半夏白術(shù)天麻湯對(duì)癲癇大鼠海馬miRNA—146a—5p表達(dá)的影響及生物信息學(xué)分析

田茸 舍雅莉 董曉麗 史正剛 陳麗 程小麗 王宇

摘要：目的 通過(guò)對(duì)癲癇大鼠海馬miRNA-146a-5p進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)及信號(hào)通路生物信息學(xué)分析，為探討癲癇的可能發(fā)病機(jī)制及半夏白術(shù)天麻湯抗癲癇作用機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。方法 采用氯化鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)制作癲癇發(fā)作大鼠模型。將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、中藥組，每組20只。使用miRNA芯片技術(shù)分析檢測(cè)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞miRNA表達(dá)譜。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miRNA-146a-5p表達(dá)。利用miRDB對(duì)miRNA-146a-5p進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)，并運(yùn)用miRTarBase、DAVID進(jìn)行GO功能和KEGG信號(hào)通路的富集分析。結(jié)果 行為學(xué)觀察顯示，中藥組大鼠發(fā)作次數(shù)和級(jí)別均較模型組明顯降低。miRNA芯片結(jié)果顯示，模型組miRNA-146a-5p表達(dá)水平是正常組的2.107倍（P<0.05），經(jīng)半夏白術(shù)天麻湯治療后其表達(dá)量降至1.377倍（P<0.05）。RT-PCR結(jié)果與芯片結(jié)果一致，表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。miRNA-146a-5p靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果共有140個(gè)靶基因，GO注釋共得到14個(gè)GO生物學(xué)過(guò)程注釋信息（P<0.05），9個(gè)細(xì)胞組分注釋信息（P<0.05），11個(gè)分子功能注釋信息（P<0.05）。KEGG生物通路富集顯示，其140個(gè)靶基因顯著富集于EB病毒感染信號(hào)通路，以及甲狀腺激素信號(hào)通路上（P<0.05）。結(jié)論 miRNA-146a-5p與癲癇發(fā)生后的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，半夏白術(shù)天麻湯可能通過(guò)控制癲癇發(fā)生后的炎癥反應(yīng)發(fā)揮抗癲癇的效應(yīng)。

關(guān)鍵詞：癲癇；海馬；miRNA-146a-5p；半夏白術(shù)天麻湯；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.07.009

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2018）07-0034-07

Abstract： Objective To lay the foundation for studying the possible pathogenesis of epilepsy and the anti-epileptic mechanism of Banxia Baizhu Tianma Decoction through the bioinformatic analysis of target gene prediction and signal pathway of miRNA-146a-5p in hippocampus of epileptic rats. Methods Lithium-pilocarpine was used to induce seizures in rat models. The experiment rats were randomly divided into normal control group， model group， Banxia Baizhu Tianma Decoction group， with 20 rats in each group. The method of miRNA expression profiling was used to observe the miRNA differential expression of hippocampus neuron cell of rats. The expression level of miRNA-146a-5p was detected by real-time quantitative PCR. MiRDB was used for target gene prediction of miRNA-146a-5p， and miRTarBase and DAVID were used for enrichment analysis on the GO function and KEGG signaling pathway. Results The attack times and grades of the rats in Banxia Baizhu Tianma Decoction group were significantly lower than those in the model group from behavioral observation. MiRNA microarray analysis showed that the expression level of miRNA-146a-5p in model group was 2.107 times normal control group （P<0.05）， and the expression level decreased to 1.377 times after treatment with Banxia Baizhu Tianma Decoction （P<0.05）. The results of RT-PCR was consistent with that of miRNA microarray， with statistical significance （P<0.05）. MiRNA-146a-5p target gene prediction results had 140 target genes by GO， and there were 14 annotation information of biological process （P<0.05）， 9 annotation information of cellular component （P<0.05）， 11 annotation information of molecular function （P<0.05）. Enrichment analysis of KEGG biological pathway showed that 140 target genes of miRNA-146a-5p were enriched in EB virus infection signal pathway and thyroid hormone signaling pathway （P<0.05）. Conclusion miRNA-146a-5p is closely related to the inflammatory reaction after epilepsy， and Banxia Baizhu Tianma Decoction can control epilepsy possibly by controlling the inflammatory reaction after epilepsy.

