)、高速離心機等。本研究中所使用的試劑主要包括胎牛血清、L-DMEM培養(yǎng)基干粉、PBS緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液、過氧化氫溶液等。

1.3 方法

將本組60只大鼠隨機分為模型組、對照組和實驗組（20只/組）。為實驗組大鼠肌內(nèi)注射血管內(nèi)皮祖細胞溶液。方法是：在大鼠雙下肢的股四頭肌、腓腸肌內(nèi)注射1ml濃度為4～5×106/ml的血管內(nèi)皮祖細胞溶液。為對照組大鼠肌內(nèi)注射生理鹽水。方法是：在大鼠雙下肢的股四頭肌、腓腸肌內(nèi)注射1ml的生理鹽水。對模型組大鼠不進行任何處理。在14d后處死三組大鼠。對其進行解剖，以獲取其股動脈根部血管的切片。使用蘇丹Ⅲ對切片進行染色。使用圖像自動分析系統(tǒng)對大鼠股動脈根部血管切片中斑塊的面積、斑塊負荷進行測定，并采用免疫組化技術測定其Foxp3的表達水平。

1.4 觀察指標

對比三組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平。

1.5 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 20.0軟件對本文中的數(shù)據(jù)進行分析。大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平等計量資料用（±s）表示，兩組間的比較采用t檢驗，多組間的比較采用F檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

模型組大鼠與對照組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。實驗組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷均小于模型組大鼠和對照組大鼠，其Foxp3的表達水平高于模型組大鼠和對照組大鼠，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。詳見表 1。

表1 對比三組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平（±s）

表1 對比三組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷和Foxp3的表達水平（±s）

注：*與實驗組相比，P＜0.05。

組別（n=20）斑塊面積（×105μm2）斑塊負荷（%）Foxp3的表達水平模型組 53.4±3.0* 37.9±2.1* 1.62±0.34*對照組 52.8±5.4* 37.9±2.0* 1.58±0.26*實驗組 44.9±5.4 34.4±1.8 2.31±0.76

3 討論

3.1 動脈粥樣硬化與血管內(nèi)皮祖細胞的關系

臨床研究發(fā)現(xiàn)，動脈粥樣硬化的發(fā)生與血管內(nèi)皮功能障礙密切相關。血管內(nèi)皮細胞受血脂異常等因素的影響，易發(fā)生功能異常，從而可導致血管平滑肌細胞遷移、血管張力異常等一系列的病理變化，最終可引發(fā)血管內(nèi)皮損傷及動脈粥樣硬化[2]。饒璇等[3]研究指出，通過補充血管內(nèi)皮祖細胞可修復受損的血管，從而可延緩動脈粥樣硬化的發(fā)生。

3.2 用血管內(nèi)皮祖細胞治療動脈粥樣硬化的療效

Foxp3是一種轉(zhuǎn)錄因子，能夠抑制自身反應性T細胞的活性。此轉(zhuǎn)錄因子的表達水平越高，表示受損血管修復的效果越好[4]。本次研究的結(jié)果顯示，實驗組大鼠股動脈根部血管斑塊的面積、斑塊負荷均小于模型組大鼠和對照組大鼠，其Foxp3的表達水平高于模型組大鼠和對照組大鼠。

綜上所述，用血管內(nèi)皮祖細胞治療動脈粥樣硬化所致下肢動脈狹窄或閉塞的效果確切，可有效地抑制此病模型大鼠血管斑塊的形成。