Keywords： epilepsy； hippocampus； miRNA-146a-5p； Banxia Baizhu Tianma Decoction； rats

癲癇是一種由于腦部神經(jīng)元異常放電導(dǎo)致瞬時(shí)、反復(fù)發(fā)作的大腦功能紊亂疾病，病理機(jī)制復(fù)雜，包括神經(jīng)細(xì)胞凋亡、神經(jīng)膠質(zhì)再生、炎癥反應(yīng)等，其分子機(jī)制涉及基因轉(zhuǎn)錄、翻譯、翻譯后修飾等遺傳信息鏈中多個(gè)環(huán)節(jié)。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類在生物進(jìn)化過(guò)程中具有高度保守性及穩(wěn)定性的內(nèi)源性非編碼RNA，其主要作用是通過(guò)負(fù)性調(diào)控mRNA來(lái)協(xié)調(diào)多種靶蛋白的合成，從而影響生命進(jìn)程。在神經(jīng)系統(tǒng)中，miRNA參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的生理、病理及生物反饋調(diào)節(jié)，如神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育、樹突突觸形成、膠質(zhì)細(xì)胞增生、神經(jīng)細(xì)胞凋亡及壞死等[1]。本研究運(yùn)用基因芯片檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠間的差異miRNA，選擇其中的miRNA-146a-5p作為目標(biāo)，通過(guò)生物信息學(xué)工具對(duì)miRNA-146a-5p靶基因的功能及其信號(hào)通路等進(jìn)行多層次分析，以miRNA-146a為切入點(diǎn)探討癲癇的可能發(fā)病機(jī)制，以及具有熄風(fēng)化痰作用的經(jīng)典方劑半夏白術(shù)天麻湯的抗癲癇作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)健康雄性Wistar大鼠60只，9周齡，體質(zhì)量（200±10）g，成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（川）2013-24。飼養(yǎng)于溫度18～29 ℃、相對(duì)濕度40%～70%環(huán)境，無(wú)菌條件下飼養(yǎng)。

1.2 藥物

半夏白術(shù)天麻湯（由法半夏、天麻、茯苓、橘紅、白術(shù)、甘草組成，比例為3∶2∶2∶2∶5∶1），成都中醫(yī)藥大學(xué)制劑室加工，按照處方比例取以上藥材，用8倍量70%乙醇每次回流2 h，提取3次，得醇提取液和醇提取藥渣。合并3次醇提取液，過(guò)濾，濾液減壓回收乙醇后得醇提取濃縮液，醇提取濃縮液干燥得干膏，干膏粉碎成細(xì)粉，加入揮發(fā)油。實(shí)驗(yàn)用不含賦形劑的浸膏，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 主要試劑與儀器

氯化鋰、阿托品、匹魯卡品、水合氯醛，上海伯豪生物技術(shù)有限公司；miRNA Complete Labeling and Hyb Kit，Gene Expression Wash Buffer Kit，Agilent公司；miScript II RT Kit，美國(guó)QIAGEN；miRcute miRNA qPCR Detection Kit SYBR Green，天根生化科技（北京）有限公司；引物由上海生工生物工程有限公司合成。芯片：Hybridization Chamber， stainless，Hybridization Chamber gasket slides 8 microarrays/slide， 5 slides/box，Microarray Scanner，Agilent公司。定量PCR儀，7900 HT Sequence Detection System（美國(guó)BI公司）。

1.4 分組、造模及給藥

將60只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組和中藥組，每組20 只。除正常組大鼠外，其余2組均腹腔注射127 mg/kg氯化鋰進(jìn)行預(yù)處理，24 h后腹腔注射阿托品1 mg/kg，30 min后按35 mg/kg比例腹腔注射新配制的匹魯卡品溶液。30 min后未引起癲癇發(fā)作的以每間隔10 min注射1次匹魯卡品10 mg/kg，直至癲癇發(fā)作達(dá)到Ⅳ或Ⅴ級(jí)；誘發(fā)癲癇發(fā)作1 h后，腹腔注射300 mg/kg 10%水合氯醛和1 mg/kg阿托品以停止癲癇發(fā)作。正常組大鼠給予腹腔注射等劑量生理鹽水。根據(jù)Racine分級(jí)[2]，大鼠癲癇發(fā)作分為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ級(jí)。0級(jí)：無(wú)任何反應(yīng)；Ⅰ級(jí)：凝視、咀嚼和須動(dòng)；Ⅱ級(jí)：點(diǎn)頭或濕狗樣抖動(dòng)、搔抓；Ⅲ級(jí)：前肢局限性陣攣；Ⅳ級(jí)：伴有后肢站立的全身強(qiáng)直性發(fā)作；Ⅴ級(jí)：伴有站立并摔倒的全身強(qiáng)直-陣攣性發(fā)作。本實(shí)驗(yàn)以連續(xù)出現(xiàn)3次Ⅳ級(jí)或Ⅳ級(jí)以上的癇性發(fā)作為模型復(fù)制成功的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。造模成功后1 d，中藥組給予半夏白術(shù)天麻湯藥液灌胃，按70 kg質(zhì)量成人量換算成大鼠等效劑量，每日1次，劑量2 mL，相當(dāng)于1.548 g原藥材/mL，共30 d，其余2組給予等量蒸餾水同步灌胃。

1.5 標(biāo)本采集

給藥后第31日，腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉，斷頭取腦。于生理鹽水冰面鈍性分離大鼠雙側(cè)海馬組織，置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的器械均進(jìn)行去酶處理。

1.6 miRNA芯片檢測(cè)大鼠海馬組織miRNA-146a-5p的表達(dá)

樣品RNA的標(biāo)記：實(shí)驗(yàn)樣品RNA采用Agilent miRNA芯片配套的試劑盒，按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程的標(biāo)記部分對(duì)樣品中的miRNA分子進(jìn)行熒光標(biāo)記。芯片雜交：按照Agilent miRNA芯片配套提供的標(biāo)準(zhǔn)操作流程和配套試劑盒的雜交部分進(jìn)行樣品雜交實(shí)驗(yàn)。在滾動(dòng)雜交爐中55 ℃，20 r/min，滾動(dòng)雜交20 h。雜交完成后在洗缸中洗片，洗片所用的試劑為Gene Expression Wash Buffer Kit。芯片掃描：芯片結(jié)果采用Agilent Microarray Scanner進(jìn)行掃描，軟件設(shè)置Scan resolution=5 μm（大鼠），PMT 100%，用Feature Extraction software 10.7.1.1讀取數(shù)據(jù)，最后采用R語(yǔ)言程序包AgiMicroRna進(jìn)行歸一化處理，所用算法為Quantile。差異基因基本信息：原始數(shù)據(jù)歸一化后用Fold-change（表達(dá)差異倍數(shù)）及t檢驗(yàn)對(duì)差異基因進(jìn)行篩選。篩選條件：①Fold Change（linear）分≤閾值或Fold Change（linear）≥閾值；②t檢驗(yàn)P<閾值。

1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證大鼠海馬組織miRNA-146a-5p的表達(dá)

組織總RNA提取與質(zhì)量檢測(cè)及反轉(zhuǎn)錄合成模板cDNA：取適量各樣本組織，分別取1 μL各組織RNA 樣品用核酸定量分析儀測(cè)定其OD260/OD280均在1.8～2.0，經(jīng)總RNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，提取的RNA符合純度要求，可用于后續(xù)PCR。按反轉(zhuǎn)錄試劑盒要求操作，所得單鏈cDNA置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?實(shí)時(shí)熒光定量PCR以U6作為內(nèi)參基因，miRNA-146a-5p引物序列為：5'-TGAGAACTGAATT CCATGGGTT-3'，通過(guò)融解曲線分析，為單一峰，說(shuō)明PCR擴(kuò)增特異性較好，樣本3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的重復(fù)性較好，得到各擴(kuò)增反應(yīng)的Ct值。連續(xù)檢測(cè)熒光并記錄擴(kuò)增曲線，采用樣點(diǎn)擬合法分析結(jié)果得到目的基因和U6的Ct值，用相對(duì)定量2-ΔΔCt法對(duì)待測(cè)miRNA進(jìn)行分析。

1.8 生物信息學(xué)分析

采用miRDB對(duì)miRNA-146a-5p靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)。并運(yùn)用miRTarBase（該數(shù)據(jù)庫(kù)收錄了文獻(xiàn)報(bào)道的、有實(shí)驗(yàn)證據(jù)的microRNA與靶基因關(guān)系）對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。用DAVID（https：//david.ncifcrf.gov/home.jsp）在線工具進(jìn)行GO功能富集分析和KEGG信號(hào)通路富集分析。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel2015軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以—x±s表示，組間比較用方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)觀察結(jié)果

造模后，模型組和中藥組大鼠出現(xiàn)節(jié)律性點(diǎn)頭，濕狗樣震顫，反復(fù)頭頸上仰，前肢交叉伴前沖動(dòng)作，全身強(qiáng)直抖動(dòng)，伴發(fā)聲音，繼而出現(xiàn)反復(fù)前肢陣攣、伴站立、跌倒、翻轉(zhuǎn)，進(jìn)入癲癇持續(xù)狀態(tài)。3～14 d，大鼠出現(xiàn)精神萎靡、進(jìn)食活動(dòng)減少、消瘦，精神緊張、怕人、畏懼聲響，沖撞籠欄，甚至咬人等易激惹狀態(tài)。15～30 d，模型組大鼠出現(xiàn)癲癇自發(fā)發(fā)作，發(fā)作級(jí)數(shù)在Ⅰ～Ⅴ級(jí)之間不等，自發(fā)發(fā)作后大鼠高度緊張、興奮、易激惹，甚至躁狂。發(fā)作頻繁時(shí)，模型組大鼠進(jìn)食明顯減少，毛發(fā)發(fā)黃、無(wú)光澤。中藥組大鼠發(fā)作次數(shù)和級(jí)別均較模型組大鼠明顯降低，進(jìn)食、體質(zhì)量、毛發(fā)等一般情況也較模型組大鼠良好。正常組大鼠一切表現(xiàn)均正常。

2.2 大鼠海馬組織miRNA-146a-5p的差異表達(dá)

利用miRNA 芯片技術(shù)分析正常組、模型組和中藥組的miRNA表達(dá)譜，在檢測(cè)的758種miRNA中，模型組較正常組共有49種miRNA產(chǎn)生差異表達(dá)，其中造模后26種miRNA顯著上調(diào)，23種顯著下調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；中藥組較模型組共有38種miRNA產(chǎn)生差異表達(dá)，其中32種miRNA顯著上調(diào)，6種顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組miRNA-146a-5p的表達(dá)較正常組明顯上調(diào)，其差異表達(dá)倍數(shù)是2.030；中藥組較模型組明顯下調(diào)，其差異表達(dá)倍數(shù)是0.590，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；中藥組與正常組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 大鼠海馬組織miRNA-146a-5p的表達(dá)情況

模型組大鼠海馬組織miRNA-146a-5p表達(dá)明顯升高（P<0.05），且表達(dá)量是正常組的2.107倍；經(jīng)半夏白術(shù)天麻湯治療后中藥組大鼠海馬組織miRNA-146a-5p表達(dá)明顯降低（P<0.05），其表達(dá)量降至1.377倍。RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果與miRNA芯片分析結(jié)果趨勢(shì)一致。

2.4 miRNA-146a-5p靶基因預(yù)測(cè)結(jié)果

用miRDB對(duì)miRNA-146a-5p靶基因的進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)的靶基因共有140個(gè)，其中預(yù)測(cè)評(píng)分在80分以上共37個(gè)靶基因，見表1。并運(yùn)用miRTarBase數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)主要集中在6個(gè)靶基因上，見表2。

2.5 miRNA-146a-5p靶基因GO分析結(jié)果

針對(duì)以上miRNA-146a-5p的140個(gè)預(yù)測(cè)靶基因，通過(guò)GO注釋描述共得到14個(gè)GO生物學(xué)過(guò)程（biological process，BP）注釋信息（見表3）、9個(gè)細(xì)胞組分（cellular component，CC）注釋信息（見表4）及11個(gè)分子功能（molecular function，MF）注釋信息（見表5）。BP注釋信息主要集中在聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控、蛋白質(zhì)定位的建立、負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控DNA模板、細(xì)胞間連接組織、心臟發(fā)育、基因表達(dá)負(fù)調(diào)控、剪接調(diào)控、酮體分解、核轉(zhuǎn)錄mRNA降解過(guò)程中核酸外切、血管平滑肌細(xì)胞的發(fā)育、細(xì)胞反應(yīng)的UV-C、肌性間隔形態(tài)、細(xì)胞黏附、大腦發(fā)育等；CC注釋信息主要集中在核仁、細(xì)胞核、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)、核斑點(diǎn)、蛋白復(fù)合物、突觸、染色質(zhì)；MF注釋信息主要集中在聚（A）RNA結(jié)合、蛋白復(fù)合物的結(jié)合、蛋白結(jié)合、蛋白體的活動(dòng)、蛋白激酶活性、Toll樣受體結(jié)合、組蛋白去乙酰化酶結(jié)合、泛素蛋白連接酶的活性、PDZ結(jié)構(gòu)域結(jié)合、相同蛋白結(jié)合、鈣黏蛋白結(jié)合參與細(xì)胞與細(xì)胞間的黏附。

2.6 KEGG通路分析結(jié)果

在GO注釋分類的基礎(chǔ)上，利用已有生物通路數(shù)據(jù)，對(duì)基因集合中的140個(gè)基因進(jìn)行生物通路富集分析。結(jié)果顯示，在經(jīng)典通路數(shù)據(jù)庫(kù)KEGG中miRNA-146a-5p顯著富集于EB病毒感染信號(hào)通路，以及甲狀腺激素信號(hào)通路上，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表6。

3 討論

癲癇的發(fā)生與神經(jīng)細(xì)胞的凋亡、突觸聯(lián)系重建、神經(jīng)膠質(zhì)纖維細(xì)胞增生、異常通路形成及炎癥反應(yīng)密切相關(guān)[3-4]。反復(fù)的癲癇發(fā)作可導(dǎo)致大腦海馬神經(jīng)元凋亡，形成異常興奮性突觸環(huán)路，最終促進(jìn)難治性顳葉癲癇形成。研究表明，腦內(nèi)的炎癥過(guò)程是癲癇發(fā)作的一個(gè)重要機(jī)制，即癲癇發(fā)生后啟動(dòng)一系列炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥遞質(zhì)大量釋放。一方面炎癥遞質(zhì)可引起血管炎，破壞血腦屏障，加重腦水腫及神經(jīng)損害；另一方面，炎癥遞質(zhì)可調(diào)節(jié)興奮性氨基酸的釋放和影響離子通道結(jié)構(gòu)和表達(dá)，從而增高神經(jīng)元細(xì)胞興奮性，進(jìn)一步促進(jìn)癲癇發(fā)作。所以，炎癥反應(yīng)對(duì)于癲癇發(fā)作的持續(xù)存在起著重要作用[5]。

有研究表明，miRNA-146a通過(guò)轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控核因子-κB（NF-κB）、白細(xì)胞介素（IL）-1等表達(dá)，影響癲癇發(fā)作后炎癥反應(yīng)，提高癲癇腦組織miRNA-146a的水平可以減輕炎癥反應(yīng)，從而治療癲癇[6]。Omran A等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在幼年大鼠顳葉內(nèi)側(cè)癲癇模型中，不同時(shí)期大鼠海馬IL-1與miRNA-146a的水平成反比，提示miRNA-146a在炎癥反應(yīng)中起負(fù)性調(diào)控作用，即在癲癇過(guò)程中起著“抗炎”作用。但也有研究表明，輕型腦創(chuàng)傷后皮質(zhì)區(qū)miRNA-146a表達(dá)顯著上調(diào)，NF-κB通過(guò)miRNA-146a上游調(diào)控元件增強(qiáng)miRNA-146a的轉(zhuǎn)錄水平，NF-κB-miRNA-146a途徑可能在促進(jìn)腦創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用[8]。本研究通過(guò)基因芯片和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)出模型組大鼠miRNA-146a-5p表達(dá)顯著上調(diào)，經(jīng)具有熄風(fēng)化痰作用的半夏白術(shù)天麻湯治療后miRNA-146a-5p的表達(dá)水平顯著下調(diào)。

通過(guò)miRNA-146a-5p預(yù)測(cè)靶基因并針對(duì)靶基因進(jìn)行GO及KEGG通路分析，GO生物學(xué)過(guò)程主要集中在對(duì)RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄、DNA模板轉(zhuǎn)錄、基因表達(dá)的負(fù)調(diào)控、剪接調(diào)控、核轉(zhuǎn)錄mRNA降解過(guò)程中核酸外切，以及參與心臟發(fā)育和大腦發(fā)育；GO細(xì)胞組分主要集中在核仁、細(xì)胞核、核質(zhì)、突觸、染色質(zhì)等；GO分子功能主要集中蛋白結(jié)合、蛋白體活動(dòng)、蛋白激酶活性、Toll樣受體結(jié)合、細(xì)胞間黏附等。

KEGG通路分析miRNA-146a-5p顯著富集于EB病毒感染信號(hào)通路，其中涉及的關(guān)鍵基因有MDM2原癌基因（Mdm2）、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6 （Traf6）、槐定堿（SP）、IL-1受體相關(guān)激酶1（Irak1）和脾相關(guān)酪氨酸激酶（Syk）等，大量研究集中在Mdm2與p53相關(guān)性上，有研究表明SCYL1BP1是存在于軸突生長(zhǎng)物中的一種新的轉(zhuǎn)錄激活因子，通過(guò)直接調(diào)控MDM2/p53依賴途徑，可能在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和損傷后軸突再生中發(fā)揮重要作用[9]。研究表明p62通過(guò)影響TRAF6泛素化調(diào)節(jié)神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的NF-κB活化[10]。SP可能是通過(guò)下調(diào)TRAF6的表達(dá)和上調(diào)ERK1/2磷酸化的表達(dá)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[11]。慢性的IL-18水平升高可能是通過(guò)增加Irak1的水平和NF-κB的活性加重胰島素抵抗，增強(qiáng)血管炎癥和重塑的[12]。Syk通過(guò)血管平滑肌細(xì)胞增殖和表型調(diào)制對(duì)血管重塑起著重要的作用，通過(guò)連接免疫受體到下游效應(yīng)分子出現(xiàn)在小腦、海馬、視覺(jué)和嗅覺(jué)系統(tǒng)神經(jīng)元的不同結(jié)構(gòu)[13]。

綜上，miRNA-146a-5p與癲癇發(fā)生后的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，但具體發(fā)生機(jī)制還有待進(jìn)一步研究，而半夏白術(shù)天麻湯則有可能通過(guò)控制癲癇發(fā)生后的炎癥反應(yīng)起到抗癲癇的效果。本研究為下一步深入研究癲癇發(fā)病機(jī)制和半夏白術(shù)天麻湯的治療機(jī)制提供了切入點(diǎn)。

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（收稿日期：2017-10-18）

（修回日期：2017-11-21；編輯：華強(qiáng)）